王延辉
- 作品数：9 被引量：44H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划黑龙江省重大科技攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 牛传染性鼻气管炎病毒gB基因的截短表达与间接ELISA诊断方法的建立被引量：17
- 2006年
- 经DNAstar分析,据牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)全基因序列设计合成gB基因的特异性引物,以构建的pGM-T-gB为模板,PCR扩增IBRV gB蛋白192-266位氨基酸的基因序列。将目的片段克隆,酶切鉴定并测序鉴定后,定向插入pET32a表达载体中,转化表达菌BL21。SDS-PAGE电泳分析表明,诱导表达产物以包涵体和可溶形式存在,大小约为29.2 ku,与预测值相符。亲和纯化后重组蛋白浓度为2.000 mg/mL,纯度为79.2%。间接ELISA检测证明,表达蛋白具有抗原性。以该蛋白作为诊断抗原,建立了间接ELISA诊断方法。确定的抗原包被浓度为50μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶40,阳性标准定为S/P>0.395。交叉试验表明对牛流热(BEV)、牛肺疫(CBPP)、牛病毒性腹泻(BVD)、牛结核(BTB)、牛副结核(PBB)以及牛赤羽病(BAD)等其它6种疾病阳性血清不发生交叉反应。与中和试验相比较,特异性、敏感性和符合率分别为83.3%、90.9%和88.9%;与进口法国IBRV全病毒ELISA抗体诊断试剂盒比较,特异性、敏感性和符合率分别为92%、92.7%和92.5%。上述结果表明该诊断方法具有良好的特异性和敏感性,显示了良好的应用前景。
- 李兆利薛飞朱远茂王延辉
- 关键词：IBRVGB基因纯化间接ELISA
- 牛传染性鼻气管炎病毒重组毒株、其构建方法及应用
- 本发明公开了一种牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)重组转移载体，其构建方法。本发明还公开了用该重组转移载体与IBRV基因组DNA共转染后所得到的重组毒株IBRV46。本发明重组转移载体中gE基因包括起始密码子ATG在内的1...
- 薛飞朱远茂童光志王延辉
- 文献传递
- 表达O型口蹄疫病毒VP1基因的牛疱疹病毒1型重组病毒的构建与鉴定
- 口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的偶蹄动物的一种高度接触性传染病。FMDV能感染包括猪、牛、羊等主要家畜及其它野生动物在内的80多种动物,并能形成全球大规模流行,造成巨大经
- 任宪刚薛飞朱远茂童光志王延辉冯军科祖立闯李娇
- 文献传递
- 表达O型口蹄疫病毒VP1基因的重组病毒BHV-1的构建与鉴定被引量：4
- 2009年
- 【目的】为了构建表达口蹄疫病毒(O/China/99)VP1基因的牛疱疹病毒1型,将人工合成的口蹄疫病毒VP1基因插入到巨细胞病毒(CMV)启动子之下构建gE基因缺失转移载体。【方法】利用磷酸钙介导转染法将该转移载体与亲本病毒BHV-1/gE-/LacZ+的基因组DNA共转染牛鼻甲细胞后收获增殖的病毒。通过筛选白色病毒蚀斑,得到重组病毒BHV-1/gE-/VP1。【结果】PCR检测结果表明VP1基因已经插入到了重组病毒BHV-1/gE-的基因组中,间接免疫荧光试验和Western blot证实了BHV-1/gE-/VP1中的VP1基因在感染的细胞中获得了表达。【结论】本研究成功地构建了表达口蹄疫病毒VP1基因的重组病毒BHV-1/gE-/VP1,为研制口蹄疫及其他重要牛传染病的BHV-1病毒载体疫苗奠定了基础。
- 任宪刚薛飞朱远茂童光志王延辉冯军科祖立闯李娇史鸿飞高欲燃
- 关键词：口蹄疫病毒VP1基因
- 牛传染性鼻气管炎病毒重组gD蛋白间接ELISA方法的建立及应用被引量：18
- 2008年
- 用大肠杆菌表达的牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)重组gD蛋白纯化后作为包被抗原,建立了检测牛传染性鼻气管炎病毒抗体的间接ELISA方法。交叉反应试验表明,该重组抗原与其它常见的5种牛病阳性血清不发生交叉反应;阻断反应试验表明,IBRV病毒悬液能在很大程度上阻断重组抗原与阳性血清的反应,而对阴性血清没有明显影响。在重复性试验中,批内重复的变异系数小于5%,批间重复的变异系数小于15%。与中和试验相比较,符合率、敏感性和特异性分别为84.1%、85.0%和83.4%。应用该诊断方法和本实验室已建立的以IBRV全病毒作为包被抗原的ELISA诊断方法,同时检测了采集于国内11个省份的2012份血清样本,IBRVgD-ELISA检测的平均阳性率为46.0%(926/2012),而且相对于IBRV全病毒ELISA诊断方法的符合率、敏感性和特异性分别为91.9%、94.2%和90.2%。本研究所建立的IBRVgD-ELISA具有良好的敏感性和特异性,为国内IBR流行病学调查提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。
- 祖立闯朱远茂王延辉辛九庆李娇任宪刚冯军科薛飞
- 关键词：牛传染性鼻气管炎间接ELISA
- 牛传染性鼻气管炎病毒gC～-//LacZ～+基因缺失毒株的构建及gD糖蛋白的截短表达与活性检测
- 牛传染性鼻气管步/(Infectious Bovine Rhinotracheitis，IBR/)是由牛传染性鼻气管炎病毒/(Infectious Bovine Rhinotracheitis virus，IBRV/)引...
- 王延辉
- 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒重组病毒LACZ基因
- 文献传递
- 牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白的截短表达与活性检测被引量：8
- 2007年
- 经生物学软件DNAStar分析,以牛传染性鼻气管炎病毒(Banha Nu/67)基因组DNA为模板,PCR扩增gD基因943bp的片段,将目的片段定向克隆到pET30a表达载体中,酶切及测序鉴定均正确后,转化BL21表达菌,经IPTG诱导得到部分可溶表达的重组蛋白。用Ni柱亲和层析法在非变性的条件下纯化重组蛋白,纯化的重组蛋白浓度为0.852mg/mL,纯度为85.2%。Westem blot、间接ELISA检测证明纯化的重组蛋白具有良好的抗原性和特异性。
- 王延辉薛飞朱远茂彭伍平
- 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒原核表达活性检测
- 牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白的截短表达与活性检测
- 经生物学软件DNAstar分析,以IBRV(Bartha Nu/67)基因组DNA为模板,PCR扩增gD基因943bp的片段,将目的片段定向克隆到pET30a表达载体中,酶切及测序鉴定均正确后,转化BL21表达菌,经IP...
- 朱远茂薛飞王延辉彭伍平
- 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒原核表达活性检测
- 文献传递
- 牛传染性鼻气管炎病毒重组毒株、其构建方法及应用
- 本发明公开了一种牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)重组转移载体，其构建方法。本发明还公开了用该重组转移载体与IBRV基因组DNA共转染后所得到的重组毒株IBRV46。本发明重组转移载体中gE基因包括起始密码子ATG在内的1...
- 薛飞朱远茂童光志王延辉
- 文献传递
