陈锐
- 作品数：10 被引量：10H指数：3
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- 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金军队“十一五”科技攻关课题更多>>
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- 高效缺氧诱导表达载体的构建与鉴定
- 2008年
- 目的:构建缺氧诱导表达载体,以介导报告基因在缺氧环境下的特异、高效表达。方法:通过分子生物学方法,将鼠磷酸甘油酸激酶基因的缺氧应答元件(HRE)和最小CMV(mCMV)启动子重组,构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)或萤光素酶报告基因的可诱导载体;通过酶切鉴定和测序分析,证实载体获得正确的构建;将重组载体转染HeLa细胞,观察EGFP荧光强度并检测萤光素酶活性。结果:HRE/mCMV启动子调控的报告基因载体具有特异和高效的诱导活性。结论:构建了可以进行特异和高效缺氧诱导的报告基因载体,为其进一步的开发和应用奠定了实验基础。
- 张翔杨洁丁蓉陈锐杜德伟李占亭赵晶杨安钢孙脊峰
- 关键词：报告基因
- 单链抗体融合蛋白介导鸡尾酒抑癌微小RNA促进HBV阳性肝癌细胞分化及抑瘤效果的体内外实验研究
- 目的：去分化状态是肿瘤细胞的重要特征之一,其程度的高低与肿瘤的预后不良密切相关.近年来的研究结果证明逆转去分化状态是抑癌疗法的重要新策略.肝脏是体内最重要的解毒和代谢器官,其癌变严重危害机体健康.通过诱导分化使肝癌细胞发...
- 陈锐张瑞杨安钢
- 关键词：肝癌细胞分化体外实验
- MDA-7/IL-24真核表达载体的构建和重组腺病毒的制备及其对肝癌细胞生长抑制作用的研究被引量：3
- 2011年
- 目的:构建含有MDA-7基因的的真核表达载体并制备重组腺病毒,转染/感染肝癌细胞后,观察其对细胞增殖的影响。方法:构建MDA-7的真核表达载体,将表达质粒转染肝癌细胞,利用平板克隆形成实验观察MDA-7分子对肿瘤细胞系克隆形成能力的影响。利用Adeasy-1腺病毒重组系统构建、包装并扩增含有MDA-7基因的重组腺病毒。利用MTT实验检测Ad-MDA-7对肿瘤细胞增殖的影响。结果:成功构建了MDA-7真核表达载体,利用平板克隆形成实验证实其可抑制肝癌细胞的克隆形成能力。成功地构建并包装了含有MDA-7基因的重组腺病毒,利用MTT实验证明其可抑制肝癌细胞的增殖。结论:MDA-7对肝癌细胞的增殖具有显著的抑制作用,为进一步研究其在肝癌细胞中的功能提供了重要的实验依据。
- 张翔孟艳玲王磊赵晶闫博陈锐张瑞杨安钢
- 关键词：肝癌腺病毒
- 缺氧调控载体功能活性的研究被引量：1
- 2007年
- 目的构建具有缺氧调控活性的基因治疗载体,其表达可由缺氧选择性诱导,用于转导基因的可控性表达。方法合成各种缺氧应答基因的缺氧应答元件（HRE）寡核苷酸序列,与巨细胞病毒（CMV）启动子组合,驱动荧光素酶报告基因和治疗基因人红细胞生成素（hEPO）的转录。检测荧光素酶的活性和hEPO的表达以确定其缺氧转录活性。结果在各种缺氧调控载体中,由鼠磷酸甘油酸激酶（mPGK）的HRE与CMV启动子组合而成的缺氧应答启动子显示出高缺氧应答性,而且缺氧诱导的表达水平与完整的CMV启动子在常氧环境下的转录水平相近。结论3HRE/mPGK/CMV缺氧调控载体对于实现治疗基因的精确调控表达可能非常有用。
- 杨洁张翔陈锐杜德伟李占亭赵晶杨安钢孙脊峰
- 关键词：转录荧光素酶报告基因
- hNIS基因介导碘摄取测量microRNA let-7在肺腺癌A549细胞中的表达被引量：3
- 2009年
- 目的拟建立用放射性核素测量microRNA（即miRNA）在肿瘤细胞中表达的新方法，探讨miRNA与肿瘤的关系。方法分别克隆人钠／碘同向转运体（hNIS）及可与let-7互补结合的ras基因的3′非翻译区（3′-UTR），即RU序列；以hNIS作为报告基因，将ras基因的3′-UTR与hNIS连接构建融合基因（hNIS—RU），使hNIS的表达受let-7的调控；同时克隆前体let-7（pri-let-7）及前体mir143（pri—mir143），转入细胞后加工形成成熟的let-7及mir143。将hNIS及hNIS—RU分别转染肺腺癌A549细胞，转染24h后，于培养液中分别加入37kBq^125I，1h后收集细胞并测量^125I计数；将hNIS-RU分别与不同量的pri-let-7或pri—mir143共转染A549细胞，转染细胞24h后分别测量其对Na^125I的摄取。结果转染hNIS的A549细胞^125I摄取明显增高，是未转染A549细胞的12倍；转染hNIS—RU的A549细胞^125I的摄取减低，为转染hNIS A549细胞的70％，是未转染A549细胞的8倍；hNIS—RU及pri—let-7共转染A549细胞的放射性计数进一步降低，为转染hNISA549细胞的50％；转染hNIS—RU不变，增加pri—let-7的转染量，^125I的摄取随pri—let-7的增加而降低；转染hNIS—RU不变，共转染不同浓度的pri-mir143，A549细胞对^125I的摄取基本不变。结论构建了hNIS—RU融合基因，hNIS在细胞中的表达受let-7的调节，二者呈反比关系。初步建立了以hNIS为报告基因测量miRNA在细胞中表达的高灵敏度放射性核素新方法。
- 杨卫东赵荣秦伟伟王涛陈锐汪静
- 关键词：肺肿瘤基因MICRORNA
- 人源抗HER2单链抗体／鱼精蛋白截短体融合蛋白的表达、纯化及鉴定
- 2012年
- 在人类乳腺癌组织中人类表皮生长因子受体2（HER2）和受体趋化因子4（CXCR4）的表达成正相关，由于HER2与CXCR4／CXCL-12轴在乳腺癌骨转移中的重要作用，使其成为可供选择的肿瘤治疗靶点。本研究将HER2单链抗体（ScFv）与鱼精蛋白截短体（tP）融合，以期获得同时具有抗原与核酸结合活性的ScFv-tP融合蛋白，核酸与该融合蛋白结合后，有望实现小分子干扰RNA（siRNA）的靶向递送，对HER2与CXCR4／CXCL-12轴进行RNA干扰（RNAi），为新型抗肿瘤药物应用于临床提供资料。
- 姜扩陈锐阎博蔡承魁贠喆王芳杨安钢裘秀春
- 关键词：融合蛋白鱼精蛋白单链抗体人类表皮生长因子受体CXCR4RNA干扰
- 单链抗体融合蛋白 SCFV15-9R 介导的SIRNA/MICRORNA 对 HBV 阳性肝癌细胞的干扰作用
- 乙型肝炎病毒的感染在中国是引发肝癌发生的最大原因。由于乙肝病毒的特殊复制过程及机体免疫细胞对病毒感染肝细胞的攻击，加之肝细胞具有的旺盛的再生能力，修复再生过程中基因突变累积，病毒基因的插入整合，造成肝硬化，肝癌。乙型...
- 陈锐
- 关键词：肝癌HBV单链抗体SIRNA
- 文献传递网络资源链接
- HV单链抗体/鱼精蛋白片段融合蛋白1A8 ScFv/Cκ/P的构建和表达
- 2008年
- 目的:构建汉坦病毒(Hantavirus,HV)单链抗体/鱼精蛋白片段融合蛋白1A8 ScFv/Cκ/P基因的原核表达载体,蛋白经表达后纯化并进行1A8 ScFv/Cκ/P融合蛋白的功能活性鉴定.方法:采用PCR的方法,扩增单链抗体基因1A8 ScFv和1A8 ScFv/Cκ,将鱼精蛋白片段的编码序列设计入扩增引物,获得HV单链抗体/鱼精蛋白片段的融合蛋白基因1A8 ScFv/Cκ/P.将获得的重组基因克隆入原核表达载体pET32a,并在大肠杆菌BL21中表达.表达产物经SDS-PAGE和Western Blot鉴定,用Ni-NTA螯合层析介质进行纯化.采用ELISA方法分析1A8 ScFv/Cκ/P融合蛋白与HV抗原的结合活性,凝胶迁移阻滞实验检测1A8 ScFv/Cκ/P融合蛋白与质粒DNA的结合活性.结果:成功构建了HV 1A8 scFv/Cκ/P融合蛋白基因的表达载体,在大肠杆菌中实现了可溶性表达.通过功能活性测定,纯化的1A8 scFv/Cκ/P融合蛋白既保持了与HV抗原的结合能力,同时又具有与核酸的结合活性.结论:构建和表达的HV 1A8 scFv/Cκ/P融合蛋白具有HV抗原结合活性和DNA结合的活性.
- 陈锐杨洁张芳琳秦炜炜王涛张瑞孟艳玲胡刚徐志凯杨安钢
- 关键词：单链抗体鱼精蛋白融合蛋白靶向输送
- 单链抗体融合蛋白ScFv15-9R介导的siRNA/microRNA对HBV阳性肝癌细胞的干扰作用
- 目的:本研究利用九聚精氨酸可以结合核酸的性质,在人源HBsAg单链抗体基因3’端插入九聚精氨酸编码序列,构建原核表达质粒,在大肠杆菌中表达ScFv15-9R融合蛋白,使得该蛋白既能靶向识别乙肝病毒表面抗原HBsAg,又能...
- 陈锐张瑞杨安钢
- 文献传递
- 人抗HER2单链抗体/精氨酸九聚体融合蛋白的基因构建、表达及鉴定被引量：3
- 2011年
- 目的:构建人源性抗HER2单链抗体(scFv)/精氨酸九聚体(9R)融合蛋白基因,在大肠杆菌里表达纯化并检测该融合蛋白的活性。方法:采用PCR的方法,扩增融合基因scFv-9R,将获得的基因克隆入原核表达载体pQE30,在大肠杆菌M15中表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定,通过Ni-NTA螯合层析纯化,透析复性,超滤浓缩。ELISA分析scFv-9R融合蛋白抗原亲和活性,凝胶迁移实验检测scFv-9R融合蛋白与siRNA结合活性。结果:成功构建了人源性抗HER2 scFv-9R融合基因,经IPTG诱导后在M15中以包涵体形式表达。表达的目的蛋白scFv-9R能与HER2抗原结合,同时具有siRNA结合能力。结论:scFv-9R具有结合抗原与siRNA双重活性,为靶向递送siRNA的研究奠定了基础。
- 姜扩陈锐王立锋马琼孟艳玲杨安钢马保安裘秀春
- 关键词：单链抗体融合蛋白靶向输送
