谭伟峰
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
- 供职机构：北京大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 脂肪细胞因子 CTRP4转基因鼠的构建与鉴定被引量：2
- 2014年
- 目的建立人CTRP4基因的转基因小鼠,为脂肪细胞因子CTRP4的体内功能研究奠定基础。方法首先构建人CTRP4的转基因小鼠线性化表达载体,再利用显微注射的方法将载体注射入小鼠受精卵,从而构建人CTRP4的首建鼠(Founder)并与野生型小鼠交配繁殖得到F1代阳性小鼠,再通过近亲繁殖与测交的方法,得到CTRP4转基因纯合子小鼠,并通过PCR和western blot的方法对纯合子小鼠进行鉴定。结果得到人CTRP4转基因小鼠纯合子小鼠两个品系,western blot鉴定该转基因小鼠心脏,肝脏,脑,肾脏等多种组织中均呈现CTRP4高表达。结论成功构建了人CTRP4转基因小鼠纯合子小鼠。
- 那达翔马壮罗阳李琦谭伟峰王兰兰张国英尹昂黄河吴晓彤王露
- 关键词：转基因鼠脂肪细胞因子
- 人类CTRP4基因、其编码的蛋白质及它们的应用
- 本发明公开了一种新的人类基因CTRP4及其所编码的CTRP4蛋白质，本发明也涉及了该基因和蛋白质的拮抗剂在制备抑制NF-κB和/或IL6-STAT3通路的活性的药物中的应用，该基因的激动剂及该蛋白质在制备促进造血的药物中...
- 王露李琦马大龙王兰兰谭伟峰
- 人类CTRP4基因、其编码的蛋白质及它们的应用
- 本发明公开了一种人类基因CTRP4及其所编码的CTRP4蛋白质，本发明也涉及了该基因和蛋白质的拮抗剂在制备抑制NF-κB和/或IL6-STAT3通路的活性的药物中的应用，该基因的激动剂及该蛋白质在制备促进造血的药物中以及...
- 王露李琦马大龙王兰兰谭伟峰
- 文献传递
- 人类新基因CTRP4的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：6
- 2012年
- 目的:构建新基因CTRP4的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化rhCTRP4-his蛋白,制备和鉴定小鼠抗人CTRP4多克隆抗体,为进一步研究人类新基因CTRP4的生物学功能奠定基础。方法:从pcDNA3.1-myc/his(-)B-hCTRP4重组载体中通过PCR的方法扩增CTRP4基因ORF中不含信号肽的目的基因片段,将得到的片段双酶切定向插入pET-32a中,构建原核表达载体pET-32a-hCTRP4。构建好的质粒在E.coli BL21(DE3)中进行诱导、表达,通过镍亲和层析柱纯化融合蛋白,SDS-PAGE电泳分析蛋白纯度。将pcDNA3.1-myc/his(-)B-hCTRP4重组质粒和纯化好的融合蛋白依次免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体。并对抗体进行纯化、效价测定以及特异性鉴定。结果:DNA测序证实构建的pET-32a-hCTRP4重组表达载体含有hCTRP4编码序列,其序列比对分析与GenBank中公布序列一致,质粒在E.coli中表达相对分子质量(Mr)为35 000的目的蛋白,SDS-PAGE电泳分析纯度为95%以上。ELISA法检测抗体效价为1∶20 000,Westernblot、免疫荧光细胞化学和免疫组化分析显示抗体能特异性识别重组hCTRP4以及天然状态hCTRP4蛋白。结论:成功构建了hCTRP4蛋白的原核表达载体,并获得较高纯度的融合蛋白,制备了高效价、高特异性的多克隆抗体。
- 谭伟峰王兰兰李琦罗阳那达翔马壮王露
- 关键词：原核表达基因免疫多克隆抗体
