程安阳
- 作品数：6 被引量：1H指数：1
- 供职机构：华东理工大学生物工程学院生物反应器工程国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学化学工程更多>>
- 土豆环氧化物水解酶基因的克隆、表达及其活性包涵体分析
- 2012年
- 目的克隆、表达土豆环氧化物水解酶基因,分析其活性包涵体。方法提取土豆总RNA,以反转录获得的cDNA为模板进行聚合酶链式反应(PCR),扩增得到土豆环氧化物水解酶基因,构建大肠杆菌表达质粒pET-P.EH,将重组表达质粒pET–P.EH转化E.coli BL21(DE3)。结果 SDS-PAGE分析表明,IPTG诱导表达的重组土豆环氧化物水解酶在各种温度下均主要以包涵体形式表达,只在15℃有微量可溶表达。酶活性分析表明,28℃表达的重组酶包涵体酶活性性为0.7 U/mg。结论初步证实了存在活性包涵体的观点。
- 李小灵贺婉红范立强程安阳王刚潘忠孝朱庆庆孟军
- 关键词：大肠杆菌
- 可跨膜MnSOD融合蛋白的克隆表达及功能研究
- 超氧化物歧化酶是自由基清除剂,能预防并保护活性氧自由基对人体和细胞产生的破坏和损害,具有抗炎,抗辐射,抗肿瘤等作用。鉴于SOD是生物大分子,很难跨过细胞膜发挥生物学效应,本课题选择TAT和R9两种跨膜转导肽,通过PCR将...
- 程安阳
- 关键词：MN-SOD抗辐射
- 文献传递
- 重组人SOD2/3杂合酶原核表达及纯化方法的研究
- 目的：获取活性高的重组人SOD2/3杂合酶(以下简称rh SOD2/3)，摸索表达过程中的不同的条件，得到最高活性的粗酶液并纯化rh SOD2/3。方法：利用含有pET-SOD2/3的工程菌诱导表达rh SOD2/3杂合...
- 周大海范立强赵健程安阳
- 关键词：蛋白表达
- 结核分枝杆菌RipB基因的克隆、表达及对藤黄微球菌生长的影响
- 2013年
- 提取肺结核分枝杆菌基因组DNA,PCR扩增RipB基因并将其连接到表达载体pET-21a上,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后,用IPTG诱导表达重组蛋白。SDSPAGE表明:重组RipB表达蛋白量约占菌体总蛋白量的40%,而其在37℃表达时主要为包涵体,在15℃表达时主要在可溶上清内;Ni柱一步亲和层析获得重组RipB;100pmol/L重组RipB可显著促进藤黄微球菌生长。
- 王刚范立强程安阳李小灵潘忠孝孟军
- 关键词：结核分枝杆菌克隆表达生物活性
- 重组人SOD2/3杂合酶原核表达及纯化方法的研究被引量：1
- 2011年
- 目的摸索工程菌的表达条件并分离纯化,获得高活性的重组人SOD2/3杂合酶（rhSOD2/3）。方法利用含有质粒pET-28a-SOD2/3的工程菌诱导表达rhSOD2/3,考察诱导温度、诱导剂浓度、Mn2＋浓度与加入时机对重组酶表达量与活性的影响;利用金属螯合亲和层析纯化rhSOD2/3。结果重组酶的表达量占菌体总蛋白40%~50%,最佳表达温度15℃、诱导剂浓度0.5 mmol/L,Mn2＋浓度2.5 mmol/L,表达时间16 h,亲和层析能较好的纯化rhSOD2/3,比活从粗酶液220 U/mgpr提高到930 U/mgpr以上。结论成功获得了rh SOD2/3最适的表达条件及纯化方法。
- 周大海范立强赵健程安阳
- 关键词：纯化
- 重组人SOD2/3杂合酶的制备及其生物活性初探被引量：1
- 2011年
- 为获得重组SOD2/3杂合酶,以及观察SOD2/3能否转导入宫颈癌细胞,抑制肿瘤细胞的增殖,构建了原核表达载体pET-SOD2/3,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达获得N端带有6个组氨酸标签的SOD2/3杂合酶;用Ni柱金属螯合亲和层析纯化重组SOD2/3;利用肝素柱层析验证SOD2/3的肝素靶向性;将纯化后的融合蛋白加入体外培养的宫颈癌细胞,通过FITC和MTT实验观察杂合酶SOD2/3的转导能力及其在细胞内的活性。成功构建了SOD2/3杂合酶的表达载体,重组SOD2/3表达量占菌体总蛋白30%左右;金属螯合亲和层析一步纯化,回收率在70%以上,纯度达90%左右;重组酶能与肝素亲和层析结合,说明杂合酶SOD2/3有肝素靶向性;细胞实验证实SOD2/3较SOD2能更好地抑制Hela细胞生长。获得了较纯的重组SOD2/3杂合酶,该酶能直接以天然有活性的形式转导人宫颈癌细胞内并抑制其细胞增殖,具有很好的作为肿瘤治疗、抗氧化损伤药物的潜力。
- 程安阳范立强赵健李小灵王刚
- 关键词：纯化抗肿瘤
