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胚胎干细胞体外分化为心肌细胞诱导因素的探讨被引量：29: 2000年; 目的：用胚胎干细胞（ＥＳＣ）体外诱导分化为心肌细胞，从分子水平上研究早期心脏发育相关基因及其功能。方法：（１）胚胎干细胞的培养。（２）胚胎于细胞的分化培养。（３）被分化的心肌细胞鉴定：ＲＮＡ的提取；心脏特异性引物的合成和ＲＴ－ＰＣＲ反应；探针标记、纯化和比放射活性测定；ＲＮＡ斑点杂交。结果：用最适条件培养液对ＦＳＣ定向诱导分化，可使８０％以上的ＥＳＣ分化为心肌细胞。心肌细胞以同步的方式进行收缩。反转录ＰＣＲ和斑点杂交的结果显示：心肌在早期发育就开始表达其特异性基因。结论：胚胎干细胞体外能诱导分化为心肌细胞。胎牛血清、二甲基亚砜和维甲酸的浓度及它们之间的组成不同，对ＥＳ细胞定向诱导为心肌细胞均有影响。最佳诱导条件是用２ｎｍｏｌ／Ｌ维甲酸、０．６％二甲基亚砜和２０％胎牛血清组成的条件培养液。; 刘兰英杨琨朱振宇刘玉川余细勇银巍汤建马涧泉顾军; 关键词：胚胎干细胞心肌细胞 ESC

淋球菌抗生素耐药谱和质粒图谱研究被引量：8: 2000年; 目的为了解广州地区淋球菌的抗生素耐药谱和质粒谱。方法采用琼脂稀释法测定了５种抗生素对８９株淋球菌的最小抑菌浓度（ＭＩＣ）和碱裂解法分析１０６株菌的质拉图谱。结果２株为产β－内酰胺酶菌株（ＰＰＮＧ），３株为质粒介导的高度耐四环素菌株（ＴＲＮＧ）；环丙沙星耐药率较高（６２．９％），青霉素次之（５９．５％），头孢三嗪和壮观霉素未发现耐药菌株。质粒检出率为９０．６％，其中２．６Ｍｄ隐蔽质粒携带率为８５．６％，４．５ＭｄＲ质粒为６７．８％，２４．５Ｍｄ结合质粒为３３．８％。质粒谱型以２．６Ｍｄ＋４．５Ｍｄ和２．６Ｍｄ＋４．５＋２４．５Ｍｄ多见，分别为３７．７％和２５．４％。结论表明了广州地区淋球菌抗生素耐药谱和质粒图谱，有助于淋病的治疗和防治。; 郑和平曹文苓邹为民银巍蒋涛; 关键词：淋球菌抗生素敏感性质粒耐药谱

人ureb1在大肠杆菌中高效表达及其抗体的制备被引量：5: 2001年; 目的 :构建人的ureb1(hureb1)原核高效表达重组质粒 ,以此表达的外源蛋白为抗原制备抗ureb1的抗体。方法 :用XhoI/NotI从pGU 2质粒酶切得到hureb1的ORF与pGEX 4T 2的XhoI/NotI大片段连接 ,构建表达GST hureb1融合蛋白的重组载体。转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,IPTG诱导表达。以粗制的GST hureb1融合蛋白分别免疫大白兔和小鼠 ,制备抗hureb1的多克隆抗体和单克隆抗体 ,采用WesternBlot进行特异性鉴定。结果 :构建了高效表达GST hureb1融合蛋白的原核表达载体 ,融合蛋白的表达量占菌体蛋白质总量的 33 45 %。以大肠杆菌表达的GST hureb1融合蛋白免疫动物制备了高滴度、高特异性的抗hureb1的抗体。结论 :利用重组GST hureb1融合蛋白免疫动物可获得高滴度的抗hureb1抗体。重组GST; 明文玉林学颜银巍顾军; 关键词：DNA 原核表达载体抗体大肠杆菌重组融合蛋白质粒

人重组白蛋白基因在巴斯德毕赤酵母中的高效表达被引量：29: 2001年; The yeast Pichia pastoris was transformed by the multi\|copy Pichia expression vector that can express secreted human albumin.The high level expression of cell line was selected after screening.The expression of human recombinant albumin in Pichia pastoris induced by different methods were compared.The retio of secreted human albumin is 80% in total secreted proteins and the expression level reaches as high as is 10g/L.; 崔蕴霞明文玉银巍任哲汪健顾军; 关键词：酵母菌血液制剂基因工程

人UREB1基因克隆及其在肿瘤组织中的分布被引量：5: 2001年; 目的：大鼠ＵＲＥＢ１基因编码的蛋白质能特异性地结合位于强吗啡基因启动子上游的一段ＤＮＡ序列（ｕｐｓｔｒｅａｍｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｅｌｅｍｅｎｔ，ＵＲＥ）。早期研究证实ＵＲＥＢ１对强吗啡基因启动子的转录具有促进作用，而对ｐ５３的转录激活作用具有抑制效应。本实验目的就是克隆人ＵＲＥＢ１基因，探索其与肿瘤发生发展的关系。方法：利用人工合成寡核苷酸探针从人脑ｃＤＮＡ文库中筛选人ＵＲＥＢ１基因，应用大肠杆菌表达的重组蛋白质制备的抗体检测肿瘤组织中ＵＲＥＢ１的表达分布。结果：获得了人ＵＲＥＢ１基因，核苷酸序列在对应区域及氨基酸序列与大鼠ＵＲＥＢ１基因ｃＤＮＡ序列和氨基酸序列皆有９１％的同源性。在各种肿瘤组织中都有ＵＲＥＢ１的表达，但是表达水平及定位不一样。初步发现有这样一个规律，随着肿瘤的恶性程度增加ＵＲＥＢ在１核内的聚集程度增加。ＵＲＥＢ１的酪氨酸磷酸化分析结果显示，肿瘤恶性程度高，ＵＲＥＢ１的酪氨酸磷酸化程度高。结论：ＵＲＥＢ１可能参与肿瘤的发生发展，其酪氨酸磷酸化水平可以影响肿瘤的恶性程度。; 明文玉银巍刘子川林学颜顾军; 关键词：基因克隆肿瘤蛋白质磷酸化

牛磺酸对大鼠力竭运动后肝组织自由基损伤的对抗作用被引量：21: 2002年; 以大鼠力竭运动为模型 ,观察牛磺酸对肝脏组织丙二醛 (MDA)含量、谷胱甘肽 (GSH)含量、超氧化物歧化酶 (SOD)和血清谷丙转氨酶 (GPT)的影响。结果显示 :力竭运动后大鼠肝组织MDA含量和血清GPT活性显著上升 ,肝组织GSH含量和SOD活性显著下降 ,而牛磺酸可显著地抑制力竭运动后大鼠肝组织MDA和血清GPT的升高以及肝组织中GSH含量和SOD活性的下降。提示牛磺酸对肝组织具有直接抗氧化损伤的作用。; 魏源王翔李良鸣罗桂珍王革银巍林石梅; 关键词：牛磺酸力竭运动谷丙转氨酶

人内皮抑素在大肠杆菌中的高效表达及活性研究被引量：2: 2002年; 目的 :表达人内皮抑素蛋白 ,制备多克隆抗体 ,检测其生物学活性。方法 :采用PCR法扩增人内皮抑素基因 ,构建pGEX -ES融合表达载体 ,IPTG(异丙基硫代 - β-D半乳糖苷 )诱导表达。初步纯化的内皮抑素包含体蛋白制备兔多克隆抗体 ,Western -blot检测其在小鼠肝、肾等的表达。亲和纯化的内皮抑素蛋白用内皮细胞抑制实验检测其生物学活性。结果 :诱导表达的人内皮抑素蛋白经凝血酶酶切后 ,分子量约为 2 0kD ,具有抑制内皮细胞生长的活性。制备的多克隆抗体检测出内皮抑素在小鼠肝、肾等组织的表达。结论; 张革柯细松丁爱玲银巍杨琨朱振宇; 关键词：内皮抑素大肠杆菌生物学活性实体瘤

PS-2基因的克隆及其在肝癌中的表达被引量：1: 2000年; 利用荧光差异显示技术比较了正常肝、肝硬化和肝癌组织 m RNA的表达 ,1 4个有差异的条带通过 Northern blot分析表明其中 9个为阳性 .令人感兴趣的是一个～ 5 0 0 bp的 c DNA片段 ,它在正常肝和肝硬化中低表达 ,在肝癌组织中高表达 .通过测序 ,发现该片段与 PS- 2 ( presenilin- 2 )基因有 94 %的同源性 .PS- 2基因的突变与早发性阿尔茨海默氏症有关 ,但在肝癌发生中的作用未明 .也许 PS-; 刘予川明文玉银巍刘兰英马涧泉汤健顾军; 关键词：肝癌基因克隆基因表达

抗bFGF McAb制备、鉴定及轻链可变区基因克隆和序列分析被引量：2: 2000年; 目的：以重组人碱性成纤包生长因子为抗原免疫小鼠，建立多株稳定分泌ｂＦＧＦ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞。半对ｂＦＧＦ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）可变区基因进行扩增及序列分析。方法：采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法和免疫沉淀法对抗体特异性和ｌｇ类型进行鉴定，同时，应用分子生物学技术，对Ｖｋ基因的ＤＮＡ片段进行克隆，并对４ａ２Ｖｋ基因进行序列测定。结果：ｂＦＧＦ单克隆抗体可特异性结合人重组ｂＦＧＦ抗原。; 崔蕴霞王一飞林剑任哲银巍宁波冯炼强; 关键词：单克隆抗体基因克隆 DNA序列分析

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银巍

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