根据NCBI上公布的弓形虫RH株的529bp基因序列(登录号:AF146527)用Primer Premier 5.0设计3条特异性引物TX1、TX2和TX3,建立土壤中弓形虫的半套式PCR检测方法,并将引物TX1与TX3扩增产物克隆到pMD18-T载体上进行测序.结果表明:该方法能扩增出约350bp的片段,TX1与TX3扩增片段约520bp,克隆到pMD18-T载体上的521bp片段与所选取的弓形虫RH株的目的基因序列相似性100%.该检测方法特异性强,以犬新孢子虫、牛微小隐孢子虫、牛巴贝斯虫、环形泰勒虫、牛链球菌、猪链球菌、蒙氏肠球菌基因组为模板均未扩增出条带;灵敏性高,检测极限为20fg弓形虫DNA;在22份土壤样品中检出3份阳性样品.
