吴宁
- 作品数：8 被引量：14H指数：2
- 供职机构：中国科学院海洋研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省科技发展计划项目山东省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- RSK4基因表达及其对U87细胞增殖的影响被引量：1
- 2011年
- 背景与目的:RSK4是非生长因子依赖的丝/苏氨酸蛋白激酶,参与多种信号通路。本研究构建了人RSK4基因的真核表达系统,研究其对胶质瘤的调控作用,为阐明RSK4功能奠定基础。方法:采用RT-PCR法从人正常乳腺上皮细胞MCF-10A细胞中扩增获得RSK4基因的编码区,定向克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-)上,构建真核表达载体pcDNA3.1(-)/RSK4。脂质体法介导pcDNA3.1(-)/RSK4质粒转染至U87细胞中,RT-PCR和Western blot检测表达情况。采用MTT法检测RSK4基因对U87细胞生长的影响。结果:转染pcDNA3.1(-)/RSK4组U87细胞增殖明显被抑制(P<0.05)。结论:RSK4可以抑制胶质瘤细胞的增殖。
- 李田田刘明魏鉴腾吴宁王翠翠林秀坤
- 关键词：真核表达基因转染
- 海普诺改善HepG2细胞胰岛素抵抗作用研究被引量：3
- 2015年
- 通过细胞形态观察和CCK-8法研究HPN对HepG2细胞活力的影响。采用高糖高浓度胰岛素持续作用诱导 HepG2细胞建立胰岛素抵抗细胞模型，用多功能自动生化仪葡萄糖-己糖激酶法检测海普诺（HPN）对正常HepG2细胞及胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗量的影响。实验结果显示，低浓度的HPN对HepG2细胞增殖没有影响。HPN与胰岛素协同作用HepG2细胞，低浓度胰岛素对葡萄糖利用有一定的促进作用；当胰岛素浓度为1×10^–6 mol/L时， HPN可明显促进HepG2细胞葡萄糖消耗。进一步研究表明， HPN在5×10^–8～1×10^–7 mol/L浓度范围内可明显促进胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖的消耗。HPN可明显改善HepG2细胞胰岛素抵抗。
- 金水华吴宁刘少芳江波梁惠史大永
- 关键词：胰岛素抵抗HEPG2细胞
- 力达霉素通过下调VEGF表达抑制斑马鱼胚胎血管生成被引量：5
- 2010年
- 本研究采用斑马鱼胚胎模型研究力达霉素在整体动物水平对血管生成的影响。力达霉素处理胚胎后,利用形态学观察、血管染色法、转基因斑马鱼检测其对胚胎血管生成影响,以荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测VEGF基因的表达情况。结果显示:力达霉素处理后,胚胎出现心包水肿、血流速度减缓等症状;血管生长率降低,肠下静脉生成受到抑制。荧光定量PCR和蛋白免疫印迹检测表明,力达霉素对胚胎的VEGFmRNA表达水平没有影响,但VEGF蛋白的表达受到显著抑制。研究结果表明,力达霉素可以下调VEGF蛋白表达,从而抑制斑马鱼胚胎血管生成。
- 丁丽丽刘明张胜华赵向忠吴宁陈雷王广建林秀坤
- 关键词：力达霉素斑马鱼血管生成
- Sry基因沉默对小鼠胚胎性别决定基因及性腺发育的影响
- SRY/(sex-determining region of the Y chromosome,鼠上称Sry/)是Y染色体上的性别决定基因,是激发哺乳动物两性潜能的性腺向雄性分化的开关基因。雄性性别分化的过程是以SRY基...
- 吴宁
- 关键词：SRY小鼠胚胎性别决定
- 文献传递
- 斑马鱼p53基因原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2010年
- 利用原核表达系统克隆表达斑马鱼p53基因。RT-PCR法从斑马鱼胚胎中扩增获得p53基因编码区,并将其克隆至原核表达载体pET28a上,构建重组质粒pET28a/z-p53,将重组质粒转化E.coli BL21(DE3)受体菌,IPTG诱导表达,表达产物经镍柱纯化、尿素透析复性,SDS-PAGE电泳分析,结果表明,p53基因在大肠杆菌中成功表达,表达的p53融合蛋白分子量大约为53kD,透析复性后获得了高纯度可溶性的p53蛋白。
- 赵向忠刘明丁丽丽吴宁林秀坤
- 关键词：P53基因斑马鱼原核表达
- 钙离子浓度在大鼠海马神经元缺糖损伤过程中的作用研究被引量：2
- 2010年
- 目的分析钙离子浓度在大鼠海马神经元缺糖损伤过程中的变化规律,观察三七总皂苷对培养大鼠海马神经元缺糖损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法新生当天大鼠取海马组织,分散原代培养,经免疫细胞化学鉴定后复制无糖损伤模型,观察无糖培养条件对神经元存活、凋亡和乳酸脱氢酶释放的影响,通过检测细胞内游离钙离子浓度,分析钙离子浓度在大鼠海马神经元缺糖损伤过程中变化规律。同时预先在培养液中添加不同浓度的三七总皂苷,在不洗脱三七总皂苷的条件下再行无糖损伤,评价三七总皂苷对无糖损伤的影响,并初步探讨三七总皂苷作用的机制。结果无糖培养明显影响神经元的存活,导致以细胞凋亡途径介导的细胞死亡增加,细胞乳酸脱氢酶释放增加,细胞内游离钙离子的浓度明显增加;而三七总皂苷明显抑制无糖条件引起的细胞死亡和凋亡,减少乳酸脱氢酶释放,并一定程度地降低了细胞内游离钙离子的浓度。结论细胞内游离钙离子浓度与神经元缺糖损伤密切相关,三七总皂苷显著抑制无糖培养条件导致的神经元死亡,其机制可能与抑制细胞内游离钙离子浓度的增加有关。
- 周厚清王成友张玉艳王广健吴宁林秀坤
- 关键词：钙离子三七总皂苷海马神经元
- miR-26b和miR-125b调控神经胶质瘤细胞增殖和凋亡的分子机制研究
- MicroRNAs(miRNAs)是一类长约22个核苷酸、进化上高度保守的内源性非编码单链RNA,它通过与靶mRNA特异性的碱基互补配对,引起靶mRNA降解或者抑制其翻译,从而调节基因的转录后表达水平。miRNAs表达水...
- 吴宁
- 关键词：胶质瘤细胞血管生成拟态
- 文献传递
- 带组氨酸标签的斑马鱼p53真核表达载体的构建及表达鉴定
- 2010年
- 构建斑马鱼p53基因的真核表达系统,为下一步p53体内、外功能研究,以及为斑马鱼作为抗肿瘤药物筛选模型的构建和应用奠定基础。采用RT-PCR法从斑马鱼胚胎中扩增获得p53基因编码区,定向克隆到真核表达载pcDNA3.1上,构建真核表达质粒pcDNA3.1/his-p53,在起始密码前加入增强翻译的Kozak序列,并在终止密码前引入组氨酸标签便于检测和纯化,脂质体介导质粒转染HeLa细胞,RT-PCR和Western blotting检测基因表达情况。结果表明,成功构建了斑马鱼p53真核表达载体,RT-PCR扩增出1 100 bp的转录产物,表达产物能被抗his单克隆抗体特异性识别,Western blotting呈现53 kD左右单一条带。斑马鱼p53蛋白在HeLa细胞中成功表达。
- 赵向忠刘明丁丽丽吴宁林秀坤
- 关键词：P53基因斑马鱼真核表达HELA细胞
