张廷虹
- 作品数：8 被引量：10H指数：2
- 供职机构：中国科学院微生物研究所更多>>
- 发文基金：中国科学院战略重点研究项目中国科学院院长基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 抗A型流感病毒聚合酶碱性蛋白1多克隆抗体的制备和鉴定被引量：2
- 2016年
- 流感病毒属于正黏病毒科,为有包膜包裹的单股负链RNA病毒。它的8个基因片段编码至少16种病毒蛋白,其中3个蛋白组成流感病毒的聚合酶复合体。流感病毒聚合酶碱性蛋白1(PB1)是该复合体的组分之一,在病毒的转录、复制及重配中发挥重要的作用。为研究其功能,构建His-PB1(aa 550–755)融合蛋白原核表达质粒,IPTG诱导融合蛋白表达,通过镍柱亲和将其纯化,然后作为抗原免疫家兔。对抗血清进行间接ELISA检测,表明抗体效价可达1∶100 000。兔源PB1蛋白抗血清经亲和纯化后,用于免疫印迹检测流感病毒WSN毒株PB1蛋白以及外源转染的FLAG-PB1蛋白,结果表明该PB1抗体具有良好的特异性,同时也能特异性识别其他亚型的A型流感病毒的PB1蛋白,为进一步研究流感病毒PB1蛋白的功能奠定了基础。
- 秦玉洁张廷虹叶昕
- 关键词：流感病毒多克隆抗体
- 猪Mx1基因的克隆及在293T细胞中的表达
- 为研究猪MX1的生物学功能,采用RT-PCR的方法从猪瘟弱毒疫苗和Poly:IC刺激7 h的PK15细胞cDNA中扩增出编码MxA蛋白的全长基因,构建真核表达载体pRetroQ-sMx1,再转染至HEK293T细胞后,4...
- 赵协张廷虹常维山
- 关键词：真核表达转染
- 文献传递
- 猪Mx1基因的克隆表达及抗病毒活性研究被引量：2
- 2014年
- 本文应用(RT-PCR)技术,从猪瘟弱毒疫苗和Poly:IC共刺激7 h的PK15细胞的cDNA中扩增出编码Mx1蛋白的全长基因,并通过引物设计填补了PK(15)细胞系Mx1 cDNA序列中3'端11bp的缺失,成功获得Mx1完整基因的克隆。构建了重组表达质粒pRetroQ-sMx1,转染HEK293T细胞并表达Mx1蛋白,利用微量细胞病变抑制法测定其抗病毒活性。双酶切鉴定和核酸序列测定证实pRetroQ-sMx1真核表达质粒构建成功,转染HEK 293T细胞后,能够检测到绿色荧光,Western blot证实为目的蛋白。微量细胞病变抑制法测定重组蛋白具有一定的抗水疱性口炎病毒及猪繁殖与呼吸综合征病毒的活性。重组Mx1具有一定抗病毒生物功能,为进一步研究重组Mx1蛋白的活性以及Mx1抗病毒药物奠定了基础。
- 刘玉洁赵协张廷虹曹广明扬志昆
- 关键词：克隆真核表达抗病毒活性
- 猪IP-10蛋白真核表达载体的构建
- 2010年
- 根据GenBank上发表的猪IP-10蛋白的核苷酸序列设计并合成1对特异性引物,采用RT-PCR方法扩增出目的片段,将扩增产物连接到表达载体pcDNA3.1上,进行序列测定和分析。结果表明,所克隆的目的基因的核苷酸长为312bp,共编码104个氨基酸。该基因片段与已发表的猪IP-10蛋白基因核苷酸序列同源性为100%,氨基酸同源性为100%。本试验为重组猪IP-10蛋白的生产及功能研究奠定了基础。
- 赵协张廷虹常维山
- 关键词：重组质粒
- 猪干扰素诱导蛋白BST-2克隆、表达及生物学活性检测
- 病毒感染宿主后，依赖于宿主细胞蛋白的辅助因子，才能完成其感染和复制周期;同时宿主细胞迫于病毒感染的压力，必须进化出各种抵御病毒的方式，病毒和宿主这种相互作用关系，使双方在选择压力下都得到进化。宿主细胞限制因子是先天免疫系...
- 张廷虹
- 关键词：真核表达反转录-聚合酶链式反应生物学活性
- 文献传递
- 含有A型流感特异性启动子的重组293T细胞及其应用
- 本发明公开了一种含有A型流感特异性启动子的重组293T细胞及其应用。本发明所提供的重组细胞为向293T细胞中转入重组质粒后得到的重组细胞；所述重组质粒含有融合基因；所述融合基因，是由片段1、报告基因和片段2顺次连接构成的...
- 叶昕秦玉洁童晓梅胡毅张廷虹叶榛
- 文献传递
- 猪骨髓基质抗原2基因的克隆、表达及生物学活性研究
- 2012年
- 研究目的是克隆猪骨髓基质抗原2(Bone marrow stromal antigen-2,BST-2)基因并进行真核表达,获得具有抗病毒活性的重组BST-2蛋白。研究通过RT-PCR从猪瘟弱毒疫苗和聚肌胞(Poly I:C)刺激的猪肾细胞(PK-15)中扩增出猪BST-2cDNA,克隆至真核表达载体pcDNA3.1/V5-His,构建重组表达质粒pcDNA-BST-2,转染HEK293T细胞,纯化BST-2蛋白并经Bradford法定量,Western blot检测,研究BST-2抗病毒生物学活性。酶切鉴定和核酸序列测定证实pcDNA-BST-2真核表达质粒构建成功,转染HEK293T细胞后,经间接免疫荧光能够检测到绿色荧光。生物学活性测定重组BST-2蛋白具有一定的抗水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)、H9禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)及猪繁殖与呼吸综合症病毒(Porcine reproductive and respiratory syn-drome virus,PRRSV)的活性。结果表明,重组BST-2具有一定抗病毒生物功能,为进一步研究重组BST-2蛋白的活性以及BST-2抗病毒药物研究奠定了基础。
- 张廷虹赵协曹广明张振杰常维山
- 关键词：真核表达抗病毒活性
- 埃博拉病毒入侵:人TIM分子的结构与结合PS的分子基础被引量：6
- 2015年
- 研究表明,人T细胞免疫球蛋白黏蛋白(human T-cell immunoglobulin and mucin domain,h TIM)受体分子能够促进包括埃博拉病毒在内的很多囊膜病毒的入侵.h TIM介导的病毒入侵过程高度依赖于位于受体分子胞外区远膜端的免疫球蛋白V区(immunoglobulin variable(Ig V)-like)结构域与病毒囊膜中磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine,PS)的特异性相互作用.人类TIM家族共有3个成员:h TIM-1,h TIM-3和h TIM-4.虽然相应的小鼠TIM分子的结构已经解析,但h TIM分子的Ig V结构特征及其识别PS的分子基础仍然未知.同时,有研究表明,引起西非大规模埃博拉疫情爆发的2014-扎依尔-埃博拉病毒可能较其先前流行株具有更强的致病能力.但目前尚未有2014-扎依尔-埃博拉病毒利用h TIM分子入侵细胞及其与1976-扎依尔-埃博拉病毒的入侵能力比较的研究报道.本研究证明了整合有1976-和2014-扎依尔-埃博拉病毒囊膜糖蛋白(glycoprotein,GP)的假病毒均可以利用h TIM-1和h TIM-4入侵细胞,并且表现出相近的入侵效率.进一步证明了h TIM分子不与埃博拉病毒GP蛋白直接相互作用,而是通过结合病毒囊膜中的PS分子而促进病毒感染.随后解析了3种h TIM分子Ig V结构域的高分辨率晶体结构以及h TIM-4与磷酸丝氨酸的复合物晶体结构.令人意外的是,3种h TIM分子的PS结合槽呈现出各自不同的局部结构特征且在目前已解析结构的小鼠同源分子中均未被观察到.这些结构特征很可能提示h TIM分子具有不同于小鼠同源分子、且彼此间亦各不相同的PS识别模式.上述结构和功能数据丰富了我们对h TIM结合PS的分子基础的认识,从而将帮助我们更深入地了解埃博拉和相关囊膜病毒利用h TIM受体入侵细胞的分子机制.
- 王寒齐建勋刘宁宁李燕高俊张廷虹柴彦高峰张浩李向东叶昕严景华逯光文高福
