周宇荀
- 作品数：139 被引量：182H指数：7
- 供职机构：东华大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金上海市科学技术委员会资助项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学文化科学更多>>
- 人碱性成纤维细胞生长因子在大肠杆菌中的融合表达
- 1997年
- 将人碱性成纤维细胞生长因子ｈｂＦＧＦ基因克隆于质粒ｐＧＥＸ，构建了融合蛋白ＧＳＴ－ＦＧＦ的表达质粒ｐＧＥＸ－ＦＧＦ，将ｐＧＥＸ－ＦＧＦ转化大肠杆菌ＤＨ５α，诱导培养后测得融合蛋白表达量占菌体总蛋白量的２２％，每升发酵液中可产生１８８ｍｇＧＳＴ－ＦＧＦ。纯化后的ＧＳＴ－ＦＧＦ用ＥＬＩＳＡ方法检测，证明它有ＦＧＦ的抗原性，以鼠ＢＡＬＢ／ｃ３Ｔ３测得它具有ｂＦＧＦ的促细胞分裂活性。
- 周宇荀魏东芝沈林南王二力
- 关键词：融合蛋白HBFGFFGF大肠杆菌
- 特异区段替换小鼠性发育表型的研究被引量：1
- 2013年
- 目的了解性发育相关数量性状基因座(quantitative trait locus,QTL)(DXMit68-rs29053133)在近交系小鼠A/J和C3H/HeJ(C3H)中是否存在影响表型的序列差异,以帮助对候选基因进行筛选。方法利用A/J和C3H构建了针对该区段的特异区段替换系小鼠,并对其雌鼠的性发育相关性状进行研究。结果 A/J和C3H在这一QTL中染色体的序列差异,没有引起相关性状的明显差异。结论研究结果显示,A/J和C3H小鼠中该QTL区段中存在序列差异的基因并不是引起性发育表型产生差异的候选基因。
- 张婷婷仝莉肖君华李凯周宇荀
- 关键词：性发育表型
- MicroRNA-29b过表达慢病毒载体的构建及其生物学特性的研究被引量：1
- 2017年
- 目的:构建针对小鼠microRNA-29b过表达的慢病毒载体,研究其在小鼠神经元GT1-7细胞系中的生物学特性。方法:化学合成两条寡聚核苷酸单链,通过搭桥互补延伸成DNA双链,形成miR-29b的前体结构,将酶切后的慢病毒载体FUGW通过同源重组的方法与miR-29b的前体结构进行连接,构建相应microRNA-29b过表达慢病毒载体,并包装成病毒颗粒后转染小鼠神经元细胞系GT1-7,通过博来霉素药物筛选获得稳转株,RT-PCR检测相关基因在mRNA转录水平上表达量情况。结果:测序图谱证实重组慢病毒表达质粒f-F-miR-29b构建成功,GT1-7细胞稳转株中,miR-29b的表达量与对照组相比提高了约28倍,其靶基因DCX,Vdac1,Pten的表达量有所抑制,性发育相关基因LH-β,kiss-1,Inshulin,IGF-I,GPR54,GnRH,leptin-R没有明显变化。结论:利用慢病毒筛选的方法,成功在小鼠神经元GT1-7细胞中获得microRNA-29b过表达稳转株,为以后microRNA-29b的生物学特性的研究奠定了基础。
- 李文文曲妍佳肖君华李凯周宇荀
- 关键词：靶基因
- 一种在哺乳动物细胞系中敲除mir-505的方法
- 本发明涉及一种在哺乳动物细胞系中敲除mir-505的方法，通过体外合成sgRNA的核苷酸单链，再经过处理得到插入片段，随后将sgRNA利用同源重组或T4连接插入到41824载体中或42230载体中，转化至大肠杆菌的感受态...
- 邓倩云周宇荀常雪莹王斯佳肖君华李凯
- 文献传递
- miR-505-3p对GT1-7细胞株基因表达谱的影响
- 2016年
- 目的了解微小RNA 505-3p(miR-505-3p)对下丘脑GnRH神经元GT1-7稳转细胞株表达谱的影响。方法用慢病毒转染GT1-7细胞获得稳定表达miR-505-3p的细胞株,感染实验分为3组:空白对照组(未经处理的GT1-7细胞),阴性对照组(感染pLenti6.3-nc空病毒),实验组(感染pLenti6.3-miR-505-3p病毒)。采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)技术检测稳定细胞株中miR-505-3p的表达丰度,并进一步利用芯片检测对照组和实验组细胞的表达谱结合生物信息学方法探寻差异表达基因。采用GO分析和Pathway分析差异表达基因,解析miR-505-3p的功能。结果在稳定表达miR-505-3p的GT1-7细胞中,165个基因的表达量变化在2倍以上,这些基因主要参与细胞粘附、GTP分解代谢、神经系统发育等生物过程。结论 miR-505-3p可能通过影响下丘脑GnRH神经元中相应靶基因的表达调控细胞粘附、GTP分解代谢、神经系统发育等生物过程,和间隙连接、轴突导向和胃酸分泌等信号通路。
- 仝莉李雨王茂春周宇荀肖君华
- 关键词：表达谱
- 一种检测农田生态环境的高通量多重LDR分型试剂盒
- 本发明涉及一种检测农田生态环境的高通量多重LDR分型试剂盒，包括：农田16种物种的线粒体COI基因通用引物，上游：5′-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3′；下游：5′-TAAACTTCAGGGTGA...
- 赵丽亚李凯田俊策叶恭银陈强周宇荀肖君华
- 文献传递
- 纳米生物条形码技术在分子诊断中的应用被引量：5
- 2008年
- 纳米生物条形码技术是一种新型的分子诊断技术,在核酸和蛋白质检测领域已经分别达到和超过现今的检测灵敏度。该技术采用纳米颗粒修饰的核酸或抗体对靶分子进行识别,并利用磁场将其分离,操作简单,不依赖酶反应,具有广泛的应用前景。该技术在病毒DNA、癌症的指标蛋白质等方面的应用已有文献报道,并有望成为一种常规的分子诊断工具。
- 贺明星李凯周宇荀肖君华
- 关键词：分子诊断核酸蛋白质
- 利用荧光PCR技术对Crispr/Cas9敲除microRNA505的小鼠进行鉴定
- 2016年
- 利用荧光PCR技术对Crispr/Cas9系统敲除的micro RNA 505小鼠进行鉴定,能快速检测出敲除小鼠的基因型,有效加快敲除小鼠基因功能验证的进程。首先,在Crispr/Cas9系统敲除的基因位点区域设计PCR引物,并在上游引物的5′端使用羟基荧光素(5-carboxyfluorescein,FAM)荧光修饰。模板经过PCR的扩增后,将PCR产物与已知片段大小的6-羧基-X-罗丹明琥珀酰亚胺酯(6-carboxy-X-rhodamine,ROX)混合,在377测序仪上通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离。随后,根据相对分子质量内标法计算出PCR产物大小,从而达到鉴定小鼠基因型的目的。将上述荧光PCR技术应用于实践发现,两只奠基鼠、16只F1代小鼠以及26只F2代小鼠都能得到准确的鉴定,其中包括microRNA 505基因区段被敲除了17 bp和23 bp。因此,利用荧光PCR技术可以快速、准确地鉴定Crispr/Cas9敲除小鼠。
- 仝莉王茂春李雨李凯周宇荀肖君华金力
- 关键词：荧光PCR技术基因型鉴定
- 二代测序应用于检测GT1-7细胞中KISS1和GnRH启动子的DNA甲基化状态的研究被引量：1
- 2017年
- 目的:利用二代测序技术检测GT1-7细胞中KISS1和GnRH基因启动子范围内的甲基化状态,并用金标准的亚硫酸氢盐修饰后的克隆测序作为对照,比较二代测序与金标准克隆测序在研究DNA甲基化检测中的差别。方法:提取GT1-7细胞基因组DNA并进行亚硫酸氢盐处理。进行巢式PCR,将PCR产物进行二代测序。同时采用金标准的亚硫酸氢盐修饰后克隆测序的方法作为对照,对相同批次的PCR产物进行克隆测序。结果:PCR产物二代测序结果表明KISS1和GnRH两个基因的27个CpG甲基化位点信息完整,结果准确。挑取10个克隆进行一代测序结果表明序列无丢失,KISS1和GnRH两个基因的27个CpG甲基化位点信息完整。结论:利用高通量的二代测序技术能够有效的对DNA甲基化的PCR产物进行检测,二代测序和克隆测序都是研究DNA甲基化的有效方法,但前者与克隆测序相比每一个读取序列(reads)都相当于一个单克隆,且二代测序每个区段得到成百上千个reads,因此二代测序结果更加精确。
- 贾梅兰王茂春徐园周宇荀李凯肖君华
- 关键词：启动子甲基化克隆测序
- 细胞培养液中细菌、真菌多重荧光定量PCR检测方法的建立及验证
- 2024年
- 目的建立细胞培养液中常见细菌和真菌的多重荧光定量PCR检测方法,并进行验证。方法选取金黄色葡萄球菌NUC基因、生孢梭菌COLA基因和白色念珠菌ITS-2区段基因,分别设计1组引物及探针,并以辣椒UBI3基因作为外标基因,建立金黄色葡萄球菌、生孢梭菌和外标基因的三重反应体系及白色念珠菌和外标基因的两重反应体系。验证方法的引物特异性、线性范围、检测限、专属性、抗干扰性和精密性。采用建立的方法对100份293T细胞培养液样本进行检测,同时与普通PCR法进行比较。结果3对引物于不同退火温度(56、57、58、59℃)下均可扩增出对应3种菌约100 bp的特异性基因条带,大小与预期相符;3种菌标准品质粒在5.80×10^(6)~5.80×10^(2)copies/μL范围内,与Ct均呈良好的线性关系,标准曲线方程分别为:Y=-3.373 X+37.48、Y=-3.557X+36.59、Y=-3.536 X+39.78,R^(2)均>0.99,扩增效率均在90%~110%范围内;3种菌的检测限均为101CFU/mL;3种菌的引物及探针在易发生交叉反应的6种细胞基因组DNA上无特异性扩增;293T细胞、酵母菌、大肠埃希菌、支原体的基因组DNA对检测无影响;重复性和中间精密性验证CV均<15%。100份细胞培养液样本中,检出14份阳性及86份阴性样本,随机挑选的3个阳性和2个阴性样本普通PCR法检测结果与建立的方法一致。结论建立的用于检测细胞培养液中细菌、真菌的多重荧光定量PCR法具有良好的专属性、抗干扰性和精密性,且简便易操作、成本低、灵敏度高,可快速检测细胞培养过程中的污染情况。
- 孙锈锈徐逸梦周宇荀李凯肖君华
- 关键词：细胞培养液细菌真菌
