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达托霉素发酵培养基的响应面法优化被引量：13: 2010年; 采用Plackett-Burman设计、最陡爬坡试验与响应面设计相结合的方法优化达托霉素发酵培养基组成,利用Design Expert7.0软件设计试验并分析数据。结果表明,培养基中的糊精、酵母粉、酪蛋白水解物是影响达托霉素产量的主要因素。优化后的培养基组成/g·L-1为:糊精10.6,酵母粉1.6,酪蛋白水解物1.3,硫酸钾8,L-门冬氨酸1.5;pH6.5。在此条件下,达托霉素产量为37.16mg/L。进一步优化前体癸酸的添加量,最终达托霉素产量达46.54mg/L。; 祝宇松陈国胜吴旻缪小亮徐健王旻; 关键词：达托霉素 PLACKETT-BURMAN设计响应面设计

乙酰氨基葡萄糖转移酶KfiA的共表达与纯化被引量：1: 2014年; 在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达并纯化大肠杆菌K5中合成肝素前体的关键酶Kfi A,为生物酶法合成肝素提供参考。提取大肠杆菌K5的基因组DNA,用PCR方法扩增目的基因,并将其克隆到表达载体p ET-21b中,使用限制性内切酶Bam HⅠ和XhoⅠ酶切鉴定并进行DNA测序;将该重组表达载体与分子伴侣p Gro7共转化大肠杆菌BL21(DE3),用L-阿拉伯糖和IPTG诱导表达,并对不同表达条件下的产物进行SDS-PAGE分析,优化表达条件;采用His Trap FF琼脂糖凝胶柱对目的蛋白进行亲和纯化,并通过蛋白印迹法鉴定目的蛋白。结果:克隆出Kfi A目的基因,构建了融合表达质粒p ET-21b/Kfi A;SDS-PAGE检测表明获得了目的蛋白,用His Trap FF琼脂糖凝胶柱纯化并通过蛋白印迹法确定得到纯度较高的蛋白。为进一步研究生物酶法合成肝素打下基础。; 沈忱王杰缪小亮王莹吴洁王玉峰陈向东尹鸿萍; 关键词：大肠杆菌分子伴侣共表达纯化

蝙蝠娥被孢霉多糖抗肿瘤和免疫功能研究被引量：1: 2012年; 从蝙蝠娥被孢霉液体发酵的菌丝体中,采用热水提取,65%乙醇沉淀,DEAE-52和G-100分子筛分离、纯化得到了一个组分均一的天然多糖—蝙蝠娥被孢霉多糖(CPSM,Cordyceps Polysaccharides of Mortierella hepiali),其由甘露糖、葡萄糖和半乳糖3种单糖组成。体内实验表明,该多糖对小鼠移植瘤有明显抑制生长作用,但是在体外实验中对人肺癌细胞株A549、人肝癌细胞株Hep-G2、急性粒细胞白血病细胞株HL-60均没有表现出细胞毒作用。推测该CPSM是通过调节小鼠免疫系统的功能达到抑制移植瘤生长作用的。对移植瘤小鼠进行了T、B淋巴细胞增殖和NK细胞活性的实验表明灌胃给与多糖的小鼠组T、B淋巴细胞的增殖明显快于正常组,NK细胞活性大于正常组。而CPSM在体外对于小鼠腹腔巨噬细胞同样具有活化功能,增强巨噬细胞NO的分泌。; 王凯启王莹缪小亮尹鸿萍倪孟祥; 关键词：抗肿瘤免疫功能

硫酸氨基葡萄糖的HPLC法测定被引量：2: 2012年; 建立了高效液相色谱法测定硫酸氨基葡萄糖。采用C8色谱柱,以0.05%磷酸(用30%氢氧化钾溶液调至pH 3.0)-乙腈(60︰40)为流动相,检测波长195 nm。氨基葡萄糖在0.01～1.87 mg/ml浓度范围内线性关系良好。回收率为100.4%,RSD为1.81%。; 缪小亮彭秀兰马彪罗晨尹鸿萍; 关键词：硫酸氨基葡萄糖高效液相色谱

一种脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白及其单克隆抗体的制备和应用: 本发明属于生物技术领域。本发明涉及一种重组人脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白及其单克隆抗体的制备与应用，以及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株2E4，于2013年10月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为...; 王莹缪小亮李诗尹鸿萍王旻; 文献传递

蝙蝠蛾被孢霉多糖的分离纯化及理化性质被引量：1: 2012年; 目的提取蝙蝠蛾被孢霉多糖,并对其理化性质进行研究。方法利用水提醇沉法得到粗多糖CPSM,采用硫酸-蒽酮法测定粗多糖含量,考马斯亮蓝法测定蛋白质含量,薄层色谱法检查是否含有单糖。CPSM经纤维素DE-52柱分离得CPSM-1和盐洗脱多糖。两种多糖分别经Sephadex系列凝胶柱分离纯化得到CPSM-1a和CPSM-2,采用光谱法和色谱法测定其单糖组成、分子质量等。结果粗多糖CPSM糖含量为61.4%,蛋白含量为1.8%,不含还原糖。CPSM-1a主要含有甘露糖、半乳糖和葡萄糖,其摩尔比约为5∶2∶3;CPSM-2主要含有甘露糖、半乳糖醛酸、半乳糖、葡萄糖和木糖,其摩尔比约为5∶1∶2∶1∶1。CPSM-1a和CPSM-2重均分子质量分别为8.8×103和7.6×103。结论 CPSM-1a为一水溶性中性多糖,CPSM-2为一水溶性酸性多糖。; 刘佩佩缪小亮尹鸿萍奚涛; 关键词：多糖理化性质

虫草多糖的分离提纯及对体外肾细胞损伤和急性肾衰动物模型的保护与治疗作用被引量：2: 2013年; 目的:探讨从虫草头孢菌粉中提取活性多糖组分,考察其对体外顺铂诱导大鼠肾细胞损伤和肌注甘油诱导急性肾衰大鼠模型的保护与治疗作用。方法:采用水提醇沉法从虫草头孢菌粉中提取分离多糖组分,同时通过MTT实验体外考察各组分对顺铂诱导MDCK和Vero细胞损伤的保护作用;根据体外活性筛选结果,选定活性虫草多糖组分,用于动物模型实验灌胃给药,进一步考察其对肌注甘油诱导急性肾衰大鼠模型的治疗作用,考察指标包括血液和尿液生化指标、24 h尿量、肾脏指数以及肾脏组织切片病理学检查。结果:从虫草头孢菌粉中提取分离得到组分A～H;经MTT实验体外筛选出其中活性较好的虫草多糖组分G,其灌胃给予肌注甘油诱导急性肾衰模型大鼠后,可显著降低模型大鼠血清总蛋白、尿素氮、肌酐和K+水平以及尿蛋白、尿酮体、尿红细胞和白细胞水平与肾脏指数,显著提高模型大鼠血清Na+水平和24 h尿量,并使模型大鼠肾脏病理学损伤明显改善。结论:采用水提醇沉法可从虫草头孢菌粉中有效分离提纯活性多糖组分,其中65%乙醇醇沉得到的虫草多糖组分为虫草中具肾脏保护作用的活性部位,对急性肾损伤有防治作用。; 赵欢王莹缪小亮王玉峰尹鸿萍王旻; 关键词：虫草多糖急性肾衰 MTT实验大鼠模型肾脏活检

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缪小亮

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