顾志良
- 作品数：124 被引量：523H指数：12
- 供职机构：常熟理工学院生物与食品工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金江苏省高校自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>
- 利用CRISPR/Cas9系统介导鸡LMH细胞中VNN1基因的敲除
- 引言Vanin-1 是一种泛酰巯基乙胺的水解酶,它能催化泛酰巯基乙胺水解产生泛酸和巯基乙胺,其广泛存在于动物的肝、肾等组织。最近研究表明,VNN1 的表达调控与肝脏脂类代谢相关转录因子(如PPARs,HNF4α等)和参与...
- 王中亮郁建锋李俊苏媛媛徐璐顾志良
- 关键词：脂肪代谢
- 鸭脂联素基因单核苷酸多态性检测及群体遗传分析被引量：18
- 2007年
- 以昆山麻鸭、樱桃谷鸭、高邮鸭、荆江麻鸭、金定鸭,山麻鸭、龙白鸭和白羽番鸭8个鸭品种为实验材料,根据鸭脂联素基因开放阅读框序列设计5对引物,用PCR-SSCP方法进行单核苷酸多态性分析,并对不同品种群体进行群体遗传学分析。结果发现引物4扩增片段上共存有7个单碱基突变,第430、457、523处的G-A、A-G、T-C单碱基突变导致第144、153、175个氨基酸分别由丙氨酸(A)变为苏氨酸(T)、异亮氨酸(I)变为缬氨酸(V)、酪氨酸(Y)变为组氨酸(H);而C507T,T540C,C576T和C597T4个单碱基突变为沉默突变。鸭群中表现出AA、AB、AC、BB、BC、CC、DD、DE8种基因型。8种基因型在8个鸭品种间分布存在极显著的差异(P<0.01)。除金定鸭外,其他品种均处于Hardy-Weinberg平衡状态。群体遗传分析表明金定鸭的纯合度最高,高邮鸭最低,其他各群体的纯合度较相近;金定鸭为低度多态,高邮鸭为高度多态,其他品种为中度多态。表明鸭脂联素基因不同品种中具有丰富的单核苷酸多态性,可以进一步作为候选基因来分析其与脂肪性状的相关性。
- 董飚龚道清孟和郁建锋赵旭庭段修军顾志良
- 关键词：脂联素基因单核苷酸多态性脂肪性状
- 松江鲈MyoG基因cDNA的克隆与序列分析被引量：4
- 2013年
- 动物的肌肉生长是一个复杂的过程,受到包括MRFs家族在内的多种细胞内转录因子及其他体内外因素的调控。MyoG是MRFs家族成员中的一员,也属于碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)蛋白超家族,在控制肌细胞生成过程中起重要的调节作用。运用RT-PCR、5'-RACE、3'-RACE等方法扩增得到松江鲈MyoG基因cDNA全长序列,测序后发现松江鲈MyoG基因cDNA全长1 669 bp,包含了750个核苷酸的开放性阅读框,翻译编码249个氨基酸。MyoG具有保守的碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)结构域,位于1～153位氨基酸上。用生物信息学方法分析与其他物种的系统进化关系,表明松江鲈MyoG与梭鲈亲缘关系最近。不同组织中MyoG基因的半定量PCR分析表明,MyoG基因在成年松江鲈中仅在肌肉中表达,表明它在成年松江鲈肌肉中发挥着重要作用。
- 杨磊李风鸣蔡宝平邵芳卢祥云韩曜平徐建荣顾志良
- 关键词：松江鲈
- 太湖猪(二花脸)GH、MyoG和H-FABP基因遗传多态性分析被引量：1
- 2012年
- 采用PCR-RFLP方法分析了太湖猪(二花脸)群体中生长激素(growth hormone,GH)、心脏脂肪酸结合蛋白(heart fatty acid-binding protein,H-FABP)和肌细胞生成素(Myogenin,MyoG)基因的多态性.结果表明:在检测的二花脸群体中,GH基因经DraⅠ、MspⅠ酶切无多态性,ApaⅠ酶切出现2个等位基因、3种基因型,基因型频率呈AA>AB>BB的趋势,等位基因A的基因频率大于等位基因B.MyoG基因在PCR1/MspⅠ位点上,基因型AB占据一定的优势;在PCR2/MspⅠ位点上,等位基因A占据绝对的优势,基因型频率趋势为AA>AB>BB.H-FABP基因的HinfⅠ位点上,等位基因h的基因频率有一定的优势.经χ2适合性检验表明,GH、MyoG、H-FABP3个基因在太湖猪(二花脸)群体中的分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05).
- 邵芳鲍学凯冯宇金星方丁涵高顾志良
- 关键词：太湖猪GHMYOD
- 鸡瘦蛋白受体(OBR)基因外显子9单核苷酸多态性分析被引量：44
- 2002年
- 瘦蛋白受体属于Ⅰ类细胞因子超家族受体 ,其在瘦蛋白的信号转导中起着关键的作用。本研究根据瘦蛋白受体基因外显子 9的序列设计引物 ,用PCR -SSCP的方法对高脂系 (fatnessline,FL)、低脂系 (leannessline ,LL)、北京油鸡、白耳鸡、石歧杂、矮小黄鸡、小型黄鸡、惠阳胡须鸡、隐性白羽鸡和海兰蛋鸡等品种 (系 )进行了单核苷酸多态性分析 ,并检测到了多态性。对两种纯合子片段克隆和测序 ,结果表明在编码区的 116 7位碱基发生了突变 ,由C突变为A ,但是编码的氨基酸并没有发生改变。经独立性检验 ,基因型频率和基因频率分布与品种有关 ,北京油鸡的AA基因型频率显著高于其他品种 ;高脂系中A基因频率显著高于低脂系。
- 顾志良赵建国李辉孟和王启贵王清华朱大海
- 关键词：外显子单核苷酸多态性OBR基因
- 鸭H-FABP基因的克隆及其组织表达被引量：6
- 2009年
- 运用RT-PCR技术扩增鸭H-FABP基因序列,并用半定量RT-PCR方法研究该基因的组织特异表达规律。从35周龄母鸭心脏组织中首次克隆了H-FABP基因的cDNA序列,长度为606 bp,包含1个402 bp的完整编码序列,编码133个氨基酸。该序列与鸡H-FABP基因序列有约90.5%的同源性,而相应氨基酸序列的同源性为88.0%;与人、小鼠、牛、猪和山羊等哺乳动物的H-FABP基因序列的同源性在71.9%和76.6%之间,而相应氨基酸序列的同源性在72.9%和76.7%之间。半定量RT-PCR结果表明,该基因在心脏组织中的表达量最高,在骨骼肌、脂肪、小肠、腺胃、肌胃、肺、间脑和肾组织中均有中度或微量表达,而在肝、脾和卵巢中不表达。表明H-FABP基因在动物进化中具有高度保守性,具有相似的生物学功能,该基因的表达具有组织特异性。
- 赵旭庭董飚张红储冬生徐国庆段修军张军龚道清顾志良
- 关键词：H-FABP基因克隆基因表达
- 赤眼鳟线粒体NADH脱氢酶6基因克隆及序列特征分析被引量：3
- 2010年
- [目的]根据赤眼鳟线粒体NADH脱氢酶6(ND6)基因序列分析不同种鱼类的分子进化关系。[方法]根据其他鱼类的线粒体ND6基因及侧翼序列设计引物,采用PCR扩增并克隆、测序赤眼鳟ND6基因,通过MEGA4.0 Neighbor-Joining法分析不同鱼类的进化关系。[结果]赤眼鳟(Squaliobarbus curriculus)线粒体基因组ND6基因序列长度为522 bp,编码173个氨基酸。该基因碱基组成为:A41.5%、C32.7%、G12.4%、T13.4%,其中A+T含量(54.9%)高于G+C含量(45.1%)。将赤眼鳟ND6基因序列与GenBank中其他11种鱼类ND6基因序列进行比对发现,赤眼鳟ND6核酸序列与团头鲂的同源性最高,为90.8%;与红点鲑鱼的同源性最低,为73.0%。赤眼鳟ND6氨基酸序列与其他物种ND6氨基酸进行比对发现,赤眼鳟与团头鲂同源性最高,为98.3%;与大黄鱼的同源性最低,为75.7%。以ND6氨基酸序列采用NJ法构建12种鱼类的系统发生树基本反映了它们的种间、属间和科间的关系。[结论]首次得到了赤眼鳟线粒体ND6基因序列,并确定了赤眼鳟与其他11种鱼类的分子进化关系。
- 沈莹左成学吴敏王星果张营徐建荣顾志良
- 关键词：DNA序列系统进化
- 解偶联蛋白基因(UCP)作为影响鸡脂肪性状候选基因的研究被引量：49
- 2002年
- 解偶联蛋白基因是新近发现的能够增加能量的消耗 ,与脂肪代谢和能量调控有密切关系的一个基因 ,可以将其作为研究肉鸡体脂代谢的候选基因。以肉鸡和 3个地方品种 (北京油鸡 ,石岐杂 ,白耳鸡 )以及海兰褐蛋鸡为实验材料 ,用 2对引物对解偶联蛋白基因 (UCP)的 3′非翻译区进行SNPs检测 ,探讨UCP基因作为影响鸡脂肪性状候选基因的可能性。利用单链构像多态 (SSCP)的方法进行SNPs的检测和基因型的判别。 χ2 检验表明 ,2对引物的突变产生的基因型和基因频率在各品种间差异极显著 (P <0 0 1) ,但在肉鸡与北京油鸡之间、白耳鸡与海兰褐蛋鸡之间的差异不显著 ,初步推断是因为北京油鸡属于肉用性状较突出的地方品种 ,推断它与现代肉鸡的遗传基础类似 ,而白耳鸡是偏向于蛋用的地方品种 ,和蛋鸡的遗传基础类似。引物 2的 1197处突变产生的 3种基因型与肉鸡屠体性状的最小二乘分析结果显示 :BB基因型个体的腹脂重和腹脂率显著低于AB、AA基因型的个体。
- 赵建国李辉孟和顾志良王启贵王宇祥
- 关键词：脂肪性状候选基因
- 鸭脂联素基因全长cDNA的克隆和原核表达的研究被引量：9
- 2010年
- 本研究旨在通过克隆鸭脂联素(Adiponectin)基因序列并进行序列分析,揭示该基因的序列特征、组织特异性表达规律,并对其进行原核表达。采用RT-PCR、5′-RACE和3′-RACE的方法从鸭脂肪组织总RNA中扩增脂联素基因cDNA片段;半定量RT-PCR检测组织表达特异性;构建原核表达载体,建立原核表达体系。从鸭脂肪组织中得到3个脂联素基因cDNA片段,克隆测序后,拼接获得了鸭脂联素基因1374bp全长cDNA序列,其包含一个长度为738bp完整的开放阅读框,编码245个氨基酸;编码区与鹅、鸡脂联素基因序列的同源性分别为94.9%和86.0%,与人、小鼠、狗等物种脂联素基因的同源性在64.2%～67.0%之间;氨基酸序列比较可知,鸭与鹅、鸡的脂联素氨基酸的同源性分别达95.5%和84.0%,与人、小鼠、狗等哺乳动物的同源性在65%左右。半定量RT-PCR研究结果表明脂联素基因在所测组织中均表达,且高度表达于脂肪组织、肌胃、小肠、心和骨骼肌,中度表达于肺、腺胃、卵巢和脾组织中,而在肝、肾和间脑中低度表达。构建得到在其C端含有8个组氨酸的鸭脂联素融合蛋白表达载体pET41a-duck-adp,重组表达质粒转入BL21(DE3)大肠杆菌中表达,经IPTG诱导后并SDS-PAGE检测获得了30ku的鸭脂联素原核表达蛋白。脂联素基因在动物进化中具有一定的保守性,该基因在不同组织中表达水平不同,通过原核表达可获得鸭脂联素的重组蛋白。
- 薛茂云董飚张营郁建锋孟和龚道清顾志良
- 关键词：脂联素基因RACE原核表达
- 工程教育认证背景下的课程思政教育的探索实践--以“分子生物学与基因工程”为例被引量：7
- 2021年
- 课程思政的目标是在课程教学中实现知识传授、能力培养与价值引领的有机统一。以分子生物和基因工程课程为例,探讨在工程教育认证背景下开展课程思政教学的必要性,从制定课程思政教学目标、增强教师思政育人意识、深挖课程思政元素等方面开展课程思政教育的探索实践。同时,激发学生的科学精神、文化自信、家国情怀和使命担当,做到知识传授与价值引领、课程思政与专业认证、育人与育才的有机统一,实现铸魂育人的目标。
- 顾志良徐璐郁建锋孙海燕冀宏
- 关键词：工程教育认证分子生物学与基因工程
