许金坤
- 作品数：4 被引量：5H指数：2
- 供职机构：吉林农业大学食品科学与工程学院更多>>
- 发文基金：吉林省自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 北京棒杆菌AS1.299高丝氨酸脱氢酶定点突变及酶学性质表征
- 高丝氨酸脱氢酶(HSD)是天冬氨酸族氨基酸生物合成途径的关键酶,同时也是限速酶。它催化天冬氨酸p-半醛生成高丝氨酸,最终控制合成蛋氨酸、苏氨酸、异亮氨酸和S-腺苷蛋氨酸。微生物中天冬氨酸族氨基酸的生物合成受到严格的调控,...
- 许金坤
- 关键词：定点突变电转化
- 文献传递
- 北京棒杆菌AS1.299高丝氨酸脱氢酶突变体L200F/D215K的异源表达及酶学性质被引量：2
- 2014年
- 【目的】对北京棒杆菌Corynebacterium pekinense高丝氨酸脱氢酶(homoserine dehydrogenase,HSD)进行空间结构改造从而获得优良性能新酶。【方法】利用定点突变技术构建HSD双突变体L200F/D215A、L200F/D215E、L200F/D215G和L200F/D215K,并将其转入大肠杆菌E.coli BL21中进行高效表达,选取催化效率最高的双突变体L200F/D215K与双突变前的L200F进行动力学和酶学性质比较。【结果】HSD双突变体L200F/D215K的Vmax为36.92 U/mg,较L200F提高1.24倍;最适反应温度为37℃,较L200F提高2℃;最适反应pH为7.5,与L200F经验值相同;最适温度下的半衰期为4.16 h,较L200F提高1.12倍;L200F/D215K和L200F对有机溶剂和金属离子均表现出较好的抗性。【结论】HSD通过空间结构改造活力得到提高,并且其酶学性质得到优化。本研究有助于认识HSD突变体的酶学性质,为其新酶的研发利用提供有力依据。
- 申术霞朱运明闵伟红方丽许金坤
- 关键词：北京棒杆菌异源表达酶学性质
- 北京棒杆菌AS1.299高丝氨酸脱氢酶突变体D206G的酶学性质表征被引量：3
- 2013年
- 高丝氨酸脱氢酶(HSD)是天冬氨酸族氨基酸合成途径的关键酶,在苏氨酸和蛋氨酸生物合成中起到重要作用。将来自于北京棒杆菌AS1.299的HSD在E.coli BL21(DE3)中成功构建并进行高效异源表达。通过分子对接与同源序列比对发现,206位点参与底物结合,并且在家族中高度保守,因此对突变体D206G进行研究。结果表明:突变体最适pH7.5,最适反应温度37℃,半衰期为4h,并对金属离子和有机溶剂显示出良好的抗性。同野生型相比,突变体Km值减小,可能是由于侧链官能团减小,空间位阻降低,有利于底物结合。
- 许金坤闵伟红詹冬玲方丽刘嘉申术霞郭永玲
- 关键词：北京棒杆菌定点突变酶学性质
- 北京棒杆菌高丝氨酸脱氢酶基因的克隆与表达产物活性测定被引量：1
- 2012年
- 以北京棒杆菌E31染色体DNA为模板,用PCR法扩增了高丝氨酸脱氢酶(HD)基因。将结构基因装载于pET-28a质粒的T7启动子下游,得到了重组表达质粒pET-HD。将其转入大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3),经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,获得了高效的表达。含表达质粒的菌体胞内粗提液经酶活分析表明,高丝氨酸脱氢酶的活性为不含重组质粒的对照菌的10倍。
- 刘嘉闵伟红许金坤方丽
- 关键词：PCR基因表达
