王利勤
- 作品数：19 被引量：101H指数：4
- 供职机构：成都动物园更多>>
- 发文基金：成都大熊猫繁育研究基金国家科技支撑计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程更多>>
- 流产型布鲁菌Omp10、Omp25蛋白的表达纯化与鉴定被引量：2
- 2012年
- 获得高纯度具有生物学活性的重组布鲁菌Omp10、Omp25融合蛋白,并进行抗原性的分析。将用PCR扩增出的布鲁菌Omp10、Omp25基因片段分别克隆到原核表达载体pET-32α中,构建pET-32α-Omp10/Omp25原核表达质粒。将其转入大肠杆菌BL21(DE3)PlysS中,用IPTG诱导表达,经HisTrap HP亲和层析柱分离纯化,分别用Western-blot和间接ELISA检测产物的抗原性。基因测序及酶切鉴定证明pET-32α-Omp10/Omp25原核表达载体构建成功。SDS-PAGE表明,Omp10、Omp25融合蛋白均以包涵体的形式在大肠杆菌中高效表达。经过包涵体的变性、复性及亲和层析纯化,成功获得了大小分别为34 000和44 000的融合蛋白,与预测的相对蛋白分子质量一致。Western和间接ELISA试验证明纯化的Omp10、Omp25融合蛋白能被免疫的牛布鲁菌阳性血清所识别。结果表明,成功获得了布鲁菌Omp10、Omp25融合蛋白,且均具有一定的免疫原性,通过血清学反应证实,Omp10、Omp25蛋白为布鲁菌病临床诊断试剂盒的研制奠定了基础。
- 张三东王晶钰王利勤杨幼聪马超陈婷董睿李成山任娟娟刘万华
- 关键词：布鲁菌纯化抗原性
- 圈养野生动物隐孢子虫、贾第虫、微孢子虫感染情况调查被引量：4
- 2017年
- 为了调查圈养野生动物隐孢子虫、贾第虫、微孢子虫感染情况,笔者采用巢式PCR法对采自成都动物园、碧峰峡动物园、贵阳动物园的野生动物的382份粪便进行了隐孢子虫、贾第虫、微孢子虫检测。结果表明:成都动物园隐孢子虫、贾第虫和微孢子虫的感染率分别为0.51%、3.03%和10.61%;碧峰峡动物园的感染率分别为1.00%、2.00%和22.00%;贵阳动物园的感染率分别为16.67%、20.24%和34.52%。三个园区野生动物均存在机会致病性病原体感染。
- 王利勤李威余星明吴孔菊刘俊卿余建秋赵波谢瑶邓磊刘学涵谢娜弓超杨俊李奇杨大洪彭广能
- 关键词：隐孢子虫贾第虫野生动物
- 一种动物园防疫用消毒喷洒机构
- 本实用新型公开了一种动物园防疫用消毒喷洒机构，属于消毒设备领域，一种动物园防疫用消毒喷洒机构，包括消毒剂储存箱和固定连接在消毒剂储存箱上的药液泵，药液泵通过输液管连通有出液喷头，出液喷头包括有和输液管相连的机壳，机壳上设...
- 邓家波王利勤尹苗陈希文左智力
- 规模化养鸡场大肠杆菌病综合防治措施
- 目的：以我国3省份规模化养鸡场分离鉴定的1002株鸡源大肠杆菌为研究对象,了解我国鸡源E.coli的耐药性和耐药基因的年度变化及耐药基因与耐药性之间的相关性,制定科学的防治方案.方法：采用K-B药敏纸片法检测E.coli...
- 王晶钰唐攀王利勤刘万华任娟娟武宁邱渊皓
- 关键词：规模化养鸡场大肠杆菌病耐药基因
- 文献传递
- 鸡伤寒沙门菌的分离鉴定及药敏试验被引量：1
- 2011年
- 为给鸡伤寒沙门菌病的防控提供理论依据与数据参考,采集疑似鸡伤寒病死鸡的肝、脾病料,进行细菌分离。根据细菌形态、培养特性、生化试验等鉴定出13株沙门菌。对分离到的菌株进行21种常用抗菌药物的敏感性试验,结果显示,分离株对阿米卡星、新霉素高度敏感,对卡那霉素、痢特灵中度敏感,而对其他药物则表现为耐药。将筛选出的阿米卡星对发病鸡场后续发病鸡群采用肌肉注射和硫酸新霉素饮水治疗和痢特灵拌料饲喂,用药5 d后,鸡群鸡伤寒沙门菌病的发病率从50%降到了5%左右。
- 刘素英王晶钰董睿王利勤王慧
- 关键词：伤寒沙门菌药敏试验
- 鸡源致病性大肠埃希菌中氨基糖苷类抗生素耐药基因的检测被引量：6
- 2012年
- 为了解鸡源致病性大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性变化和钝化酶耐药基因的携带情况及耐药基因与耐药性的相关性,从陕西、河南、河北、山西、宁夏和甘肃6省(区)的部分规模化养鸡场的病、死鸡中分离鉴定320株致病性大肠埃希菌。采用K-B药敏纸片法检测分离菌对6种氨基糖苷类药物的敏感性,PCR方法检测6种氨基糖苷类钝化酶耐药基因,用DNA Star软件对获得的耐药基因序列与GenBank中的相关序列进行比对。结果显示,鸡源致病性大肠埃希菌分离株对庆大霉素、链霉素、妥布霉素、卡那霉素、新霉素和阿米卡星的耐药率分别为53.4%、49.3%、37.5%、34.7%、22.8%和5.3%,对妥布霉素和卡那霉素耐药率呈上升趋势,而对庆大霉素的耐药率虽呈下降趋势,但仍维持在40%以上。3重以上耐药菌株占80%(256/320)。氨基糖苷类钝化酶基因aac(3)-Ⅱ、aph(3′)-Ⅰ和aac(6′)-Ⅰ的检出率分别为50.9%、25.9%和3.1%,未检测到aac(3)-Ⅳ、ant(3′′)-Ⅰ和aph(3′)-Ⅱ基因。研究表明,分离的鸡源致病性大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性普遍存在,以多重耐药为主,且对妥布霉素和卡那霉素的耐药性不断上升。耐药基因aac(3)-Ⅱ和aph(3′)-Ⅰ的检出率与其耐药性呈正相关。
- 王利勤王晶钰董睿张三东江跃德陈占莉李志良
- 关键词：大肠埃希菌耐药性
- H9N2亚型禽流感病毒对鸡输卵管致病性的研究被引量：4
- 2013年
- 为了研究H9N2亚型禽流感病毒(H9N2AIV)对鸡输卵管的致病性,本研究首先采用凝集素亲和组化染色法检验了流感病毒受体SAα-2,3Gal在鸡输卵管上的分布;然后用H9N2AIV人工感染产蛋母鸡,制作输卵管的病理组织切片观察其病理变化;最后,采用胶原酶I灌注消化法培养鸡输卵管膨大部的原代上皮细胞,接毒H9N2AIV后观察细胞病变。试验结果表明,鸡输卵管除漏斗部没发现SAα-2,3Gal受体,其余部分均呈强阳性分布;攻毒后病理组织切片观察,输卵管膨大部上皮细胞绒毛脱落,部分细胞坏死、脱落,组织间隙变大,子宫内部组织内部充血出血,其他部分变化不明显;原代细胞接毒72h后,细胞病变不明显,但是上清中HA滴度可以达到3log2。从以上三方面可以看出,鸡输卵管上皮细胞膜上存在禽流感病毒受体,H9N2AIV可以引起侵害鸡输卵管,并引起部分输卵管病变,而且H9N2AIV可以感染鸡输卵管膨大部原代上皮细胞,H9N2AIV有可能通过输卵管感染母鸡。
- 王晶钰李成山陈婷王利勤董睿张渭东
- 关键词：病理观察
- 圈养非人灵长类动物肠道大肠杆菌的耐药性与整合子携带研究被引量：1
- 2021年
- 为了了解非人灵长类肠道大肠杆菌(Escherichia coli)的耐药性以及耐药基因和整合子的携带情况,试验采用K-B纸片扩散法对56株分离自非人灵长类的大肠杆菌进行22种抗菌药物的敏感性测试,同时采用PCR方法检测菌株中耐药基因及整合子(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类)携带情况。结果表明:56株大肠杆菌对22种抗菌药物呈不同程度耐药,其中对阿莫西林(87.50%)、阿莫西林/克拉维酸(82.14%)、多西环素(55.35%)和四环素(50.00%)的耐药性较高。22种耐药基因中blaTEM检出率最高(35/56,62.50%),其次为tet(A)(34/56,60.71%)和sul2(22/56,39.29%),其余耐药基因检出率为0~17.86%。56株大肠杆菌中共有9株检测出Ⅰ类整合子(9/56,16.07%),未检出Ⅱ,Ⅲ类整合子。说明此次分离的非人灵长类肠道大肠杆菌对抗菌药物呈不同程度的耐药性;耐药基因检出率高且复杂;整合子介导的耐药基因传播是菌株产生多重耐药表型的机制之一。
- 朱子琦程跃红王利勤潘舒蕾赵波冯丹魏斌李向勇彭广能钟志军
- 关键词：非人灵长类大肠杆菌耐药性整合子
- 猪细小病毒和猪源脑心肌炎病毒的二重PCR检测方法的建立被引量：2
- 2012年
- 试验旨在建立能同时检测猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)和猪源脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EM-CV)的二重PCR检测方法。根据GenBank中PPV VP2基因和EMCV 3D基因序列,利用Premier 5.0软件设计出PPV和EMCV的特异性引物。通过优化反应条件,建立了能同时特异性检测PPV和EMCV的二重PCR方法,PPV和EMCV的敏感性检测极限分别达7.62和1.22×10-1pg/μL。通过对临床36份样品的检测结果表明,该二重PCR检测方法敏感、特异,适合于临床检测应用。
- 朱向博刘业兵王晶钰张晓杰梁耀峰王利勤董睿陈婷李成山
- 关键词：PPVEMCV二重PCR
- 我国规模化养鸡中细菌病流行与综合防控-鸡源大肠杆菌携带的毒力基因及其组合形式与其致病力的相关性
- 目的：细菌携带的毒力相关基因或毒力岛(Pathogenicity island)与细菌的致病力有关,是阐明细菌致病性的重要参数.但目前有关大肠杆菌的致病力与携带的毒力相关基因数量及其组合形式之间的关系还不明确.
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- 王晶钰唐攀王利勤
- 关键词：致病性大肠杆菌毒力基因
- 文献传递
