薛慧慧
- 作品数：6 被引量：6H指数：2
- 供职机构：东华大学更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- qPCR array检测高糖对胆固醇合成基因表达的影响被引量：3
- 2014年
- 目的:高血糖易引起胆固醇在体内积聚,增加糖尿病合并动脉粥样硬化性心血管疾病的患病风险。本文通过建立稳定的实时定量PCR芯片(Real-time quantitative polymerasechain reaction array,qPCR array)检测方案,研究高糖对小鼠肝癌细胞Hepa1-6胆固醇合成基因表达的影响,探讨胆固醇合成基因在糖尿病大血管并发症发展中的作用机制。方法:以不同浓度葡萄糖(5、15、30mmo/L)和不同时间(0、6、12、18、24 h),刺激肝癌细胞Hepa1-6,利用qPCR array检测其胆固醇合成基因的表达差异。结果:与5mmol/L相比,高糖组(15、30 mmo/L)处理细胞18 h后,胆固醇合成基因CYP51、EBP、NSDHL、SQLE、FDFT1和PMVK的表达上调(P<0.05),呈现剂量依赖性。与0 h相比,15 mmol/L高糖处理细胞12 h,CYP51、EBP和SQLE mRNA表达量上调(P<0.01)。至24 h,CYP51、EBP降至0 h水平,而SQLE的表达量继续增加;NSDHL在12 h表达无差异,至18 h表达量发生上调(P<0.05)。结论:该qPCR array检测方案能特异性检测胆固醇合成基因的表达量。高糖能够促进胆固醇合成基因的表达,使细胞内胆固醇积聚,这可能是糖尿病患者容易发生动脉粥样硬化的原因。这提示我们将胆固醇合成基因作为药物靶点可能延缓糖尿病动脉粥样硬化进展。
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- 关键词：高糖胆固醇合成
- 一种改进的茎环引物qRT-PCR检测miRNA的方法
- 本发明涉及一种改进的茎环引物qRT-PCR检测miRNA的方法，包括：（1）miRNA检测引物的设计：茎环引物包括两部分，通用的茎环序列和与靶标miRNA3’端互补配对的特异引物序列，其中与靶标miRNA互补配对的碱基数...
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- 文献传递
- miR-505慢病毒表达载体的构建
- 2014年
- 目的:构建携带增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)和miR-505基因的慢病毒载体。方法:采用PCR方法从pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR-505表达载体质粒扩增出miR-505 shRNA基因编码区173bp、175、171bp片段,通过限制性酶切、T4DNA连接酶连接,分别将miR-505 shRNA基因插入慢病毒表达载体FUGW与L26Fsy(1.1)GW中,构建成重组载体FUGW-miR-505-3p/5p/nc与Fsy-miR-505-3p/5p/nc。脂质体介导下将慢病毒重组载体转染至HEK 293T细胞,通过EGFP观察转染效率,RT-PCR方法检测miR-505的表达量。结果:荧光显微镜下观测到HEK 293T细胞转染后有较强绿色荧光;RT-PCR显示转染FUGW-miR-505-3p/5p与Fsy-miR-505-3p/5p的HEK 293T细胞中对应miR-505-3p/5p明显升高。结论:成功构建带有EGFP和miR-505-3p/5p/nc shRNA基因的慢病毒表达载体。
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- 关键词：慢病毒载体瞬时转染RT-PCR
- 一种改进的茎环引物qRT-PCR检测miRNA的方法
- 本发明涉及一种改进的茎环引物qRT‑PCR检测miRNA的方法，包括：（1）miRNA检测引物的设计：茎环引物包括两部分，通用的茎环序列和与靶标miRNA3’端互补配对的特异引物序列，其中与靶标miRNA互补配对的碱基数...
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- 文献传递
- 改进茎环引物RT-PCR法实时定量检测microRNA被引量：3
- 2014年
- 目的:为检测不同组织中microRNA(miRNA)的表达量,本研究建立了一种改进的qRT-PCR(Quantitative reverse transcription PCR)技术。方法:采用具有高特异性的茎环引物逆转录,结合SYBR Green实时定量PCR技术,建立了以延伸茎环引物RT-PCR为基础的实时定量检测microRNA的方法。结果:本研究建立的microRNA检测方法,特异性好,灵敏度高,线性范围宽。熔解曲线的单一峰型和电泳检测到的单一条带都证明了扩增的特异性。对标准品的检测跨越了7个数量级的浓度范围,最低拷贝数为103,效率高达98%。结论:利用该技术检测了120个组织样本,说明该方法可快速、准确、高效的获取不同组织中miRNA的表达量,为进一步探讨miRNA对性发育的影响提供了实验依据。
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- 关键词：MIRNART-PCR
- miR-505转基因小鼠基因表达量的检测及生理性状的观测
- 性发育(puberty)是哺乳动物个体性成熟并获得生殖能力的过程，受到遗传、环境等多种因素的影响。下丘脑-垂体-性腺轴系统控制着人类生殖系统的发育、成熟及功能的维持，对哺乳动物性发育起着决定性的作用，其所分泌的各种激素水...
- 薛慧慧
- 关键词：动物模型性发育生理性状基因表达量
- 文献传递
