郭变琴
- 作品数：28 被引量：134H指数：6
- 供职机构：重庆市肿瘤医院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金国家自然科学基金重庆市科委基金更多>>
- 相关领域：医药卫生电子电信生物学更多>>
- SYBR实时荧光定量PCR检测人乳腺癌细胞AnnexinⅡmRNA方法的建立及应用
- 2014年
- 目的建立检测人AnnexinⅡmRNA水平的SYBR Green实时荧光定量PCR方法,并用其测定人乳腺癌细胞MDAMB-231和MCF-7中AnnexinⅡmRNA水平。方法根据人AnnexinⅡmRNA的保守序列设计特异性引物,提取人乳腺癌细胞总RNA,并逆转录为cDNA,胶回收纯化PCR产物,并与pGM-T载体连接构建质粒标准品,进一步通过SYBR Green实时荧光定量PCR检测人乳腺癌细胞中AnnexinⅡmRNA水平。结果该方法标准曲线的r2为0.997,融解曲线分析显示单个峰,pGM-T AnnexinⅡ质粒标准品高、低拷贝数的批内、批间变异系数分别为6.2%、7.8%(高拷贝)和9.1%、12.3%(低拷贝)。进一步研究表明人乳腺癌细胞MDA-MB-231中AnnexinⅡmRNA水平显著高于MCF-7细胞(P<0.01)。结论建立的检测人AnnexinⅡmRNA水平的SYBR Green实时荧光定量PCR方法特异性、重复性好,可用于人乳腺癌细胞中AnnexinⅡmRNA的定量检测。
- 郭变琴黄学梅吴立翔
- 重庆市某三甲医院生化检验流转时间分析被引量：2
- 2017年
- 目的分析重庆市某三甲医院生化检验流转时间(TAT),针对TAT延长的原因,拟定相应对策以缩短TAT,提升检验科服务能力。方法统计2013-2015年的生化检验TAT,通过分析门诊平诊、门诊急诊、住院平诊、住院急诊4类标本每年的工作量、平均TAT及不合格率,分析TAT延长的原因。结果2013-2015年度生化检测标本量分别为77 060、97 129和105 304份,逐年增长比为26.0%、8.4%。2013-2015年门诊平诊标本TAT分别为(78.55±48.47)、(69.18±37.20)、(62.82±21.62)min,逐年显著缩短(P<0.05)。门诊急诊标本TAT分别为(64.13±31.16)、(59.22±23.51)、(66.01±37.73)min。2013-2015年住院平诊标本TAT分别为(92.34±53.41)、(95.03±55.73)、(122.92±78.94)min,逐年显著延长(P<0.05);住院急诊标本TAT分别为(65.29±36.06)、(62.41±30.18)、(61.48±30.12)min,逐年显著缩短(P<0.05)。4类标本3年的总不合格率分别是0.04%、2.99%、0.63%、3.69%。结论标本量增加对TAT有影响,需要加强岗位责任管理,进一步优化工作流程,缩短生化检验TAT,持续提高为患者和临床服务的能力。
- 丁环宇王云龙吴立翔郭变琴黄庆黄学梅
- 关键词：生化检验
- 内源性β干扰素维持M1型巨噬细胞极化状态抑制肝癌细胞增殖和侵袭被引量：3
- 2016年
- 目的研究内源性β干扰素(IFN-β)对M1型巨噬细胞极化状态及M1型巨噬细胞介导抗肝癌细胞增殖和侵袭的影响。方法体外建立单核系肿瘤细胞U937来源的M1巨噬细胞U937-M1模型,用实时定量PCR、ELISA及流式细胞术鉴定其表型。通过干扰IFN-β1基因或用抗体中和IFN-β,检测M1/M2巨噬细胞表型标志物表达的变化;用实时定量PCR和Western blot法检测干扰素调节因子1(IRF1)及IRF5的表达。收集不同处理组的U937-M1细胞培养上清为条件培养基(CM),分别培养Hep G2细胞及SMMC-7721细胞,用CCK-8法和TranswellTM侵袭实验分别检测CM对肝癌细胞增殖和侵袭的影响。结果与未激活型U937-M0细胞相比,U937-M1细胞白细胞介素12p35(IL-12p35)、IL-12p40、IL-12p70、IL-23p19、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和CD86表达显著增强;而两组均低表达CD206。阻断內源IFN-β作用后,与U937-M1细胞相比,上述M1型巨噬细胞相关表型标志物表达明显减弱;反之,M2型巨噬细胞表型标志物IL-10和CD206表达增强;且IRF1及IRF5表达均减弱;阻断IFN-β作用后,M1型巨噬细胞对肝癌细胞增殖及侵袭的作用从抑制转变为促进。结论阻断內源IFN-β后,M1型巨噬细胞极化状态以及U937-M1介导抗肝癌效应受到抑制;IFN-β可能参与调节IRF1和IRF5的表达,维持M1型巨噬细胞极化状态和功能。
- 谢昌利郭变琴刘翠颖林艳吴碧涛王秦李紫微涂植光
- 关键词：增殖
- 血清人附睾蛋白4、糖类抗原153在监测术后乳腺癌复发转移的探讨被引量：10
- 2015年
- 目的探讨人附睾蛋白4（HE4）及糖类抗原153（CA153）在乳腺癌患者术后与术后多年复发转移的含量,以及HE4与CA153的相关性。方法对该院2013年5~12月的健康对照者30例（健康对照组）、乳腺癌术后无转移患者29例（患者无转移组）、乳腺癌术后复发转移患者29例（患者转移组）进行血清HE4和CA153检测,并分析HE4和CA153的相关性。结果与健康对照组和患者无转移组比较,HE4、CA153含量在患者转移组中明显升高,HE4、CA153阳性率也明显提高,差异均有统计学意义（P〈0.05）。与健康对照组比较,HE4含量和阳性率在患者无转移组明显提高,CA153含量也明显增加,差异均有统计学意义（P〈0.05）,但阳性率差异无统计学意义（P〉0.05）。HE4和CA153具有良好的相关性（r=0.607,P〈0.05）。结论 HE4和CA153在乳腺癌术后复发转移的监测中起着重要的临床意义。
- 郭变琴吴立翔
- 关键词：糖类抗原153乳腺癌术后
- 实时荧光定量PCR检测HULC lncRNA方法的建立及初步应用被引量：2
- 2013年
- 目的:建立实时荧光定量PCR检测长链非编码RNAHULC的方法,探讨其在作为肝癌标志的应用价值。方法:根据Genebank中的HULC lncRNA(AY914050.1)全序列,设计HULC基因的特异引物,构建HULC基因的T克隆载体,命名为pMD18-T-HULC;以pMD18-T-HULC为实时荧光定量PCR检测HULC的标准品,建立实时荧光定量PCR检测HULC的方法并进行方法学评价。应用此方法检测8种肿瘤细胞株、肝癌组织、其它癌及癌旁组织中HULC lncRNA的表达。结果:HULC实时荧光定量PCR检测方法学的最低检测限为1.8×103拷贝/L,线性范围为1.8×103拷贝/L至4.6×109拷贝/L;该法的批内变异系数(CV)<2.0%,批间CV<8.0%。其在肝癌组织和肝癌细胞株起始表达量为(7.6±3.1)×105拷贝/L至(5.6±3.2)×106拷贝/L,明显高于其它癌和癌旁组织HULC lncRNA表达量(<1.8×103拷贝/L)。新发现膀胱癌细胞株T24中表达量高〔(6.7±2.4)×105拷贝/L〕,但在膀胱癌组织中表达低(<1.8×103拷贝/L)。结论:成功建立了实时荧光定量PCR检测HULC lncRNA的方法,HULC lncRNA可望作为肝癌的标志。
- 汪先桃郭变琴梁勤东涂植光
- 关键词：实时荧光定量PCR肝癌
- Wnt2/β-catenin信号在乳腺癌中作用机制的探讨
- 目的: 1.研究Wnt2在人乳腺癌细胞株（MDA-MB-231、ZR-75-30和MCF-7）及患者血清中的表达情况，并探讨在乳腺癌患者血清中Wnt2与CA-153的相关性。 2.探讨Wnt2及β-catenin在乳...
- 郭变琴
- 关键词：乳腺癌淋巴结转移临床病理
- Wnt2在乳腺癌组织及患者血清中的表达及意义被引量：7
- 2013年
- 目的检测乳腺癌细胞株(MDA-MB-231、ZR-75-30、MCF-7)、乳腺癌患者组织中Wnt2的表达,同时检测乳腺癌患者血清中Wnt2及CA-153表达量,并对二者的相关性进行分析。方法采用实时荧光定量PCR及Western blot技术检测MDA-MB-231、ZR-75-30、MCF-7中Wnt2 mRNA及蛋白水平;采用免疫组织化学对5例配对的癌旁组织、9例乳腺原位癌及9例侵袭性乳腺癌进行检测;同时采用ELISA检测15例健康成年女性、30例乳腺癌患者血清中Wnt2蛋白水平;电化学发光技术检测CA-153水平,并收集完整的病理资料与血清中Wnt2蛋白水平比较分析。结果 Wnt2在乳腺癌细胞株MDA-MB-231、ZR-75-30、MCF-7中未见表达;在乳腺癌组织上皮及间质细胞中呈高表达,而在配对的癌旁组织呈不表达或弱表达状态;30例乳腺癌患者血清中Wnt2及CA-153平均表达量显著高于健康成年女性(P<0.05),且Wnt2表达水平与CA-153呈正相关。结论血清Wnt2可与CA-153同时作为乳腺癌筛查的血清学辅助指标,有助于提高乳腺癌检出的灵敏度。
- 郭变琴吴立翔汪先桃涂植光
- 关键词：CA-153乳腺癌实时荧光定量PCR蛋白印迹酶联免疫吸附试验
- AnnexinⅡ在4株人乳腺癌细胞中的表达及意义被引量：4
- 2008年
- 目的:研究人乳腺癌细胞中AnnexinⅡ基因的表达情况,阐明AnnexinⅡ基因与乳腺癌细胞侵袭力的关系.方法:采用SYBR实时荧光定量PCR,Western Blot技术分别检测MDA-MB-435S,MDA-MB-231,ZR-75-30和MCF-7共4株人乳腺癌细胞AnnexinⅡ mRNA和蛋白的表达情况;免疫细胞化学检测AnnexinⅡ蛋白在4株人乳腺癌细胞中的定位;Millicell小室测定4株人乳腺癌细胞体外侵袭能力.结果:MDA-MB-435S,MDA-MB-231,ZR-75-30和MCF-7的AnnexinⅡ mRNA表达量分别为0.67±0.21,0.38±0.03,0.05±0.03,(4.06±0.81)×10-5,任两组细胞间AnnexinⅡ mRNA的表达量差异均有统计学意义(P<0.05);MDA-MB-435S,MDA-MB-231,ZR-75-30和MCF-7的AnnexinⅡ蛋白表达量:WesternBlot结果分别为1.47±0.06,1.10±0.05,0.70±0.03,0.09±0.01;免疫细胞化学结果分别为3423±312,2767±147,2001±245,353±128;任两组细胞间AnnexinⅡ蛋白表达量差异均有统计学意义(P<0.05);MDA-MB-435S,MDA-MB-231,ZR-75-30和MCF-7的体外侵袭力分别为135.3±7.6,147.2±8.9,79.4±2.9,15.3±4.4,除MDA-MB-435S细胞与MDA-MB-231细胞无显著差异外,其余两组细胞侵袭力有显著性差异(P<0.05).结论:在所检测的4株人乳腺癌细胞中,AnnexinⅡ表达量与细胞体外侵袭力呈正相关.
- 郭变琴陈婷梅文阳安
- 关键词：免疫组织化学侵袭力
- 卵巢癌相关抗原CA125串联重复序列的原核表达纯化及抗血清制备被引量：1
- 2012年
- 目的:建立CA125串联重复序列(CA125R)原核表达系统,表达纯化重组CA125R蛋白并制备其抗血清。方法:全基因合成一段CA125串联重复序列,并将其克隆至pET-32a(+),构建CA125R蛋白原核表达载体pET-CA125R;将构建好的pET-CA125R载体转化至E.coli BL21(DE3),确定最佳可溶性表达条件,通过Ni-NTA亲和层析系统纯化重组CA125R蛋白;纯化重组蛋白经Western blot方法验证后,免疫家兔制备抗血清。结果:成功构建CA125串联重复序列原核表达载体,确定了最佳可溶性诱导表达条件(0.5 mmol/LIPTG,15℃诱导6 h);Western blot结果证实纯化的重组蛋白正确,纯度高;制备的抗血清能特异识别重组CA125R蛋白和天然CA125糖蛋白。结论:成功建立了CA125R高效原核表达系统,并制备了高纯度重组CA125R蛋白及其抗血清。
- 梁勤东郭变琴汪仙桃李武县董晋豫王秦涂植光
- 关键词：CA125原核表达抗血清制备
- shRNA靶向干扰COX-2稳定细胞系的建立及鉴定
- 2013年
- 脂质体法将COX-2-shRNA载体转染肝癌细胞株SMMC-7721,G418筛选获得稳定细胞系COX-2-shRNA-SMMC-7721,通过RT-PCR和Western blot分别检测细胞系中COX-2基因mRNA转录水平和蛋白质表达水平,通过MTT、流式细胞术和Transwell等观察细胞恶性生物学行为的改变。建立COX-2-shRNA-SMMC-7721(干扰组)、HK-SMMC-7721(阴性对照组)细胞株。干扰组的COX-2基因mRNA的转录水平、蛋白表达水平和细胞增殖能力较阴性对照组和SMMC-7721(空白组)明显下降(P<0.05),而阴性对照组与空白组间无明显差异(P>0.05);干扰组、阴性对照组和空白组处于G0/G1期的细胞分别为(68.85±0.27)%、(53.05±0.35)%和(53.54±0.33)%;细胞凋亡率分别为(9.60±0.20)%、(1.79±0.23)%和(1.75±0.20)%;穿膜细胞数分别为(117.60±5.30)、(338.40±11.50)和(347.40±12.80)个。干扰组与阴性对照组和空白组有显著差异(P<0.05),而阴性对照组与空白组间无明显差异(P>0.05)。利用RNA干扰技术成功构建了靶向干扰COX-2的稳定肝癌细胞系COX-2-shRNA-SMMC-7721,为COX-2分子的作用机制研究提供了细胞模型。
- 汪先桃董晋豫郭变琴马婷婷熊海玉涂植光
- 关键词：COX-2SHRNA稳定细胞系肝癌
