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重组犬2型腺病毒转移载体、其构建方法及应用: 本发明公开了一种重组犬2型腺病毒转移载体、其构建方法及其用途。本发明重组犬2型腺病毒转移载体缺失了E3区的1412bp片段，可以插入大片段的外源基因，并且在所缺失的E3区片段位置插入hCMV IE启动子、多克隆位点、增强...; 曲连东姜骞周洁陈洪岩刘家森李昌文张洪英司昌德刘立奎韩凌霞孟庆文; 文献传递

哺乳动物呼肠孤病毒外壳蛋白和受体研究进展被引量：2: 2010年; 哺乳动物呼肠孤病毒吸附和侵入宿主细胞是感染启动的关键一步，包括病毒表面蛋白的不同区域同细胞表面不同的受体发生相互作用。病毒表面蛋白包括三种：s1、s3和m1，这三种蛋白在与受体的结合上具有不同的作用。细胞表面的受体包括唾液酸、JAM-1，未知的碳水化合物等，这些受体在病毒吸附和侵入细胞时能特异性的与病毒表面蛋白结合，被认为是病毒宿主范围和组织嗜性的一个决定因素，因此，受体与表面蛋白的相互作用的研究有助于揭示病毒的感染途径及细胞内的复制过程。本文简要介绍近年来在这方面的研究进展。; 宋宇周洁高诚胡建华; 关键词：呼肠孤病毒衣壳蛋白受体唾液酸

抗犬瘟热病毒重组核衣壳蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量：9: 2007年; 以纯化的重组犬瘟热病毒（CDV）N蛋白免疫BALB/c小鼠,应用常规杂交瘤技术获得两株能稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞系,分别命名为A4C6C12和A5B8H7间接ELISA检测腹水效价分别为1：106、1：105;亚类鉴定结果分别为IgG2a、IgG2b,轻链均为K型;Western blot和ELISA分析结果显示2株单克隆抗体均能与重组N蛋白和CDV发生反应,而与犬细小病毒及犬腺病毒等无交叉反应;ELISA叠加试验的增值结果表明两株单克隆抗体识别的抗原位点不同.特异性抗CDV-rN的单克隆抗体的获得,为进一步用于临床诊断研究奠定了基础.; 周洁姜骞张洪英刘家森刘立奎陈洪岩韩凌霞司昌德曲连东; 关键词：犬瘟热病毒单克隆抗体

犬瘟热重组N蛋白抗原间接ELISA方法的建立及应用被引量：14: 2008年; 本研究以纯化的犬瘟热病毒(CDV)重组N蛋白为诊断抗原,建立了犬瘟热病毒抗体检测的间接ELISA诊断方法,将其命名为rN-CDV ELISA。确定最佳抗原包被量为0.167μg/孔,待检血清最佳稀释倍数为1∶100,其作用时间为45 min,羊抗犬酶标抗体稀释倍数为1∶2 000,作用时间为60 min,S/P值≥0.208者判为阳性,S/P值≤0.16者判为阴性,介于两者之间者判为可疑。该抗原不与犬细小病毒、犬传染性肝炎、犬副粘病毒、犬波特氏杆菌等4种疾病的阳性血清反应,具有良好的特异性;批内、批间重复试验,变异系数均小于15%,具有良好的重复性;检测血清样品96份,与进口诊断试剂盒的符合率为97.1%。本研究为现地免疫犬群抗体检测和进行CDV流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法。; 姜骞周洁刘家森李慕瑶司昌德韩凌霞孟庆文陈洪岩曲连东; 关键词：犬瘟热病毒重组N蛋白间接ELISA

重组犬2型腺病毒转移载体、其构建方法及应用: 本发明公开了一种重组犬2型腺病毒转移载体、其构建方法及其用途。本发明重组犬2型腺病毒转移载体缺失了E3区的1412bp片段，可以插入大片段的外源基因，并且在所缺失的E3区片段位置插入hCMV IE启动子、多克隆位点、增强...; 曲连东姜骞周洁陈洪岩刘家森李昌文张洪英司昌德刘立奎韩凌霞孟庆文; 文献传递

小鼠肝炎病毒N蛋白间接ELISA方法的建立被引量：1: 2008年; 目的运用重组蛋白作为包被抗原建立检测小鼠肝炎病毒抗体的间接ELISA方法。方法将大肠杆菌表达小鼠肝炎病毒核衣壳蛋白(Nucleocapsid N)的主要抗原域NP(S)纯化后作为诊断抗原,通过条件优化,建立检测小鼠肝炎病毒抗体的间接ELISA方法。结果确定其包被抗原的浓度为300 ng/mL,血清稀释度为1∶200,山羊抗小鼠酶标抗体的稀释浓度为1∶3000。S/P≥0.386则为阳性,S/P<0.308为阴性,两者之间为可疑。经阻断试验、交叉试验和重复性实验,表明该方法特异性强,重复性好。与国家实验动物检测中心的MHV全病毒ELISA抗体诊断试剂盒比较,特异性、敏感性和符合率分别为94.1%、93.3%和93.9%。用该融合蛋白包被聚苯乙烯板后在-20℃下可保存5个月,应用该方法检测了98份送检的血清样品,有10份检测为阳性。结论本研究建立的间接ELISA特异性强,重复性好,为进一步开发MHV血清抗体诊断试剂盒奠定了基础。; 周艳胡建华高诚周洁; 关键词：小鼠肝炎病毒重组N蛋白间接ELISA

兔轮状病毒VP7基因在重组杆状病毒中的表达: 2009年; 目的利用Bac—to-Bac杆状病毒表达系统表达兔轮状病毒VP7基因。方法根据Gen Bank发表的LaRV308／01VP7基因序列（AF5028201），设计一对特异性引物，RT—PCR扩增获得VP7基因，将目的片段克隆入pFastBacHTa中，构建重组转移载体pFastBHa-VP7。将重组转移载体转化DH10Bac感受态细菌，与Bacmid发生位点特异性转座作用，获得重组穿梭载体Bacmid-VP7，通过脂质体将其转染昆虫细胞Sf9。结果获得了重组杆状病毒Bacmid—VP7，Western blot和IFA分析表明VP7蛋白在昆虫细胞中获得正确表达且表达产物具有抗原性。结论本研究利用Bac—to-Bac杆状病毒表达系统成功表达兔轮状病毒VP7蛋白，为进一步建立诊断学方法奠定了实验基础。; 周洁王娱胡建华高诚; 关键词：VP7基因杆状病毒表达

犬瘟热病毒A株核衣壳蛋白基因的克隆、表达及特性分析被引量：16: 2006年; 根据GenBank中A75/14株犬瘟热病毒(CDV)核衣壳蛋白(N)基因的核苷酸序列设计合成一对引物,经RT-PCR从病毒总RNA中扩增出1600bp的N基因,将其克隆于pMD18-T载体对其进行序列分析。结果表明A株CDV与其它毒株N基因序列的同源性较高。将N基因定向克隆于原核表达载体pPROEXTMHT,用重组质粒pPROEXTMHT-N转化感受态E.coliDH5a细胞,用IPTG于37℃诱导表达了分子量约63Ku的重组N蛋白,占菌体总蛋白18%。经Westernblot分析证实所表达的重组N蛋白具反应活性,将表达产物用ProBondTM纯化试剂盒进行了纯化。用所获得的重组蛋白免疫家兔制备的多克隆抗体可与CDV全病毒发生特异性反应,经琼扩试验测定其效价为1∶16。本实验为下一步用重组N蛋白作为诊断用抗原,建立特异的CDV抗体检测方法奠定了基础。; 周洁李昌文张洪英陈洪岩李建伟曲连东; 关键词：犬瘟热病毒核衣壳蛋白反应活性多克隆抗体

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周洁