吕自兰 作品数:13 被引量:30 H指数:4 供职机构: 重庆市肿瘤研究所 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 重庆市教委科研基金 重庆市自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
PRP基因绿色荧光蛋白载体构建及其生物学功能初步研究 被引量:1 2011年 目的:构建Prolifein related protein(PRP)基因荧光表达载体,并初步探讨其生物学功能。方法:提取小鼠睾丸RNA,RT-PCR扩增PRP基因编码区片段,酶切连入pEGFP-C1载体,构建含有PRP基因片段的绿色荧光表达载体PRP-pEGFP-C1。为了探讨PRP基因功能,PRP-pEGFP-C1经Lipofectamine 2000介导转染293FT细胞,MTT实验分析细胞增殖变化,流式细胞仪分析细胞周期分布。结果:质粒PRP-pEGFP-C1经测序验证,证实PRP基因已正确连入pEGFP-C1载体。免疫荧光染色显示PRP定位于293FT细胞胞浆。MTT结果表明,上调PRP基因引起293FT细胞增殖活性下降,细胞周期分布情况提示G1期细胞增加,S期细胞减少。结论:成功构建PRP-pEGFP-C1荧光表达载体,对其功能研究表明PRP具有抗人293FT细胞增殖,扰乱细胞增殖周期的功能。本研究为PRP在抗人肿瘤方面的研究提供基础。 王琦 郝杰 赵丽娜 吕自兰 王丽敏 余秋波 王应雄 黎刚关键词:RELATED PROTEIN C-myc通过调控BubR1影响食管鳞癌细胞对紫杉醇的敏感性 被引量:2 2013年 探讨C-Myc与有丝分裂期检查点蛋白BubR1的表达关系和对紫杉醇药物作用的可能影响。用免疫组化方法检测23例食管鳞癌组织标本中C-Myc和BubR1的表达水平,并通过免疫印迹的方法比较3株食管鳞癌细胞株ECA-109,KYSE150和KYSE180中C-Myc和BubR1的表达高低,分析相关性;将人BUB1b基因启动子上游约2000bp片段插入pSEAP2分泌型碱性磷酸酶报告质粒中构建为pSEAP2-BubR1-P2000,分别转染至3株鳞癌细胞内,检测启动子激活效果;在ECA-109细胞内过表达C-Myc后再转染pSEAP2-BubR1-P2000后,检测启动子的激活效果;免疫印迹方法检测C-Myc抑制剂10058-F4对BubR1蛋白表达的影响;通过MTT检测10058-F4干扰C-Myc后ECA-109细胞在梯度紫杉醇浓度下的生存率变化;最后通过DAPI染色观察单用C-Myc抑制剂,单用低浓度紫杉醇(100nM)或联用10058-F4和紫杉醇组的凋亡比例。结果发现在临床食管鳞癌标本和食管鳞癌细胞株中C-Myc和BubR1的表达有相关一致性;C-Myc高表达的细胞株中BubR1启动子活性的激活程度更强,并且过表达C-Myc后能进一步上调启动子活性;C-Myc特异性抑制剂10058-F4可以有效下调BubR1表达,并减低细胞在梯度紫杉醇作用下的细胞生存率。DAPI染色结果显示联用10058-F4和低浓度紫杉醇能明显增加细胞处于有丝分裂期的比率。在食管鳞癌细胞中C-Myc能上调有丝分裂期检查点蛋白BuR1的水平,并与食管癌对紫杉醇的敏感性相关,C-Myc可能通过上调BubR1表达而减低食管鳞癌对紫杉醇的反应。 胡敏 宋培培 湛晓琴 吕自兰 陈楚 施琼 翁亚光关键词:C-MYC 紫杉醇 骨形态发生蛋白9对食管鳞状细胞癌细胞的抑制作用 2013年 目的 探讨骨形态发生蛋白9(Bone morphogenetic proteins 9,BMP 9)对食管鳞状细胞癌细胞增殖、克隆、迁移、侵袭及细胞周期的影响。方法 用AdGFP和AdBMP 9分别感染3株食管鳞状细胞癌细胞株ECA109、KYSE150和KYSE180,并设不感染病毒的3种细胞作为对照,采用RT-PCR法检测AdBMP 9感染的3株细胞中BMP 9基因mRNA的转录水平,MTT法检测病毒感染细胞0~96h各组细胞的增殖活力,平板克隆法检测各组细胞的克隆形成能力,划痕试验检测各组细胞的迁移能力,Transwell小室试验检测各组细胞的侵袭能力,并对3组ECA109细胞进行细胞周期的检测。结果 AdBMP 9感染的3株细胞中BMP 9基因mRNA的转录水平均明显提高。与AdGFP感染和未感染病毒的细胞相比,3种细胞在过表达BMP 9后,增殖活力明显降低(P〈0.05);细胞克隆形成能力均下降(下降率达70%以上),且克隆细胞团明显变小;细胞迁移和侵袭能力均下降;AdBMP 9感染的ECA109细胞处于G1期的细胞比例明显上升,S期比例明显下降(P〈0.05)。结论 BMP 9可明显抑制食管鳞癌细胞的增殖、克隆、迁移和侵袭能力,并将细胞周期阻滞于G1期。 胡敏 宋培培 湛晓琴 吕自兰 章帆 翁亚光关键词:食管鳞状细胞癌 不同炎症指标对恶性肿瘤患者细菌性血流感染早期诊断的价值分析 被引量:8 2017年 目的探讨降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)、中性粒细胞百分比(NEUT%)在恶性肿瘤患者细菌性血流感染(BSI)早期诊断的应用价值。方法回顾性分析该院2015年1-12月413例在当日同时送检了PCT、CRP、血常规检测及血培养的肿瘤发热患者的临床资料。根据血培养结果分为观察组(211例)与对照组(202例)。将观察组分成革兰阴性菌(G-)组与革兰阳性菌(G+)组,采用受试者工作特征曲线(ROC)评估PCT、CRP、NEUT%对细菌性BSI的诊断效能。结果观察组中PCT的特异度最高,CRP的灵敏度最高;观察组的PCT、CRP、NEUT%水平均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。G-组的PCT水平明显高于G+组,差异有统计学意义(P<0.05),CRP和NEUT%水平差异无统计学意义(P>0.05)。观察组中PCT、CRP、NEUT%的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.848、0.796、0.718,G-和G+菌组PCT的AUC分别为0.877和0.767。结论恶性肿瘤患者细菌性BSI后,PCT、CRP和NEUT%均明显升高,PCT的诊断效能优于CRP和NEUT%,且对于区分G-和G+菌的感染类型具有一定价值,联合检测PCT、CRP、NEUT%有助于恶性肿瘤患者细菌性BSI的早期诊断。 张达容 罗光丽 吕自兰关键词:血流感染 降钙素原 C反应蛋白 恶性肿瘤 尿液对羟基苯丙氨酸检测在恶性肿瘤早期预测中的应用价值 被引量:4 2015年 目的探讨尿液对羟基苯丙氨酸检测在恶性肿瘤预测中的临床应用价值。方法采用比色法对重庆市肿瘤研究所395例尿液样本(其中90例健康者、92例良性肿瘤、213例病理确诊的恶性肿瘤)对羟基苯丙氨酸进行检测分析。结果健康对照组、良性肿瘤组、恶性肿瘤组的阳性检出率分别为8.89%、14.13%、68.54%;与健康对照组比较,良性肿瘤组的阳性率差异无统计学意义(P>0.05),恶性肿瘤组的阳性率明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与良性肿瘤组比较,恶性肿瘤组的阳性率明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);恶性肿瘤组中的消化道恶性肿瘤、鼻咽癌、淋巴瘤、乳腺癌、妇科恶性肿瘤、肺癌及其他恶性肿瘤的阳性检出率分别是78.82%、72.22%、71.42%、65.38%、62.50%、60.00%和72.22%,不同病种间的阳性率差异无统计学意义(P>0.05);尿液对羟基苯丙氨酸对恶性肿瘤的检测灵敏度68.54%,特异性88.46%,准确度77.72%,阳性预测值87.00%,阴性预测值71.00%。结论尿液对羟基苯丙氨酸作为一种新的肿瘤标志物,适用于恶性肿瘤的广谱筛查;对良、恶性肿瘤的鉴别诊断具有重要的临床意义。 黄学梅 吴立翔 吕自兰 李影 郭变琴关键词:恶性肿瘤 PRP基因RNAi重组慢病毒制备及PRP基因与睾丸间质细胞增殖和睾酮产生的关系 被引量:1 2011年 目的制备PRP RNAi重组慢病毒,并对PRP基因功能进行初步研究。方法采用miRNA方式抑制PRP基因表达,筛选最有效序列包装慢病毒,用于转染TM3睾丸间质细胞。转染实验分为TM3-negative对照组(阴性对照质粒组,转染pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-neg control质粒)以及A、B、C 3个干扰质粒组(分别转染pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-PRP-A,B,C质粒);RT-PCR与Western blot方法检测慢病毒对PRP基因表达影响,MTT方法检测细胞增殖情况,ELISA方法检测细胞睾酮产生情况。结果经测序鉴定,成功制备了PRP RNAi重组慢病毒;与阴性对照质粒组比较,转染pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-PRP-A,B组可有效下调TM3细胞PRP mRNA和蛋白表达(P<0.01,P<0.05)。MTT结果表明抑制PRP基因后,TM3细胞的增殖加快(P<0.01)。此外,相较于对照组,下调PRP基因抑制促黄体生成素(luteinizing hormone,LH)刺激产生睾酮的效应(P<0.05)。结论成功制备了PRP RNAi重组慢病毒,对其功能初步研究显示,PRP不仅与睾丸间质细胞增殖有关,而且参与睾酮产生。 赵丽娜 郝杰 胡建刚 吕自兰 王琦 王丽敏 余秋波 王应雄 黎刚关键词:慢病毒 睾酮 间质细胞 AgO2基因miRNA RNAi慢病毒表达载体与pEGFP-Cl-AgO2表达载体构建及其对血睾屏障相关基因表达的影响 目的:
我们在前期研究中通过sertoli细胞与生精细胞共培养发现Argonaute2基因可能与血睾屏障相关基因claudin-11表达有关。为了深入研究相关机制,本课题设计构建Ago2基因miRNA RNAi慢病... 吕自兰关键词:相关基因表达 MIRNA 表达载体构建 血睾屏障 PEGFP-C1 SERTOLI细胞 BMP9抑制骨肉瘤细胞生长和迁移的分子机制研究 目的: TGF-β促进肿瘤迁移和侵袭。BMPs属于TGF-β家族成员,表达于各种人类肿瘤细胞系中。BMP9是成骨作用最强的成员,我们课题组前期研究发现BMP9过表达可以抑制骨肉瘤细胞的生长和迁移能力,然而,其在骨肉瘤中... 吕自兰关键词:骨肉瘤 细胞生长 分子机制 产气荚膜梭菌血流感染致死1例 被引量:6 2016年 产气荚膜梭菌是一种革兰染色阳性厌氧芽孢杆菌,广泛分布于土壤、污水、食品、粪便等环境中,以及健康人和动物的胃肠道中,是一种条件致病菌。患者外伤后侵入伤口并迅速繁殖,产生大量毒素入血,菌血症患者可发生严重的血管内溶血而迅速死亡。肝硬化、胃肠道恶性疾病、免疫系统疾病、切口较深的重大外伤及糖尿病控制不佳等易发生产气荚膜梭菌感染。目前产气荚膜梭菌血流感染致死病例罕见,现报道产气荚膜梭菌血流感染致死1例。 吕自兰 付刚 罗光丽 李品宏 王红羚 张达容关键词:产气荚膜梭菌 血管内溶血 人参皂甙Rb1促进老年大鼠睾丸间质细胞睾酮产生和StAR蛋白表达 被引量:5 2011年 目的:探讨人参皂甙Rb1对老年大鼠间质细胞增殖及睾酮产生的影响,分析人参皂甙Rb1对睾酮提升作用的机制。方法:体外分离培养老年大鼠睾丸间质细胞,培养液中分别加入不同浓度Rb1,MTT法测定细胞增殖改变,ELISA法测定培养上清中睾酮水平,用RT-PCR分析间质细胞StAR基因和P450scc基因表达,western blotting方法检测间质细胞StAR和P450scc蛋白表达水平。结果:人参皂甙对间质细胞增殖没有明显影响,老年大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮水平明显低于青年大鼠,人参皂甙Rb1呈浓度依赖性上调老年大鼠睾丸间质细胞睾酮产生,上调StAR基因和蛋白表达水平,但对P450scc基因和蛋白表达基本没有影响。结论:衰老致睾丸间质细胞睾酮产生能力下降,人参皂甙单体Rb1可通过上调StAR蛋白表达,增强睾酮合成,达到延缓衰老的目的。 吕自兰 郝杰 赵丽娜 王琦 胡建刚 谢怡 黎刚关键词:睾酮 间质细胞 RB1