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杨洁: 作品数：55 被引量：298H指数：10; 供职机构：第四军医大学唐都医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金益普生腹泻基金陕西省自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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HRE/CMV启动子的克隆和缺氧调控活性的测定: 2007年; 目的:将具有缺氧调控作用的多种缺氧反应元件(HRE)与CMV启动子组合,以获得缺氧应答启动子。将荧光素酶报告基因置于缺氧应答启动子的下游,通过检测荧光素酶活性的方法,方便地研究缺氧应答启动子缺氧诱导的作用。方法:合成多种HRE核苷酸序列,并设立HRE突变对照,克隆入pCI-neo中,构建HRE/CMV启动子。扩增HRE/CMV序列,定向亚克隆入pGL3-Basic中,获得HRE/CMV荧光素酶报告载体。瞬时转染HeLa细胞,在0.1%O2环境下培养细胞,并设立正常氧分压环境对照。检测荧光素酶的相对活性。结果:成功构建了HRE/CMV荧光素酶报告载体,其中mPGK-HRE/CMV载体表现出很好的缺氧诱导作用和高水平的表达。结论:mPGK-HRE/CMV启动子能够有效地进行缺氧诱导和调控工作。; 杨洁杜德伟李占亭贾林涛赵晶许彦鸣杨安钢孙脊峰; 关键词：缺氧反应元件荧光素酶

系统性红斑狼疮致多脏器功能衰竭1例的护理: 2003年; 王莉杨洁孙脊峰李光荫王惠萍; 关键词：系统性红斑狼疮多脏器功能衰竭护理

缺氧调控载体功能活性的研究被引量：1: 2007年; 目的构建具有缺氧调控活性的基因治疗载体,其表达可由缺氧选择性诱导,用于转导基因的可控性表达。方法合成各种缺氧应答基因的缺氧应答元件（HRE）寡核苷酸序列,与巨细胞病毒（CMV）启动子组合,驱动荧光素酶报告基因和治疗基因人红细胞生成素（hEPO）的转录。检测荧光素酶的活性和hEPO的表达以确定其缺氧转录活性。结果在各种缺氧调控载体中,由鼠磷酸甘油酸激酶（mPGK）的HRE与CMV启动子组合而成的缺氧应答启动子显示出高缺氧应答性,而且缺氧诱导的表达水平与完整的CMV启动子在常氧环境下的转录水平相近。结论3HRE/mPGK/CMV缺氧调控载体对于实现治疗基因的精确调控表达可能非常有用。; 杨洁张翔陈锐杜德伟李占亭赵晶杨安钢孙脊峰; 关键词：转录荧光素酶报告基因

低分子量肝素抗凝血液透析被引量：9: 2000年; 在血液透析(HD)过程中,合理使用抗凝剂是保证慢性肾功能衰竭(CRF)患者透析质量的关键。在常规血液透析中,使用普通肝素(UFH)作为抗凝剂在防止血栓形成、保证血液透析疗效方面发挥了重要作用,但有出血危险,长期血液透析可引起胃肠道和其它部位的潜在出血。高危出血患者UFH抗凝血液透析中,出血并发症发生率高;低分子量肝素(LMWH)同UFH相比,其主要是选择性抑制凝血因子Xa而发挥抗凝血作用,其对凝血酶(Ⅱa)的作用较弱,故其具有较强抗血栓形成作用,同时有减少出血危险的潜在性,不增加出血倾向。LMWH疗效安全性优于UFH,; 杨洁张波; 关键词：低分子量肝素血液透析抗凝

TGF-β R Ⅱ真核表达载体及其RNA干扰质粒的构建及鉴定被引量：3: 2008年; 目的构建含有TGF-βⅡ型受体(TGF-β R Ⅱ)的真核表达载体及针对TGF-β R Ⅱ的RNA干扰质粒,并观察RNA干扰对TGF-β R Ⅱ表达的抑制作用。方法PCR方法扩增TGF-β R Ⅱ的cDNA序列,将全长的TGF-β R ⅡcDNA插入pcD-NA3.1中,构建TGF-β R Ⅱ的真核表达载体pcDNA3.1-TGF-β R Ⅱ,并检测其在293T细胞中的表达。根据TGF-β R Ⅱ的基因序列,设计针对TGF-β R Ⅱ的干扰RNA,构建针对TGF-β R Ⅱ的RNA干扰质粒pSUPER-TGF-β R Ⅱ。脂质体介导质粒pSUPER-TGF-β R Ⅱ和pcDNA3.1-TGF-β R Ⅱ共转染293T细胞,Western blot法检测RNA干扰质粒的生物活性。结果真核表达载体pcDNA3.1-TGF-β R Ⅱ和RNA干扰质粒pSUPER-TGF-β R Ⅱ经酶切鉴定构建正确,测序结果显示未发生基因突变。间接免疫荧光检测pcDNA3.1-TGF-β R Ⅱ转染的293T细胞,可见绿色荧光。针对TGF-β R Ⅱ的RNA干扰质粒明显抑制293T细胞内TGF-β R Ⅱ的表达。结论已成功构建了TGF-β R Ⅱ的真核表达载体及针对TGF-β R Ⅱ的RNA干扰质粒,为进一步研究针对TGF-β R Ⅱ的RNA干扰对肾纤维化的预防及治疗作用奠定了基础。; 杜德伟孙脊峰吴学勤李端杨洁李占亭; 关键词：真核表达 RNA干扰肾纤维化

大叶性肺炎患儿血清肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6、白细胞介素-8、白细胞介素-10和高迁移率族蛋白B1表达意义被引量：35: 2014年; 目的探讨大叶性肺炎患儿血清TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10和高迁移率族蛋白BI（HMGBl）水平的变化及其相关性。方法采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）检测10例健康对照儿童、3l例轻度大叶性肺炎患儿和14例重度大叶性肺炎患儿的血清TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10和HMGBI水平，分析不同程度肺炎患儿血清HMGBl、TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10水平的差异，及血清中TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10与HMGBl水平的相关性。结果重度大叶性肺炎组患儿、轻度大叶性肺炎组患儿血清TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10和HMGBl水平均显著高于健康对照组（P均〈0．05）；重度大叶性肺炎组患儿和轻度大叶性肺炎患儿血清TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10和HMGBl水平比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）。TNF-α、IL-6、IL-8与HMGBl呈中度正相关关系（r=0．444、0．365、0．466，P=0．007、0．029、0．004）；IL-10与HMGBl呈中度负相关（r=-0．485，P=0．003）。结论大叶性肺炎患儿血清TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10、HMGBl与疾病严重程度相关，而TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10、HMGBl水平测定可为小儿大叶性肺炎病情进展监测、严重程度及疗效判定等提供参考。; 杜春艳卢强李玉品杨洁王春晖田娟田姣张妮妮张良娟王宝西江逊; 关键词：大叶性肺炎肿瘤坏死因子-Α 白细胞介素-6 白细胞介素-8 白细胞介素-10 高迁移率族蛋白

IgA肾病的治疗进展被引量：12: 2007年; IgA肾病是最常见的原发性肾小球疾病,由于其发病机制尚未明确,目前仍无特异性治疗药物.临床上的治疗目标是有效降低蛋白尿,控制血压和(或)高尿酸并减少肾组织进一步损伤,维持肾功能稳定.对反复发作的镜下血尿患者,扁桃体切除术作为治疗的一种手段;对单纯性血尿和病理改变较轻者,主要加强随访观察;对于有尿蛋白和(或)高血压的缓慢进展的IgA肾病,血管紧张素转化酶抑制剂和血管紧张素受体拮抗剂可用于大部分病例,必要时可使用糖皮质激素,也可应用细胞毒性药物或吗替麦考酚酯等免疫抑制剂进行治疗;病情进展较快的高危患者,可用糖皮质激素冲击治疗,或使用细胞毒药物或免疫抑制剂等强化治疗.; 李占亭杨洁孙脊峰杜德伟刘丽丽王莉; 关键词：IGA肾病

天然蒙脱石对大鼠急性肝衰竭血中内毒素及单核细胞表面Toll样受体4表达的影响被引量：3: 2009年; 目的研究大鼠急性肝衰竭时血中内毒素(LPS)及单核细胞表面TLR4表达的变化以及天然蒙脱石(思密达)对其表达的影响。方法腹腔注射半乳糖胺建立大鼠急性肝衰竭模型。50只SD雄性大鼠随机分为空白组(A组)、对照组(B组)、模型组(C组)、思密达预防组(D组)和思密达治疗组(E组)。采用双色荧光染色法检测血中LPS;荧光素标记的抗TLR4/抗CD14对大鼠血液单核细胞表面TLR4及CD14分子进行免疫荧光染色,流式细胞仪检测。结果与A组比较,C组、D组和E组LPS及TLR4表达均显著增高(P<0.01);与C组比较,D组和E组LPS及TLR4表达显著降低(P<0.05);D组与E组相比,D组LPS及TLR4表达较低(P<0.05);B组与A组比较LPS及TLR4差异均无统计学意义(P>0.05)。结论大鼠急性肝衰竭时,血中LPS及TLR4的表达显著上调,用思密达预防和治疗后显著下调,且预防组下调更为显著。; 杨洁王安辉聂青和刘清泉李运明阎永平; 关键词：TOLL样受体4 CD14 内毒素急性肝衰竭

IRS-2 siRNA对肾母细胞瘤G401细胞增殖的影响及其分子机制被引量：3: 2016年; 目的观察胰岛素受体底物2(IRS-2)siRNA对肾母细胞瘤G401细胞增殖的影响,探讨其分子机制。方法应用siRNA干扰IRS-2表达,将G401细胞分为空白对照组、阴性对照组和IRS-2 siRNA组,空白对照组不做处理,阴性对照组转染阴性对照siRNA,IRS-2 siRNA组转染IRS-2特异性siRNA。MTT法检测IRS-2对肾母细胞瘤G401细胞增殖的影响,流式细胞术分析IRS-2 siRNA对细胞周期和凋亡的影响,Western blot检测IRS-2 siRNA对p-Akt、Akt、CDK2和Cyclin A2表达的影响。结果与空白对照组和阴性对照组相比,IRS-2 siRNA组G401细胞的IRS-2 mRNA和蛋白的表达均显著下调(P<0.01),IRS-2 siRNA抑制肾母细胞瘤G401细胞增殖;与空白对照组和阴性对照组相比,IRS-2 siRNA组G401 S期细胞数量显著增加(P<0.01),G2/M期细胞数量显著减少(P<0.01),IRS-2 siRNA组G401细胞的早期凋亡和晚期凋亡显著增加(P<0.01);与空白对照组和阴性对照组相比,IRS-2 siRNA组p-Akt、CDK2和Cyclin A2在蛋白水平的表达均下调(P<0.01)。结论 IRS-2通过激活Akt信号通路,调控CDK2和Cyclin A2的表达,进而促进肾母细胞瘤G401细胞增殖。; 杨洁王宝西; 关键词：胰岛素受体底物2 肾母细胞瘤细胞增殖 AKT信号通路

前列腺素E_1对糖尿病肾病患者肾动脉血流动力学的影响被引量：22: 2006年; 目的:了解前列腺素E1(PGE1)对糖尿病肾病(DN)患者肾动脉血流动力学的影响.方法:利用彩色多普勒观察95例DN患者经PGE1治疗前后的肾动脉血流动力学的变化.结果:DN患者肾动脉血流动力学的各项参数,特别是肾动脉内径、时间速度积分、阻力指数变化显著(P<0.01);PGE1治疗后,其各项参数均有明显的变化(P<0.05);同时BUN,Cr水平由治疗前的(10.1±5.4)mmol/L,(194±51)μmol/L降至(7.9±6.0)mmol/L,(99±35)μmol/L,尿量由(948±128)mL/d增至(1242±373)mL/d,均有明显的改善(P<0.05).结论:DN时多伴有凝血、纤溶障碍所导致的肾动脉血流动力学的变化,应用PGE1治疗有益于延缓肾功能的恶化.; 孙脊峰赵柏山焦凯杨洁李占亭杜德伟段云友; 关键词：前列腺素E1 糖尿病肾病肾血流

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