何凡
- 作品数：2 被引量：5H指数：2
- 供职机构：深圳大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：广东省大学生创新实验项目国家高技术研究发展计划国家质检总局科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 棕点石斑鱼Piscidin样肽基因的克隆及其成熟肽的原核表达被引量：3
- 2011年
- 以简并引物通过RT-PCR从重要经济海水鱼类棕点石斑鱼Epinephelus fuscoguttatus白细胞中扩增出一条388bp具有完整编码框的cDNA序列。Blast分析初步显示,该序列属于鱼类抗菌肽Piscidin家族的一员,将其命名为棕点石斑鱼Piscidin样肽（GU592793）,推导氨基酸序列具有界定鱼类Piscidin的以下共同特征：（1）预测的信号肽序列与其他Piscidin的同源性较高,在60%~95%之间;（2）推测的成熟肽N端6个氨基酸残基富含Phe、Ile及His;（3）成熟肽第8个和第13个氨基酸位点均为Gly。NJ进化树分析表明,该cDNA推导的氨基酸序列与赤点石斑鱼Epinephelusakaarapiscidin-like peptide（ACE78290）、斜带石斑鱼Epinephelus coioidesPiscidin-like peptide（ACE78291）以高达81%的支持率聚为一支。也表明本研究成功克隆到棕点石斑鱼首条PiscidincDNA序列。推测的成熟肽为两亲性阳离子肽,等电点12.48,Schiffer-Edmunson预测其二级结构呈α螺旋构型。将推测的成熟肽序列亚克隆至pET-32a构建融合表达载体pET-32a-pis（EF）,并在大肠杆菌E.coliOrigami（DE3）中成功表达出融合蛋白,以1mmol/ml IPTG于30℃进行诱导表达,4 h可获得大量表达,目的蛋白以包涵体形式存在。
- 陈大玮邓利何凡邱聪龄马一见刘志刚
- 关键词：抗菌肽基因克隆原核表达
- 芝麻主要过敏原油质蛋白的基因克隆和原核表达被引量：2
- 2010年
- 为克隆黑、白芝麻主要过敏原油质蛋白Oleosins的基因并在原核细胞中对其进行表达,本研究分别提取黑、白芝麻的总RNA,逆转录合成cDNA,根据序列设计简并引物,扩增芝麻主要过敏原油质蛋白Oleosins基因的完整开放阅读框,并与pET-28a载体连接,测序鉴定后转化大肠杆菌E.coliBL21(DE3)及用IPTG诱导表达。结果表明克隆获得黑、白芝麻主要过敏原油质蛋白Oleosins的全长基因约为438bp的开放阅读框(包括终止密码子),编码145个氨基酸。所编码的蛋白相对分子质量约为15.5kDa,为小分子量蛋白,等电点为5.18,与理论值相符。序列同源性分析发现其与数据库中已知的黑、白芝麻油质蛋白Oleosins基因同源性很高(GenBank黑、白芝麻油质蛋白基因登录号分别为EU999158和EU999159),并在DE3中高效表达。
- 何凡邬玉兰刘志刚
- 关键词：芝麻基因克隆原核表达
