罗玉娇
- 作品数：5 被引量：21H指数：1
- 供职机构：中南大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金湖南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 刺毛虫毒刺cDNA文库的构建及初步分析被引量：1
- 2011年
- 目的构建刺毛虫毒刺的cDNA文库,克隆其毒素编码的基因。方法提取刺毛虫毒刺中的总RNA;使用clontech公司的cDNA文库构建试剂盒进行反转录,长距离PCR方法合成第二条链,酶切纯化后与载体连接,电转化入感受态细胞XL1-Blue,通过抗性筛选后进行菌落PCR鉴定,挑选插入子在300bp以上的单克隆送至测序公司测序。结果成功构建了刺毛虫毒刺cDNA文库,初步鉴定其插入子长度为250～1 000bp。结论刺毛虫毒刺cDNA文库构建成功,并获得大量的编码刺毛虫毒素的全长基因,为研究其致病机制奠定了基础。
- 李滨欧阳碧函徐宏博罗玉娇蒋立平舒衡平
- 关键词：毒素CDNA文库
- 虎纹捕鸟蛛Kunitz型毒素基因的分子改造和表达
- 2016年
- 目的构建HW11c40突变体,寻找合适的表达系统表达HW11c40突变体和HWTX-XI(虎纹捕鸟蛛毒素-XI),解决HWTX-XI来源问题和HW11c40改造后毒素难于获取的难题,为合适HW11c40突变体的筛选和治疗急性胰腺炎高效新药的研制奠定基础。方法用PCR定点突变的方法突变HW11c40相关氨基酸残基,构建HW11c40突变体。HW11c40突变体和HWTX-XI基因经PCR扩增后插入到pET-40b(+)载体,基因5'端插入肠激酶切割位点,再重组到大肠埃希菌BL21(DE3)进行原核周质表达,获得相应的融合蛋白并进行SDS-PAGE鉴定,用镍柱纯化融合蛋白。融合蛋白用肠激酶酶切,释放出的目的蛋白用Tricine-SDS-PAGE进行鉴定,用镍柱分离目的蛋白,进行高效液相色谱进行进一步分离纯化后作质谱鉴定。对HW11c40突变体和HWTX-XI的表达时间、温度和IPTG浓度进行优化。结果成功获得HW11c40的4个突变体,并正确构建HW11c40突变体和HWTX-XI的原核表达载体。经SDS-PAGE和Tricine-SDS-PAGE鉴定,重组质粒转化菌在无IPTG诱导的情况下成功表达所有HW11c40突变体和HWTX-XI的融合蛋白,经肠激酶酶切均获得对应的目的蛋白,其中HWTX-XI表达量为3.4mg/L。结论成功构建出HW11c40突变体和HWTX-XI的重组质粒并在原核细胞内高效表达出相应的目的蛋白,开辟了基因工程表达HWTX-XI的新途径,同时解决了HW11c40改造后毒素获取难题,突破了整个系列研究的瓶颈,为突变体的筛选及治疗急性胰腺炎高效新药的研制奠定了基础。
- 罗玉娇舒衡平李滨蒋立平
- 关键词：KUNITZ
- 虎纹捕鸟蛛Kunitz型毒素基因的分子改造和表达
- 研究背景
虎纹捕鸟蛛是我国特有的大型有毒蜘蛛。HWTX-XI/(虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅺ/)是从虎纹捕鸟蛛粗毒中提取的一种Kunitz型多肽毒素,具有很强的胰蛋白酶抑制作用,研究表明可用于治疗急性胰腺炎,但它同时具有阻...
- 罗玉娇
- 关键词：真核表达
- 文献传递
- 血浆FⅩⅢ-A在以NSCLC为主恶性实体瘤疗效及预后评估中的作用
- 目的:长期以来,凝血因子ⅩⅢ亚单位A(coagulation factor ⅩⅢ subunit A,FⅩⅢ-A)被误认为只是一种单纯的凝血因子功能亚单位,事实上FⅩⅢ-A本质是一种谷氨酰胺转胺酶(transglutam...
- 罗玉娇
- 关键词：恶性实体瘤非小细胞肺癌肿瘤相关巨噬细胞
- Kunitz型胰蛋白酶抑制剂的研究进展被引量：19
- 2012年
- Kunitz型胰蛋白酶抑制剂属于典型丝氨酸蛋白酶抑制剂,其生理功能至少包括了保护储存蛋白、调节内源蛋白酶的活性、保护个体免受昆虫和病原体的侵害、抑制癌细胞侵袭扩散、抗炎、抗真菌等作用。并已经应用到了抗虫性转基因植物和临床疾病治疗中。
- 罗玉娇李滨舒衡平蒋立平
- 关键词：KUNITZ胰蛋白酶抑制剂胰蛋白酶
