陈蔚文
- 作品数：44 被引量：101H指数：6
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- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 氯化钴诱导PC12细胞凋亡的分子机制被引量：7
- 2005年
- 目的确定氯化钴(CoCl2)诱导PC12细胞凋亡的分子机制。方法500μmolLCoCl2诱导PC12细胞24h后,检测活性氧(ROS)生成量的变化以及抗氧化剂N乙酰半胱氨酸(NAC)、二硫代苏糖醇(DTT)对细胞存活率和ROS生成量的影响;琼脂糖凝胶电泳检测NAC、DTT对CoCl2诱导PC12细胞DNA片段化的影响;利用RTPCR法检测凋亡相关基因bclxl和bax在PC12细胞调亡过程中的表达及NAC、DTT对基因表达的影响;化学发光法检测NAC、DTT对Caspase3表达的作用。结果在CoCl2诱导PC12细胞凋亡中,ROS生成量明显上升,为正常时的2.92倍;NAC、DTT可提高细胞存活率,由53.1%上升为94.8%和92.3%(P<0.01),并有效抑制ROS的生成,为正常时的24.2%和82.1%(P<0.01);同时抑制DNA片段化的发生。bclxl在细胞凋亡过程中表达明显下降,bax表达无明显变化;NAC和DTT可使bclxl的表达明显上升。Caspase3在细胞凋亡中被激活,NAC、DTT可抑制Caspase3的表达(P<0.01)。结论ROS介导了CoCl2诱导的PC12细胞凋亡,这一过程与抑制bclxl表达,激活Caspase3有关。
- 曾季平王立祥胡晓燕杨玲玲孔峰吴伟芳陈蔚文崔行
- 关键词：氯化钴PCI2细胞细胞凋亡活性氧
- 利用序列特异性DNA亲和层析分离纯化一种前列腺细胞核蛋白被引量：2
- 2001年
- 目的 :分离纯化RFA结合蛋白并加以鉴定 ,为进一步深入研究RFA及其结合蛋白相互作用和参与AR介导的PSA基因表达奠定基础。方法 :培养人前列腺癌细胞PC 3,提取核蛋白 ,以RFA序列为探针进行亲和层析分离纯化目的蛋白 ,层析前后均用电泳迁移率变动分析 (EMSA)检测目的蛋白的功能。经SDS PAGE测定纯化蛋白的分子量 ,然后切下目的蛋白条带 ,进行蛋白质鉴定。结果 :纯化蛋白在SDS PAGE图谱上 36kD附近呈现单一条带 ,氨基酸组成分析和质谱分析显示纯化蛋白条带含有 2种蛋白 ,与核内不均一核糖核蛋白A1,A2 (hnRNPA1,A2 )高度同源。结论 :①以DynalM 2 80链亲和素磁珠为固相介质的DNA亲和层析 ,具有简便、快速、无毒的优点 ,可在对目的蛋白了解甚少的条件下 ,以较高的纯度将其纯化 ;②RFA结合蛋白与hnRNP超家族成员hnRNPA1,A2高度同源 ,其与RFA相互作用的具体机制和意义有待进一步研究。
- 陈蔚文张建业赵健张莲英陈留存张孟业
- 关键词：核糖核蛋白前列腺特异抗原前列腺癌
- 前列腺癌相关基因AMACR的转录调控研究
- 近年来随着人口老龄化及饮食结构的改变,前列腺癌的发病率和死亡率有迅速上升的趋势,探索前列腺癌的综合治疗方法尤其是基因治疗已日益受到重视。AMACR是新近发现的前列腺癌高度相关的基因,本课题对其在前列腺癌细胞中的表达调控机...
- 陈蔚文
- 关键词：前列腺癌启动子转录
- 文献传递
- miRNA let-7a1真核表达载体的构建及对肺癌细胞增殖的影响被引量：3
- 2009年
- 目的:构建miRNA let-7a1真核表达载体,研究其在肺癌A549细胞株的表达及对A549细胞增殖的影响。方法:以人肺癌细胞A549的总RNA为模板,RT-PCR扩增miRNApre-let-7a1基因序列,将miRNApre-let-7a1基因克隆到真核表达载体pSilencerTM4.1-CMVneo中,构建成pSilencerTM4.1-let-7a1重组体。将pSilencerTM4.1-let-7a1表达载体瞬时转染肺癌A549细胞,RT-PCR法检测miRNAlet-7a1在转录水平的表达。根据miRBaseTargets数据库,查hsa-let-7a1靶序列,构建let-7a1靶序列-报道基因融合质粒pMIR-report-let-7a1T,与pSilencerTM4.1-let-7a1表达载体共转染A549细胞,通过荧光素酶活性检测pSilencerTM4.1-let-7a1质粒对其靶序列的作用。MTT法检测pSilencerTM4.1-let-7a1转染A549细胞后,对细胞增殖的影响。结果:pSilencerTM4.1-let-7a1真核表达栽体和let-7a1靶序列-报道基因融合质粒经酶切及测序鉴定正确。pSilen-cerTM4.1-let-7a1转染A549细胞后,经RT-PCR证明能有效表达miRNAlet-7a1。pSilencerTM4.1-let-7a1质粒和pMIR-report-let-7a1T质粒共转染A549细胞后,通过报告基因检测,相对荧光素酶活性明显降低,表明pSilencerTM4.1-let-7a1转染A549细胞后,可表达let-7a1并具有生物学活性。MTT检测结果显示:pSilencerTM4.1-let-7a1转染后的A549活细胞数目明显减少。结论:成功构建了真核表达载体pSilencerTM4.1-let-7a1,转染肺腺癌A549细胞后能有效表达,miRNAlet-7a1基因过表达抑制A549细胞的增殖。
- 张菊关恒云张鹏举陈蔚文刘闻闻赵健胡晓燕姜安丽
- 关键词：MIRNA真核表达载体A549细胞细胞增殖
- 人同源盒基因NKX3·1对前列腺癌细胞的诱导凋亡作用被引量：7
- 2006年
- 构建人同源盒基因NKX3·1cDNA真核表达载体,研究其在前列腺癌细胞PC-3、LNCaP中的表达及对细胞的促凋亡作用.以人前列腺癌细胞LNCaP细胞中的总RNA为模板,RT-PCR扩增NKX3·1基因全长编码片段,将NKX3·1cDNA重组到真核表达载体pcDNA3·1(+)中;将pcDNA3·1-NKX3·1表达载体瞬时转染前列腺癌细胞PC-3和LNCaP细胞,用RT-PCR和Western印迹检测NKX3·1cDNA在转录水平和蛋白水平的表达;绘制细胞生长曲线,观察NKX3·1对前列腺癌细胞增殖的抑制作用;用DNA/ladder和流式细胞术检测NKX3·1对前列腺癌细胞凋亡的影响,进一步用RT-PCR检测凋亡相关基因caspase3、caspase8、caspase9、Apaf1、survivin和Bcl2表达的变化.人同源盒基因NKX3·1cDNA真核表达载体pcDNA3·1-NKX3·1经酶切及测序鉴定正确.pcDNA3·1-NKX3·1转染PC-3和LNCaP细胞后,经RT-PCR和Western印迹证明能有效表达NKX3·1.生长曲线显示,前列腺癌细胞转染NKX3·1cDNA后细胞增殖受到抑制;前列腺癌细胞转染NKX3·1cDNA48h后,DNA电泳呈现具有凋亡特征的DNAladder;流式细胞术检测出现明显凋亡峰;RT-PCR检测凋亡相关基因.结果显示,caspase3、caspase8、caspase9基因表达明显增加,Bcl2基因表达明显减少.本研究成功构建了真核表达载体pcDNA3·1-NKX3·1,转染PC-3和LNCaP细胞后能有效表达,并对细胞具有诱导凋亡作用.
- 刘闻闻于春晓崔福爱张鹏举陈蔚文胡晓燕姜安丽张建业
- 关键词：真核表达载体前列腺癌细胞细胞凋亡
- 人NKX3.1基因启动子的克隆及在不同肿瘤细胞系中启动子活性的测定(英文)
- 2006年
- 目的:克隆NKX3.1基因启动子并检测其启动子活性,为研究NKX3.1基因转录调控的基本机制奠定基础。方法:采用PCR方法从人基因组中扩增NKX3.1基因上游1.04 kb启动子片段并分别克隆到报道基因载体pGL3-basic和pEGFP-1中,通过转染细胞、荧光素酶活性测定及荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,检测其启动子活性。结果:DNA测序结果证实克隆的1.04 kb启动子片段序列正确;pGL3-1.04 kb启动子转染LNCaP细胞后,双荧光素酶活性测定M1/M2=2.7,为pGL3-control活性的1.5倍,为pGL3-basic活性的50倍。表明克隆的人NKX3.1基因上游1.04 kb片段具有较强的启动子活性。为检测此1.04 kb启动子在不同组织细胞中的活性,分别将pGL3-1.04 kb启动子和pEGFP-1.04 kb启动子转染入不同的肿瘤细胞系,检测荧光素酶和绿色荧光蛋白的表达。结果显示1.04 kb启动子在前列腺癌细胞LNCaP中活性最高。采用TRANSFAC数据库分析,发现在1 040 bp片段内含有多种顺式作用元件,它们的功能性将需要进一步实验证明。结论:克隆的人NKX3.1基因上游1.04 kb片段具有较强的启动子活性,并且在前列腺癌细胞LNCaP中活性最高。
- 姜安丽张鹏举胡晓燕陈蔚文贺美兰孔峰张建业
- 关键词：启动子细胞系
- 人β-catenin启动子的克隆及活性分析被引量：1
- 2009年
- 目的克隆β-catenin基因5′上游1.8 kb启动子,构建启动子-荧光素酶报告基因载体pGL3-1.8 kb,测定其启动子活性,为进一步研究β-catenin基因表达调控机制奠定基础。方法采用PCR方法从人基因组DNA中扩增β-catenin基因5′上游1.8 kb片段并构建到荧光素酶报道基因pGL3-basic载体中,与内参照质粒pRL-Tk共转染前列腺癌PC3细胞,通过双荧光素酶活性检验测定其启动子活性。结果PCR扩增的1.8 kb片段经测序正确无误;pGL3-1.8 kb转染PC3细胞48 h后,双荧光素酶活性测定启动子活性(M1/M2)为11.71,是pGL3-control活性的2.43倍,为pGL3-basic活性的206.31倍,为pGL3-promoter活性的21.38倍。结论克隆的β-catenin基因5′上游1.8 kb片段具有较强的启动子活性。
- 张菊关恒云张鹏举陈蔚文刘帅尚进唐传刚姜安丽
- 关键词：Β-CATENIN克隆启动子PC3细胞
- 人同源盒基因NKX3.1cDNA真核表达载体的构建及表达被引量：1
- 2006年
- 目的:构建人同源盒基因NKX3.1 cDNA真核表达载体,研究其在前列腺癌细胞PC-3、LNCaP中的表达情况。方法:以人前列腺癌细胞LNCaP细胞中的总RNA为模板,RT-PCR扩增NKX3.1基因全长编码片段,T/A克隆至pCR2.1载体中。经酶切、测序鉴定后,将NKX3.1cDNA重组到真核表达载体pcDNA3.1(+)中。将pcDNA3.1-NKX3.1表达载体瞬时转染前列腺癌细胞PC-3和LNCaP细胞,RT-PCR和Western blot法检测NKX3.1cDNA在转录水平和蛋白水平的表达。结果:人同源盒基因NKX3.1 cDNA真核表达载体pcD-NA3.1-NKX3.1经酶切及测序鉴定正确。pcDNA3.1-NKX3.1转染PC-3和LNCaP细胞后,经RT-PCR和West-ern blot证明在mRNA和蛋白水平均能有效表达NKX3.1。结论:成功构建了真核表达载体pcDNA3.1-NKX3.1,转染前列腺癌细胞PC-3和LNCaP后能有效表达。
- 刘闻闻于春晓崔福爱张鹏举胡晓燕陈蔚文张建业姜安丽
- 关键词：真核表达载体基因表达转染
- 胸腔积液患者血清和胸液CYFRA21-1检测的意义
- 2003年
- 赵健王善政马道新陈蔚文
- 关键词：胸腔积液胸液细胞学诊断恶性胸腔积液
- miR Let-7a1/f1下调前列腺癌1LNCaP细胞中AMD1蛋白的表达被引量：1
- 2012年
- 目的研究let-7a1/f1在前列腺癌LNCaP细胞中对S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(AMD1)表达的影响及作用机制。方法以LNCaP细胞总RNA为模板,RT-PCR扩增let-7a1/f1基因的前体序列,将其克隆到pSilencerTM4.1-CMV neo载体中,构建成let-7a1/f1真核表达载体pSilencer-let7a1/f1。瞬时转染LNCaP细胞后,通过RT-PCR法,检测let-7a1/f1在转录水平的表达,同时通过RT-PCR及Western blot检测AMD1在转录和翻译水平的表达变化。构建AMD1基因3'非翻译区(3'-UTR)荧光素酶报告基因融合质粒(pMIR-AMD1),并与pSilencer-let7a1/f1共转染LNCaP细胞,通过双荧光素酶活性检测,确定let-7a1/f1对AMD1 3'-UTR的作用。结果 pSilencer-let7a1/f1和pMIR-AMD1经酶切电泳及测序鉴定正确,pSilencer-let7a1/f1转染LNCaP细胞后,let-7a1/f1表达明显上升,AMD1在转录水平无变化,在翻译水平明显下降,let-7a1/f1转染后,pMIR-AMD1的荧光素酶活性明显降低。结论 miR Let-7a1/f1可作用于AMD1 3'-UTR靶点,抑制AMD1蛋白的翻译,从而降低LNCap细胞中AMD1蛋白的水平。
- 陈兆波刘春艳倪娜娜于洋张鹏举陈蔚文姜安丽
- 关键词：MIR前列腺肿瘤
