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牛pcDNA_3-bFGF真核表达重组体的构建与鉴定被引量：4: 2002年; 【目的】构建并鉴定牛碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)基因真核表达质粒。【方法】设计含EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点的bFGFcDNA引物 ,采用PCR法从原核pET3c bFGF中扩增bFGFcDNA片段 ,纯化PCR产物 ,EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切并连接至 pcDNA3 ,转化感受态大肠杆菌DH5α ,酶切鉴定阳性重组子 ,并进行序列测定。【结果】经PCR能扩增出 4 83bp的片段 ,与预期片段大小相符 ,构建的重组体经酶切鉴定能切出插入片段 ,测序结果与预期序列完全一致。【结论】成功构建了牛bFGF真核表达重组体bFGF pcDNA3 。; 徐霖曹开源崔蕴霞郭琳洁张胜宁波郑振声; 关键词：碱性成纤维细胞生长因子基因扩增

人重组白蛋白基因在巴斯德毕赤酵母中的高效表达被引量：29: 2001年; The yeast Pichia pastoris was transformed by the multi\|copy Pichia expression vector that can express secreted human albumin.The high level expression of cell line was selected after screening.The expression of human recombinant albumin in Pichia pastoris induced by different methods were compared.The retio of secreted human albumin is 80% in total secreted proteins and the expression level reaches as high as is 10g/L.; 崔蕴霞明文玉银巍任哲汪健顾军; 关键词：酵母菌血液制剂基因工程

成纤维细胞生长因子和胰岛素对小鼠软骨细胞增殖的影响被引量：8: 2003年; 目的 :探讨碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)和胰岛素对小鼠原代软骨细胞的影响。方法 :在低血清培养基培养条件下进行小鼠原代软骨细胞培养 ,采用WST1比色法和荧光染色法观察bFGF和胰岛素对软骨细胞增殖的影响。结果 :原代软骨细胞在 0 .4%胎牛血清培养基培养条件下 ,不同浓度的bFGF和胰岛素对软骨细胞的增殖有剂量相关性。形态学观察表明 ,bFGF和胰岛素不仅促进细胞增殖 ,而且可使细胞分泌基质增多。结论; 崔蕴霞狄静芳曾耀英曾山冯铮王一飞; 关键词：成纤维细胞生长因子胰岛素小鼠软骨细胞增殖

牛bFGF-pcDNA_3在人脐静脉内皮细胞中的表达及鉴定: 2002年; 目的 :研究牛bFGF -pcDNA3 在体外培养人脐静脉内皮细胞中的表达与活性 ,及对该细胞生物学特性的影响。方法 :脂质体法将bFGF -pcDNA3 真核表达载体转染体外培养的人脐静脉内皮细胞 ,经G4 18筛选阳性克隆。通过免疫细胞化学法检测bFGF的表达部位及Ⅷ因子相关抗原的表达。应用化学发光Westernblotting法检测bFGF在转染细胞与未转染细胞中的表达。绘制细胞的生长曲线并计算倍增时间 ,采用MTT法对bFGF的生物活性进行估计。结果 :bFGF -pcDNA3 转染人脐静脉内皮细胞后 ,细胞呈梭形者增多。免疫细胞化学证实转染前后细胞均为血管内皮来源细胞 ,转染与未转染细胞均在胞浆内表达bFGF。Westernblotting证实细胞转染前后均表达 17kDbFGF ,但转染后表达量增高 ,细胞生长曲线上移 ,倍增时间缩短。MTT法证实转染细胞产生的bFGF其生物学活性约相当于持续添加外源性bFGF 5 71 4ng/L。结论 :转染bFGFcDNA的人脐静脉内皮细胞能在体外增殖 ,并具有表达与分泌活性bFGF的功能。bFGF -pcDNA3 可引起内源性bFGF表达增高 ,对血管内皮细胞产生相应的生物学活性。; 曹开源崔蕴霞徐霖郭琳洁张胜宁波; 关键词：成纤维细胞生长因子脐静脉内皮细胞

HBV-S基因逆转录病毒重组载体的构建及其在抗原提呈细胞中的表达被引量：2: 2001年; 目的 :为探索逆转录病毒载体在免疫细胞中的表达和基因治疗中的应用。方法 :用DNA重组技术构建乙肝病毒表面抗原C(HBV -S)基因重组逆转录病毒载体 ,电穿孔转染PA3 17后 ,筛选高表达克隆 ,用假病毒颗粒感染HepG2 、巨噬细胞 (RAW2 64 7)和EL4细胞 ,分别用RT -PCR及ELISA法检测目的基因表达。结果 :HBsAg在上述细胞中获得不同程度的表达 ,4 8h细胞上清中HBsAg含量 (A值 )分别为 0 92、0 5 3、0 42。结论 :本实验所用载体 ,其目的基因可在细胞内稳定表达 ,而且 ,在巨噬细胞等抗原提呈细胞中均有较高的表达 ,这提示我们质粒免疫有可能通过刺激巨噬细胞诱导机体产生较强的体液免疫和细胞免疫。作为一种高效的基因转移系统 ,该表达系统可用于基因免疫和基因治疗。; 崔蕴霞周智任哲张海红; 关键词：肝炎病毒乙型基因重排巨噬细胞

重组人碱性成纤维细胞生长因子对人羊水细胞及其它细胞的影响被引量：1: 1999年; 目的：探讨重组人碱性成纤维细胞生长因子（ｒｈｂＦＧＦ）对人羊水细胞及其它细胞的影响。方法：在低血清培养基培养条件下进行人羊水细胞及Ｂａｌｂ／ｃ小鼠巨噬细胞和３Ｔ３成纤维细胞，采用四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ）比色法和倒置显微镜观察ｒｈｂＦＧＦ对人羊水细胞存活的影响。结果：人羊水细胞、Ｂａｌｂ／ｃ小鼠巨噬细胞和３Ｔ３成纤维细胞在０－４％胎牛血清培养基培养条件下，不同浓度的ｒｈｂＦＧＦ对羊水细胞的作用存在相关性。结论：ｒｈｂＦＧＦ能延长羊水细胞、Ｂａｌｂ／ｃ小鼠巨噬细胞和３Ｔ３; 王一飞崔蕴霞戴云刘杰生林剑; 关键词：羊水巨噬细胞成纤维细胞 RHBFGF

抗bFGF McAb制备、鉴定及轻链可变区基因克隆和序列分析被引量：2: 2000年; 目的：以重组人碱性成纤包生长因子为抗原免疫小鼠，建立多株稳定分泌ｂＦＧＦ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞。半对ｂＦＧＦ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）可变区基因进行扩增及序列分析。方法：采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法和免疫沉淀法对抗体特异性和ｌｇ类型进行鉴定，同时，应用分子生物学技术，对Ｖｋ基因的ＤＮＡ片段进行克隆，并对４ａ２Ｖｋ基因进行序列测定。结果：ｂＦＧＦ单克隆抗体可特异性结合人重组ｂＦＧＦ抗原。; 崔蕴霞王一飞林剑任哲银巍宁波冯炼强; 关键词：单克隆抗体基因克隆 DNA序列分析

成纤维细胞生长因子和胰岛素促小鼠软骨细胞增殖分化的效应(英文)被引量：1: 2005年; 背景:根据软骨为单一类型细胞组成的无血管组织,对氧和营养的供应要求较低,同种免疫性较低,体内功能较简单,易于在体外构建成可供移植的人工移植细胞系等特点,从建立用于组织工程的通用人类同种软骨细胞系着手,为人工组织和人工器官走向标准化和批量生产奠定基础。目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)和胰岛素在原代培养软骨细胞的增殖过程中的效应,为组织工程中细胞因子的应用与作用进行评估。设计:以细胞为研究对象,分组对照重复观察测量。单位:一所大学的组织移植与免疫实验室。材料:实验于2002-11/2003-05在暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室完成,研究对象为随机获取的培养的软骨细胞。方法:在低血清培养基培养条件下进行小鼠原代软骨细胞培养,采用WST1比色法和荧光染色法观察不同浓度bFGF和胰岛素对软骨细胞增殖的影响。主要观察指标:主要结局:①bFGF对小鼠原代软骨细胞增殖影响。②胰岛素对小鼠原代软骨细胞增殖的影响。次要结局:软骨细胞形态学观察。结果:原代软骨细胞在4g/L胎牛血清培养基培养条件下,不同浓度的bFGF和胰岛素对软骨细胞的增殖有剂量相关性。形态学观察表明,bFGF和胰岛素不仅促进细胞增殖,而且可使细胞分泌基质增多。; 史剑波江逊狄静芳许庚崔蕴霞; 关键词：软骨细胞碱性成纤维细胞生长因子胰岛素

抑癌基因nm23-H1对化疗药物增敏作用的体外实验研究被引量：7: 2002年; 目的 :探讨抑癌基因nm2 3 H 1对几种常用化疗药物的增敏作用。方法 :构建含有人全长的nm2 3 H 1基因cDNA的真核表达载体质粒 pcDNA3 nm 2 3 H1,通过脂质体介导 ,将它和空载体质粒pcDNA3分别转染鼠肺腺癌LA 795细胞株中 ,得到的阳性转染子分别命名为 pcDNA3 nm2 3 H1 795细胞、pcDNA3 795细胞 ,另设 795细胞为正常对照组。用MTT法测定nm2 3 H1对顺铂、氮芥、丝裂霉素C、5 -氟尿嘧啶、长春新碱和足叶乙苷的增敏效应。结果 :nm2 3 H 1基因在 pcDNA3 nm2 3 H1 795细胞中获得了表达 ,MTT法检测nm2 3 H 1对顺铂、氮芥、丝裂霉素C有不同程度的增敏作用 ,而对 5 -氟尿嘧啶、长春新碱和足叶乙苷没有此效应。结论 :nm 2 3 H1可增加化疗药物顺铂、氮芥、丝裂霉素C对LA 795细胞的敏感作用。; 吴予平张美英邢少璟崔蕴霞罗勇李久香王一飞; 关键词：抑癌基因 NM23-H1 化疗药物增敏作用体外实验

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崔蕴霞

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