王云艳
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 供职机构：华南理工大学生物科学与工程学院广东省发酵与酶工程重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技攻关计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- RNA干扰技术降低黑曲霉细胞工厂的内源蛋白背景被引量：1
- 2014年
- 利用RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)改造黑曲霉细胞工厂,减少其内源蛋白表达背景。研究RNAi载体中反向互补片段特异性对RNA干扰的影响,同步干扰糖化酶基因glaA、淀粉酶基因amyA及蛋白酶调控因子基因prtT,并利用经RNA干扰改造的黑曲霉宿主SH-2表达异源脂肪酶基因tll。研究结果表明,不同长度的靶基因反向互补片段表现出不同程度的RNA干扰效应,载体pAMDS-RNAi-glaA388对糖化酶的干扰效果(94.40%)比载体pAMDS-RNAi-glaA784(70.60%)好;经三基因RNAi载体pAMDS-multi-RNAi改造的黑曲霉菌株中glaA、amyA、prtT的表达量仅为原始菌株的5.30%、17.10%和34.60%;利用经三基因RNAi载体改造的黑曲霉菌株表达脂肪酶tll,最高酶活达到97.27 U/mL,比利用原始菌株表达tll的最高酶活(73.05 U/mL)提高33.16%。因此,RNAi技术可以有效降低黑曲霉宿主内源蛋白的表达背景,有利于提高外源基因在黑曲霉细胞工厂中的表达水平和稳定性。
- 银超王云艳何攀陈婧王斌潘力
- 关键词：RNA干扰技术黑曲霉细胞工厂糖化酶淀粉酶
- 丙酮破碎法提取重组大肠杆菌表达的转谷氨酰胺酶酶原被引量：2
- 2011年
- 以茂原链霉菌(Streptomyces mobaraensis)的基因组DNA为模板,PCR扩增出转谷氨酰胺酶酶原基因(pro-trans-glutaminase,pro-TG)),PCR产物连接到pMD18-T克隆载体后亚克隆到表达载体pET-22b(+),转化到表达宿主大肠杆菌BL21(DE3)。重组大肠杆菌经IPTG诱导后,转谷氨酰胺酶酶原(pro-TG)主要以可溶性蛋白表达。菌体离心后用丙酮高速搅拌破碎细胞,亲和层析成功地纯化到了转谷氨酰胺酶酶原。转谷氨酰胺酶酶原经胰蛋白酶切割激活后其酶活为502.8 U/g CDM(菌体干重)。采用BSA交联试验证实成熟的转谷氨酰胺酶(TG)具有功能。采用丙酮破碎法提取重组大肠杆菌表达的转谷氨酰胺酶酶原对大规模工业化生产转谷氨酰胺酶进行了有益的探索。
- 沈徐凯周斌王云艳王斌杨慧林潘力
- 关键词：纯化
- 根癌农杆菌介导脂肪酶在无孢黑曲霉中的高效表达被引量：3
- 2012年
- 黑曲霉(Aspergillus niger)具有高效的蛋白表达和分泌能力.为实现异源蛋白在无孢黑曲霉中的高效重组表达,在优化遗传筛选标记的基础上,建立了根癌农杆菌介导的、以潮霉素抗性基因为筛选标记的黑曲霉转化体系.利用该体系介导米黑根毛霉脂肪酶(RML)转化黑曲霉SH-1,通过PCR鉴定、酶活检测、镍柱亲和层析及SDS-PAGE电泳检测等确定成功获得了RML的黑曲霉转化子,并通过发酵条件优化实现了RML的高效表达,对硝基苯酚比色法测得转化子酶活最高可达15 U/mL,是其在酵母中表达水平的10倍以上.
- 潘力王云艳王斌何攀李俊星
- 关键词：根癌农杆菌介导转化基因表达
