王斯佳
- 作品数：15 被引量：2H指数：1
- 供职机构：东华大学更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 一种在哺乳动物细胞系中敲除mir-505的方法
- 本发明涉及一种在哺乳动物细胞系中敲除mir-505的方法，通过体外合成sgRNA的核苷酸单链，再经过处理得到插入片段，随后将sgRNA利用同源重组或T4连接插入到41824载体中或42230载体中，转化至大肠杆菌的感受态...
- 邓倩云周宇荀常雪莹王斯佳肖君华李凯
- 文献传递
- 慢病毒介导的下丘脑中过表达miR-505小鼠模型的构建
- 2015年
- 目的:本文用慢病毒定点注射的方法构建了在下丘脑中过表达mi R-505的小鼠模型,并利用荧光原位杂交方法在冰冻切片组织上快速检测mi RNAs,以确认慢病毒载体介导的mi R-505在丘脑中的表达能力。方法:实验小鼠在脑立体定位仪下定位到下丘脑位置,采用原位注射的方式进行慢病毒注射,注射后采用实时荧光定量RCR和应用了LNA探针和TSA系统的FISH(fluorescence in situ hybridization)技术,完成在慢病毒介导的mi R-505过表达老鼠下丘脑区域细胞中的mi R-505检测和示踪。结果:mi R-505慢病毒注射未成年小鼠下丘脑区5、10、20和40天后,均可检测到mi R-505在下丘脑区域的表达,且实验结果表明在慢病毒介导的过表达小鼠下丘脑注射部位,mi R-505表达量有明显的提高。结论:利用慢病毒注射未成年小鼠下丘脑脑区的方法,成功的建立了下丘脑中过表达mi R-505的小鼠模型,使用LNA标记探针的FISH方法探索mi RNA表达规律较稳定,且重复率高。
- 常雪莹邓倩云王斯佳肖君华李凯周宇荀
- 关键词：荧光原位杂交锁核酸
- 一种mir-505双等位基因敲除的方法
- 本发明涉及一种mir-505双等位基因敲除的方法，包括：构建两种针对mir-505基因的打靶载体，在哺乳动物细胞中通过CRISPR/Cas系统介导打靶载体对mir-505基因进行替换敲除，利用G418抗性筛选得到mir-...
- 周宇荀邓倩云常雪莹王斯佳肖君华李凯
- 一种用于研究Kiss1基因表达调控的报告系统及其构建方法
- 本发明涉及一种用于研究Kiss1基因表达调控的报告系统及其构建方法，所述系统为红色荧光蛋白稳定表达，绿色荧光受Kiss1表达调控元件调控的双荧光Kiss1基因表达调控报告系统。构建方法包括：构建红色荧光蛋白打靶载体Ai9...
- 周宇荀李晓宁王斯佳李文文肖君华李凯
- 文献传递
- 一种利用流式细胞仪进行目的基因表达定量检测的方法
- 本发明提供了一种利用流式细胞仪进行目的基因表达定量检测的方法，在表达待研究的目的基因的细胞中，敲入红色荧光蛋白基因；在目的基因的阅读框中，敲入绿色荧光蛋白基因；使红、绿色荧光蛋白基因与目的基因同时表达，但彼此独立形成各自...
- 周宇荀李晓宁王斯佳肖君华李凯
- 文献传递
- 一种同时表达多个sgRNA的载体的构建方法
- 本发明涉及一种同时表达多个sgRNA的载体的构建方法，将待串联的n个sgRNA分别插入相应的42230载体；通过PCR扩增，扩增出sgRNA<Sub>2</Sub>的表达框，然后通过无缝克隆在第一个sgRNA<Sub>1...
- 周宇荀李晓宁李文文王斯佳肖君华李凯
- 文献传递
- 一种热启动Taq酶的热启动效率表征方法
- 本发明涉及一种热启动Taq酶的热启动效率表征方法，所述表征方法为手工热启动法、热变性时间法、最低循环数法、多重PCR法以及热变性时间与多重PCR法结合。本发明的热启动Taq酶，解决了使PCR反应发生引物二聚体以及非特异性...
- 周宇荀李晓宁林天音王斯佳李文文肖君华李凯
- 文献传递
- 利用基因工程小鼠和GT1-7细胞系研究miRNA对性发育的影响
- MicroRNAs(miRNAs)是一类长度大约为22nt的非编码小RNAs，它能通过靶向结合mRNA3'端非编码区（3'UTR）调控大量生物学过程包括细胞增殖与凋亡、神经元分化、肿瘤产生以及个体发育。本实验室之前的研究...
- 王斯佳
- 关键词：性发育生殖力
- 文献传递
- 一种对GT1-7细胞进行基因编辑的方法
- 本发明涉及一种对GT1-7细胞进行基因编辑的方法，包括：将GT1-7细胞铺于24孔板中；待细胞贴壁生长，将含有Cas9基因和嘌呤霉素抗性基因的42229质粒转染进入GT1-7细胞系；待细胞表达嘌呤霉素基因，用嘌呤霉素筛选...
- 王斯佳周宇荀邓倩云李晓宁李文文肖君华李凯
- 文献传递
- 利用CRISPR系统介导人类mir-505基因位点的编辑被引量：1
- 2016年
- 目的:通过针对人源mir-505基因,设计不同sgRNA,从而利用CRIPSR系统对mir-505基因位点进行编辑,并探讨CRISPR系统对靶点的剪切效率的影响因素。方法:针对人源mir-505基因设计两条具有不同GC%的sgRNA,随后分别将其构建入41824-sgRNA表达载体和42230-Cas9蛋白/sgRNA共表达载体,并将表达载体利用脂质体转染法转染入人类细胞,通过T7E1assay检测不同CRISPR系统对靶点剪切效率的影响。结果:对靶点的剪切与Cas9蛋白和sgRNA的剂量成正比;当sgRNA与Cas9蛋白共传递时,也能够明显提高靶点的剪切效率;而较低的sgRNA的GC%会降低其对靶点的剪切效率。结论:本研究利用CRISPR系统靶向人源细胞的mir-505基因,使得mir-505基因发生突变。CRISPR系统对靶点的剪切效率和sgRNA和Cas9蛋白的剂量、sgRNA是否和Cas9蛋白共传递以及sgRNA的GC%有关。
- 邓倩云常雪莹王斯佳肖君华李凯周宇荀
- 关键词：ASSAY
