- 脂肪细胞因子 CTRP4转基因鼠的构建与鉴定被引量：2
- 2014年
- 目的建立人CTRP4基因的转基因小鼠,为脂肪细胞因子CTRP4的体内功能研究奠定基础。方法首先构建人CTRP4的转基因小鼠线性化表达载体,再利用显微注射的方法将载体注射入小鼠受精卵,从而构建人CTRP4的首建鼠(Founder)并与野生型小鼠交配繁殖得到F1代阳性小鼠,再通过近亲繁殖与测交的方法,得到CTRP4转基因纯合子小鼠,并通过PCR和western blot的方法对纯合子小鼠进行鉴定。结果得到人CTRP4转基因小鼠纯合子小鼠两个品系,western blot鉴定该转基因小鼠心脏,肝脏,脑,肾脏等多种组织中均呈现CTRP4高表达。结论成功构建了人CTRP4转基因小鼠纯合子小鼠。
- 那达翔马壮罗阳李琦谭伟峰王兰兰张国英尹昂黄河吴晓彤王露
- 关键词：转基因鼠脂肪细胞因子
- CTRP4蛋白质作为制备治疗炎症性疾病或自身免疫性疾病的药物的应用
- 本发明公开了一种CTRP4蛋白质作为制备治疗炎症性疾病或自身免疫性疾病的药物的应用。本发明的上述应用可以制备有效地治疗炎症性疾病或自身免疫性疾病的药物。
- 王露马大龙马壮那达翔王兰兰罗阳张颖妹
- 文献传递
- 人类新基因CTRP4的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：6
- 2012年
- 目的:构建新基因CTRP4的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化rhCTRP4-his蛋白,制备和鉴定小鼠抗人CTRP4多克隆抗体,为进一步研究人类新基因CTRP4的生物学功能奠定基础。方法:从pcDNA3.1-myc/his(-)B-hCTRP4重组载体中通过PCR的方法扩增CTRP4基因ORF中不含信号肽的目的基因片段,将得到的片段双酶切定向插入pET-32a中,构建原核表达载体pET-32a-hCTRP4。构建好的质粒在E.coli BL21(DE3)中进行诱导、表达,通过镍亲和层析柱纯化融合蛋白,SDS-PAGE电泳分析蛋白纯度。将pcDNA3.1-myc/his(-)B-hCTRP4重组质粒和纯化好的融合蛋白依次免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体。并对抗体进行纯化、效价测定以及特异性鉴定。结果:DNA测序证实构建的pET-32a-hCTRP4重组表达载体含有hCTRP4编码序列,其序列比对分析与GenBank中公布序列一致,质粒在E.coli中表达相对分子质量(Mr)为35 000的目的蛋白,SDS-PAGE电泳分析纯度为95%以上。ELISA法检测抗体效价为1∶20 000,Westernblot、免疫荧光细胞化学和免疫组化分析显示抗体能特异性识别重组hCTRP4以及天然状态hCTRP4蛋白。结论:成功构建了hCTRP4蛋白的原核表达载体,并获得较高纯度的融合蛋白,制备了高效价、高特异性的多克隆抗体。
- 谭伟峰王兰兰李琦罗阳那达翔马壮王露
- 关键词：原核表达基因免疫多克隆抗体
- CTRP4蛋白质作为制备治疗炎症性疾病或自身免疫性疾病的药物的应用
- 本发明公开了一种CTRP4蛋白质作为制备治疗炎症性疾病或自身免疫性疾病的药物的应用。本发明的上述应用可以制备有效地治疗炎症性疾病或自身免疫性疾病的药物。
- 王露马大龙马壮那达翔王兰兰罗阳张颖妹
- 文献传递
