翁玄
- 作品数：6 被引量：26H指数：3
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- 不同分离方法及培养条件对兔骨髓间充质干细胞生物活性的影响被引量：15
- 2010年
- 背景:骨髓间充质干细胞常被用作骨组织工程的种子细胞和基因治疗的载体细胞,如何获得纯度较高活性较好的骨髓间充质干细胞是很多研究者关心的问题。目的:观察不同分离方法及培养条件对兔骨髓间充质干细胞生物活性的影响。方法:分别用密度梯度离心法、全骨髓培养法和红细胞裂解液法提取兔骨髓间充质干细胞,48h后观察各组获得的细胞量,记录各组首次传代时间,相差显微镜观察细胞的形态,流式细胞仪鉴定其CD44抗原表达。分别用DMEM-LG、MEM-HG和DMEM/F123种培养基培养第3代细胞和第7代老化细胞,MTT法和计数板计数法比较不同时间点3种培养基培养细胞的生长情况,相差显微镜观察老化细胞的形态变化。结果与结论:3种分离方法均能得到较均一的梭形或者多角形贴壁细胞,胞核大胞浆丰富,CD44抗原表达阳性。其中红细胞裂解液法获得的贴壁细胞的量较其他方法多,首次传代时间短(P<0.05)。用DMEM/F12培养的细胞活力更好,细胞生长更迅速,并且经过DMEM/F12培养一段时间后,部分静止期细胞开始分裂增殖。提示红细胞裂解液法能够提高骨髓间充质干细胞的贴壁效率,是一种方便、有效的提取方法;DMEM/F12更能够促进细胞的增殖,较适合于培养骨髓间充质干细胞。
- 翁玄朱勇军张健安洪
- 关键词：密度梯度离心法骨髓间充质干细胞培养基
- 诱导小鼠破骨前体细胞成熟分化的实验条件探讨被引量：6
- 2011年
- 目的探讨小鼠单核细胞RAW264.7能否在RANKL诱导下向破骨细胞成熟分化。方法 RANKL作用RAW264.7细胞7天～9天,光镜、透射电镜、扫描电镜(scanning electron microscope,SEM)分别观察其细胞形态学变化,用抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色法观察TRAP阳性的多核细胞,RT-PCR检测破骨细胞表型和功能基因表达变化情况,扫描电镜观察破骨细胞在骨片上形成骨吸收陷窝。结果光镜、透射电镜下可见细胞胞体增大,为椭圆形或不规则形,胞核5～10个,扫描电镜下可见细胞表面大量的伪足样突起;此外,RANKL能诱导RAW264.7细胞分化为TRAP染色阳性的多核破骨细胞,细胞多为超过5个核的多核巨细胞;RAW264.7细胞成熟分化后具有骨吸收功能,并且能上调Cathepsin-K、TRAP、RANK等典型破骨细胞表型和功能基因mRNA的表达。结论 RAW264.7细胞是一种较好的破骨前体细胞模型,单用50ng/ml的RANKL体外连续诱导7天以上,能明显促进它向成熟的破骨细胞分化。
- 王信汪洋朱勇军翁玄周园东李平姜蓉张健
- 关键词：破骨细胞RAW264.7细胞RANKL
- 抗菌肽PR-39真核表达载体的构建及表达检测被引量：4
- 2009年
- 目的:构建富含脯氨酸精氨酸的39位氨基酸抗菌肽(Proline-arginine rich 39-amino acid peptide,PR-39)的真核表达载体,并检测它在293T细胞中的表达情况。方法:以含有PR-39核心编码区(Core coding regions,CDS)序列的质粒pBluescriptⅡSK-PR-39为模板,PCR扩增PR-39CDS序列并测序。扩增片段插入真核表达质粒pGC-FU中,构建包含PR-39基因的重组表达质粒pGC-FU-PR-39。阳性克隆用限制性内切酶酶切及测序鉴定后用脂质体2000转染293T细胞,荧光显像观察其转染效率,Western blot检测目的蛋白表达情况。结果:成功扩增出PR-39基因,通过酶切测序鉴定证明成功构建了包含PR-39的真核表达载体pGC-FU-PR-39,转化293T细胞24h后观察到荧光,Western blot检测到目的蛋白。结论:本实验成功构建PR-39真核表达载体,并能在293T细胞中表达PR-39-GFP融合蛋白,这为进一步研究PR-39的作用奠定了基础。
- 朱勇军翁玄张健文阳安
- 关键词：抗菌肽真核表达载体
- 兔人工膝关节感染模型的构建被引量：1
- 2010年
- 目的：建立兔的人工膝关节感染模型。方法：以长15mm的3mm克氏针作为膝关节内置物,通过兔的股骨髁间窝植入股骨远端。对48只成年新西兰大白兔行上述手术,并随机分为A、B、DC、4组：A组在切口缝合后即刻向关节腔内接种0.5ml1×10^7集落形成单位（Colony forming unit,CFU）的金黄色葡萄球菌ATCC25923,B组接种0.5ml1×10^6CFU的细菌,C组接种0.5ml1×10^5CFU的细菌,D组不接种细菌。于术后分别观察伤口情况,拍摄X线片,细菌培养、组织学变化及C-反应蛋白（C-reactive protein,CRP）和红细胞沉降率（Erythrocyte sedimentation rate,ESR）的变化。结果：术后14d,A组100%（11/11）感染,B组100%（12/12）感染,C组83.3%（10/12）感染,D组无感染;光镜下可见感染内置的克氏针周围炎性细胞较未感染者多;血清CRP和ESR在术后持续保持较高水平。结论：应用该方法术后接种0.5ml1×^金黄色葡萄球菌到膝关节,14d后可以成功建立膝关节置换术（Total knee arthroplasty,TKA）后感染模型。
- 翁玄张健朱勇军
- 关键词：关节置换人工关节感染动物模型
- 慢病毒介导抗菌肽PR-39基因在兔骨髓间充质干细胞中的表达及抗菌活性检测
- 2010年
- 目的构建脯氨酸精氨酸抗菌肽（proline-arginine rich 39-amino acid peptide,PR-39）慢病毒载体,并转染兔骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cells,BMSC）,检测其在BMSC中的表达及抗菌活性。方法PCR扩增目的克隆,并连接入慢病毒载体质粒pGC-FU中,与包装质粒pHelper1.0、pHelper2.0在脂质体2000介导下共转染293T细胞生产慢病毒颗粒,Real-TimePCR法检测其滴度;分离培养BMSC,BMSC转染PR-39慢病毒,荧光显微镜观察及流式细胞仪检测其转染效率,RT-PCR检测PR-39基因表达,并检测PR-39抗菌活性。结果成功包装出滴度为2×10~9 TU/mL的PR-39慢病毒载体,并转染BMSC,转染72 h后可观察到细胞呈现绿色荧光,转染效率为74.09%,同时RT-PCR检测BMSC表达PR-39基因,其上清液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用,抑菌率为98.43%（P〈0.05）。结论在慢病毒介导下,BMSC成功表达分泌具有较强抗菌活性的抗菌肽PR-39。
- 朱勇军翁玄陈婷梅张健
- 关键词：抗菌肽慢病毒载体抗菌活性骨髓间充质干细胞
- 携抗菌肽PR39基因的BMSc在膝关节内置物感染中的研究
- 目的：⑴利用金黄色葡萄球菌ATCC25923制作兔膝内置物感染模型,并探索该菌致兔膝内置物感染的有效浓度。⑵探讨携抗菌肽PR39基因的BMSc对兔膝关节内置物感染中的作用及其在体内转化情况。
方法：①选取成年健康新...
- 翁玄
- 关键词：骨骼手术关节置换炎症反应
- 文献传递
