张翔
- 作品数：5 被引量：17H指数：3
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- miR-203真核表达载体的构建和重组慢病毒的制备及其对人脐静脉内皮细胞增殖和迁移的影响被引量：8
- 2013年
- 目的构建含有人源microRNA-203(miR-203)的慢病毒表达载体并制备重组慢病毒,感染人脐静脉内皮细胞系(HU-VEC-12),观察其对细胞增殖和迁移的影响。方法使用PCR方法克隆miR-203前体分子的DNA片段,构建并包装过表达miR-203的重组慢病毒。利用慢病毒感染系统建立稳定过表达miR-203的人脐静脉内皮细胞株(HUVEC-Lv-miR-203)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测外源导入miR-203的表达情况。MTT法检测miR-203对HUVEC体外生长的影响,利用划痕恢复实验检测miR-203对HUVEC迁移能力的影响。结果成功构建了过表达miR-203重组慢病毒表达系统。MTT法证实miR-203可在体外抑制HUVEC增殖,划痕恢复实验结果提示该细胞株的迁移能力受到显著抑制。结论 miR-203可以抑制体外培养的HUVEC增殖和迁移。
- 朱华宇张翔张晓张瑞杨安钢
- 关键词：人脐静脉内皮细胞细胞增殖细胞迁移
- 高效缺氧诱导表达载体的构建与鉴定
- 2008年
- 目的:构建缺氧诱导表达载体,以介导报告基因在缺氧环境下的特异、高效表达。方法:通过分子生物学方法,将鼠磷酸甘油酸激酶基因的缺氧应答元件(HRE)和最小CMV(mCMV)启动子重组,构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)或萤光素酶报告基因的可诱导载体;通过酶切鉴定和测序分析,证实载体获得正确的构建;将重组载体转染HeLa细胞,观察EGFP荧光强度并检测萤光素酶活性。结果:HRE/mCMV启动子调控的报告基因载体具有特异和高效的诱导活性。结论:构建了可以进行特异和高效缺氧诱导的报告基因载体,为其进一步的开发和应用奠定了实验基础。
- 张翔杨洁丁蓉陈锐杜德伟李占亭赵晶杨安钢孙脊峰
- 关键词：报告基因
- PDCD4重组慢病毒载体的构建、包装及其对前列腺癌细胞增殖的影响被引量：3
- 2013年
- 目的构建表达程序性细胞死亡因子4(PDCD4)的慢病毒表达载体,建立能够稳定表达目的基因的前列腺癌PC3细胞亚株。研究PDCD4分子对前列腺癌细胞增殖的影响。方法利用PCR扩增PDCD4编码区片段,克隆入pENTRA-3C入门载体,利用LR clonaseⅡ重组酶将目的基因片段转接入pLenti-6.3慢病毒表达载体并包装相应的慢病毒,以表达红色荧光蛋白mCherry的pLenti-6.3-mCherry慢病毒载体包装的慢病毒为对照,感染人前列腺癌PC3细胞,通过杀稻瘟素(blasticidin)筛选出能够稳定过表达PDCD4蛋白的细胞亚株。利用Western blot法检测PDCD4蛋白的表达量,MTT法和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力的变化。结果构建了重组慢病毒载体pLenti6.3-PDCD4。利用重组慢病毒表达系统筛选稳定过表达PDCD4蛋白的细胞亚株,并用Western blot法进行了验证。MTT法及平板克隆形成实验结果显示PDCD4高表达的PC3细胞亚株的增殖能力受到抑制。结论成功构建了表达PDCD4分子的慢病毒表达载体,筛选出稳定表达PDCD4的PC3细胞株。过表达的PD-CD4分子可以显著抑制PC3前列腺癌细胞的增殖。
- 张克克张小芳王福利张翔武国军王磊杨安钢张瑞袁建林
- 关键词：PDCD4慢病毒前列腺癌细胞增殖
- MDA-7/IL-24真核表达载体的构建和重组腺病毒的制备及其对肝癌细胞生长抑制作用的研究被引量：3
- 2011年
- 目的:构建含有MDA-7基因的的真核表达载体并制备重组腺病毒,转染/感染肝癌细胞后,观察其对细胞增殖的影响。方法:构建MDA-7的真核表达载体,将表达质粒转染肝癌细胞,利用平板克隆形成实验观察MDA-7分子对肿瘤细胞系克隆形成能力的影响。利用Adeasy-1腺病毒重组系统构建、包装并扩增含有MDA-7基因的重组腺病毒。利用MTT实验检测Ad-MDA-7对肿瘤细胞增殖的影响。结果:成功构建了MDA-7真核表达载体,利用平板克隆形成实验证实其可抑制肝癌细胞的克隆形成能力。成功地构建并包装了含有MDA-7基因的重组腺病毒,利用MTT实验证明其可抑制肝癌细胞的增殖。结论:MDA-7对肝癌细胞的增殖具有显著的抑制作用,为进一步研究其在肝癌细胞中的功能提供了重要的实验依据。
- 张翔孟艳玲王磊赵晶闫博陈锐张瑞杨安钢
- 关键词：肝癌腺病毒
- 下调盘状结构域受体1(DDR1)基因抑制4T-1小鼠乳腺癌细胞的迁移被引量：3
- 2016年
- 目的通过短发夹RNA(shRNA)下调小鼠盘状结构域受体1(DDR1)基因的表达,并观察DDR1下调后对4T-1小鼠乳腺癌细胞迁移的影响。方法针对鼠的DDR1基因设计并合成2对shRNA干涉序列连入p LKO.1慢病毒表达载体中。测序正确后利用慢病毒包装系统包装表达shRNA的重组病毒,用获得的病毒感染4T-1细胞,用嘌呤霉素(puromycin)筛选并建立稳定细胞系。采用实时定量PCR和Western blot法确定DDR1基因的下调效果。利用TranswellTM小室迁移实验观察DDR1下调后的4T-1细胞迁移能力的变化。结果经测序鉴定后,成功构建了慢病毒p LKO-sh DDR1-1、p LKO-sh DDR1-2以及阴性对照慢病毒p LKO-sh NT。用重组病毒感染4T-1细胞,建立稳定细胞系,实时定量PCR和Western blot法结果表明DDR1基因的明显下调。TranswellTM小室实验显示,与感染p LKO-sh NT的对照细胞相比,感染p LKO-sh DDR1-1和p LKO-sh DDR1-2的细胞迁移能力明显降低。结论下调DDR1基因的表达可以抑制4T-1乳腺癌细胞的迁移。
- 杨婷张翔张晓杨安钢张瑞
- 关键词：DOMAINRECEPTOR慢病毒载体迁移
