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盐诱导激酶2的研究进展被引量：3: 2014年; 盐诱导激酶(salt-inducible kinase,SIK)是属于单磷酸腺苷激活蛋白激酶/蔗糖非酵解1(adenosine monophosphate-activated protein kinase and sucrose non-fermenting 1,AMPK/SNF1)家族的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。SIK自1998年被发现以来,越来越多的功能被人们证实和认可。现已发现,SIK在能量代谢、细胞信号转导、细胞周期、肿瘤、黑素原生成等诸多方面有重要作用。通过查阅近些年相关文献,在此重点总结一下SIK2功能的研究进展。; 王建校李珊珊赵珊珊杨德岭顾永清; 关键词：脂肪细胞肝细胞黑色素神经元存活细胞周期

酵母双杂交技术筛选人PIF1解螺旋酶相互作用蛋白: 2013年; 目的应用酵母双杂交技术研究筛选与人类PIF1解螺旋酶相互作用的蛋白。方法应用酵母双杂交技术，以人PIF1蛋白PINT功能域（1～180氨基酸）和解螺旋酶模序（167～926氨基酸）为诱饵，与HeLa细胞cDNA文库杂交，筛选能与人PIF1蛋白不同功能域相互作用的蛋白。结合生物信息学分析，一对一酵母回复性杂交及β-galactosidase实验等确定阳性克隆。结果 PIF1蛋白PINT功能域杂交共获得17个阳性克隆，生物信息学分析有3个阳性基因，它们分别是CCNDBP1、OTUD5、CAP1。而PIF1蛋白解螺旋酶模序未获得阳性克隆。结论 PIF1蛋白的PINT功能域对调控PIF1的生理功能具有非常重要的作用。; 王攀王建校李珊珊刘晓丹王豫周平坤顾永清; 关键词：酵母双杂交蛋白质相互作用

人PIF1及其截短体重组蛋白的真核表达及其细胞内定位被引量：2: 2014年; 目的构建人PIF1及其C末端解螺旋酶模序(PIF1C)和N末端PINT结构域(PIF1N)截短体真核表达重组质粒,进行真核表达,并确定PIF1、PIF1C、PIF1N在细胞内定位。方法以HeLa cDNA为模板PCR获取PIF1、PIF1C、PIF1N编码区cDNA,将其插入pCMV-Tag 2B质粒中构建PIF1、PIF1C、PIF1N真核表达重组质粒;通过lipofectamine2000将重组质粒转染人293细胞中,Western blot方法检测其在真核细胞内的表达,用免疫荧光法检测其细胞内定位。结果成功构建了PIF1及其截短体真核表达重组体,并在真核细胞内成功表达。确定PIF1定位于核内,PIF1C定位于整个细胞,呈弥散分布,PIF1N主要定位于核内。结论在真核细胞中成功表达了PIF1、PIF1C、PIF1N,且发现PIF1N对PIF1的入核起重要作用,为进一步研究其PIF1及其各结构域奠定了实验基础。; 李珊珊刘旭张莹王建校刘晓丹王豫周平坤顾永清; 关键词：重组质粒蛋白表达免疫荧光真核表达

人PIF1解螺旋酶克隆表达及2种细胞裂解法纯化PIF1蛋白比较: 2013年; 目的克隆、表达人类全长PIF1解螺旋酶,建立PIF1纯化方法。方法从Hela细胞的cDNA文库中PCR扩增得到PIF1解螺旋酶cDNA,插入N-末端融合有六聚组氨酸的表达载体pET15b产生pET15b-PIF1重组质粒,转化RosettaTM2(DE3)感受态细胞使PIF1蛋白在大肠杆菌中表达,分别用溶菌酶热裂解法和玻璃珠震荡法裂解大肠杆菌细胞,再用高效液相的镍亲和柱亲和层析纯化PIF1蛋白,比较2种方法释放的PIF1蛋白。结果克隆了PIF1基因,并使PIF1蛋白在大肠杆菌中得到成功表达,2种裂解法均能使PIF1蛋白释放出来,玻璃珠裂解法释放的PIF1蛋白较热裂解法高2倍。结论玻璃珠震荡法裂解细胞能释放更多的PIF1蛋白,是纯化PIF1蛋白的一个较好的选择。; 赵德根王建校李珊珊顾永清; 关键词：蛋白表达细胞裂解

CHD4在染色体重塑中的作用被引量：1: 2014年; 染色质作为真核细胞遗传信息,体内外各种因素的作用致使不断的产生损伤,但是细胞仍能保持正常的生长、分裂和繁殖,这与基因组稳定性和完整性保持,并且通过自身的损伤修复有着密切的联系。ATP依赖的染色质重塑是染色质重塑的最重要的方式之一,主要是利用ATP水解释放的能量,将凝聚的异染色质打开,协调损伤修复蛋白与DNA损伤位点的作用,通过对组蛋白的共价键修饰或ATP依赖的染色质重塑复合物开启了DNA的损伤修复的大门。CHD4/Mi-2β的类SWI2/SNF2 ATP酶/解螺旋酶域结构域保守性最强,这一结构域存在与多种依赖于ATP的核小体重构复合物。Mi-2蛋白复合物称为核小体重塑及去乙酰化酶NuRd(nucleoside remodeling and deacetylase,NuRD),是个多亚基蛋白复合物,Mi2β/CHD4是该复合物的核心成员。近来的研究发现,CHD4具有染色质重塑功能,并且参与DNA损伤修复的调控。CHD4羧基端的PHD通过乙酰化或甲基化识别组蛋白H3氨基端Lys9(H3K9ac和H3K9me),并且通过Lys4甲基化(H3K4me)或Ala1乙酰化(H3A Lac)抑制与H3、H4的结合,为染色质重塑提供了保障。Mi-2β/CHD4参与DNA损伤反应,定位于DNA损伤γ-H2AX的foci。沉默Mi-2β/CHD4基因,细胞自发性DNA损伤增多和辐射敏感性增强。表明CHD4在染色质重塑中具有重要的作用。; 徐涛万传君王建校李珊珊顾永清; 关键词：染色质重塑 DNA损伤修复

小干扰RNA的研究进展被引量：3: 2014年; RNA干扰(RNA interference,RNAi)是近年发展起来的一种新技术。RNAi是指通过外源性或内源性的双链RNA在体内诱导靶基因mRNA产生特异性降解,进而引起不同水平的基因沉默,其效应分子主要是小干扰RNA(siRNA)。siRNA是生物界普遍存在的一种抵御外来基因和病毒感染的基因调控方式,也是一种重要的研究工具。大量的研究工作致力于设计合理的siRNA片段用于基因功能研究,并将其作为一种治疗方法用于肿瘤、病毒性疾病等基因治疗以及药物靶向研究。因此本文对siRNA的作用机制、设计原则及其在临床应用中的缺点和解决方法进行综述。; 赵德根王建校刘旭徐涛顾永清; 关键词：SIRNA

人PIF1解螺旋酶的生物化学活性分析及其在DNA损伤修复中的作用: 顾永清王建校李珊珊张莹刘旭周平坤

SIK2 cDNA及其截短体原核表达重组体的构建及表达: 2014年; 目的构建SIK2cDNA及其截短体的原核表达重组质粒，在大肠杆菌中诱导表达。方法分别设计SIK2及其截短体引物，采用PCR方法分别扩增SIK2、SIK2-△1（280-926）、SIK2-△2（400-926）、SIK2-△3（1-400）、SIK2-△4（700-926）五个cDNA片段，并将扩增的cDNA片段插入原核表达载体pGEX4T2，构建GST标签的重组质粒。将构建好的重组质粒转化到大肠杆菌BL21中，用IPTG诱导SIK2、SIK2A1、SIK2-A2、SIK2-A3和SIK2A4五个截短体的原核表达，用考马斯亮蓝染色和Westernblot进行鉴定。结果成功构建了SIK2全长及其截短体cDNA的重组质粒，用考马斯亮蓝染色及Westernblot鉴定显示，SIK2全长及其截短体重组质粒均在大肠杆菌中诱导表达。结论在大肠杆菌中成功地诱导表达了SIK2重组蛋白及其截短体，为进一步研究SIK2各结构域的功能提供了实验基础。; 王建校李珊珊刘旭王攀刘晓丹王豫赵珊珊周平坤顾永清; 关键词：GST 重组质粒

盐诱导激酶SIK2与DNA-PKcs相互作用的鉴定: 目的：利用SIK2敲低细胞系，研究SIK2敲低对细胞DNA辐射损伤修复能力的影响，推测SIK2在辐射损伤修复中的作用。分别在细胞水平和体外检测SIK2与DNA-PKcs之间的相互作用，进一步明确其相互作用与细胞周期的关系...; 王建校; 关键词：DNA-PKCS 彗星电泳免疫共沉淀; 文献传递

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