目的:富含嘌呤元件结合蛋白α(purine-rich element binding protein alpha,PURα)是调控细胞周期和恶性转化的关键因子.本研究旨在探讨在食管鳞状细胞癌中转录因子PURα蛋白的多种功能及其相关机制.方法:构建过表达PURα蛋白的食管癌细胞KYSE510-PURα和p CMV6空载体转染的对照食管癌细胞KYSE 510-p CMV6.用蛋白免疫印迹和细胞免疫荧光分析检测过表达PURα蛋白的食管癌细胞和对照食管癌细胞中上皮间叶转变相关蛋白的表达差异,如E-钙黏蛋白和波形蛋白等;采用细胞划痕实验和Transwell小室检测食管癌细胞的侵袭转移能力.结果:成功构建过表达PURα的食管癌细胞.蛋白免疫印迹和免疫荧光分析表明,与对照细胞相比,过表达PURα的食管癌细胞中E-钙黏蛋白的表达减少,N-钙黏蛋白、波形蛋白和Snail蛋白表达升高.引人注目的是,过表达PURα的食管癌细胞的划痕愈合能力增强,侵袭性显著增加.与此同时,细胞形态发生了纤维样改变,呈现上皮间叶转化表型.结论:PURα能通过调控食管鳞癌细胞上皮间叶转化而促进肿瘤细胞的侵袭转移能力.
富含嘌呤元件结合蛋白α(purine-rich element binding protein alpha,PURα)基因编码富含嘌呤的DNA和RNA结合蛋白。PURα在进化过程中高度保守。PURα蛋白既能直接或间接与DNA结合发挥转录因子的作用,促进或抑制下游基因的转录,也能通过与m RNA结合并影响其转运和翻译。PURα的结构变异与神经系统发育和HIV感染等多种疾病相关。近年发现PURα的结构和功能变异也与肿瘤发生发展相关。PURα通过影响DNA损伤修复而影响肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。作为转录因子,PURα影响肿瘤相关基因的表达。PURA基因突变和PURα蛋白结构变异与肿瘤发生及肿瘤耐药性相关。
目的:本研究尝试使用添加无外泌体血清(E x o s o m e-d e p l e t e d F B S)的培养基培养细胞并提取外泌体,比较无外泌体血清和传统的无血清两种不同的培养条件对结肠癌H C T116细胞外泌体分泌的影响,旨在优化外泌体提取条件,使之有利于后续功能研究.方法:采用提取前24 h无血清和添加无外泌体血清培养基培养结肠癌细胞,普通光学显微镜下观察两种培养条件下细胞的生长和形态,用超速离心法分步提取分泌到细胞培养上清中的外泌体,透射电子显微镜下观察外泌体的形态,蛋白免疫印迹法分析外泌体标志蛋白,以及纳米颗粒追踪计数分析外泌体大小和含量.结果:与无血清培养条件相比,添加无外泌体血清培养的HCT116细胞生长状态良好,细胞无明显死亡现象.两种培养条件分泌的外泌体形态相近,均呈圆形或椭圆形,由脂质双分子层包裹的小囊泡,直径为40-100 nm.无外泌体血清培养条件分泌的外泌体大约是无血清培养的6倍,二种培养条件下提取的外泌体直径均为90 nm左右,与电镜结果一致.两种培养条件提取的外泌体中均检测到HSP70和CD63外泌体标志蛋白.结论:添加无外泌体血清培养HCT116细胞分泌的外泌体与无血清培养相比无明显差异,但添加无外泌体血清培养的细胞状态比无血清培养的细胞状态好,外泌体的分泌可能更接近生理条件下的生长环境,分泌的外泌体数量更多,因此无外泌体血清培养条件较无血清培养更适合结肠癌来源外泌体的提取和研究.
