张斌
- 作品数：12 被引量：7H指数：1
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院基础医学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- ENC1的克隆,原核表达与数种细胞系表达谱分析被引量：2
- 2002年
- 以人 3月胎脑总RNA为模板 ,用RT PCR的方法得到了ENC1(ectoderm neuralcortex 1)基因的cDNA ,经测序证实该cDNA的长度为 180 0bp ,包含ENC1的完整编码区 .将之克隆入pGEX 4T 1载体构建重组表达质粒 ,转化大肠杆菌BL2 1表达 ,经Sepharose 4B纯化得到目的蛋白 .通过Northern印迹和RT PCR检验了该基因在数种细胞系中的表达 ,结果表明其在神经胶质母细胞瘤细胞系U2 5 1中有较高的表达 ,而在包括神经母细胞瘤细胞系SH SY5Y的其他数种细胞系中无表达 .与在正常生理状态下神经系统中两种细胞的表达情况相反 .
- 丰竹张斌刘瑾彭小忠袁建刚
- 关键词：原核表达细胞系表达谱分析蛋白纯化神经细胞基因克隆
- 人肿瘤坏死因子样蛋白全长cDNA的克隆及原核表达
- 2002年
- 目的分离、克隆编码人肿瘤坏死因子样蛋白(TNFLP)的全长cDNA,并对其功能进行初步研究。方法从本室构建的λZAP表达胎脑文库中分离到编码TNFLP的全长cDNA。应用多种软件对该基因及其编码蛋白进行分析,寻找其同源蛋白,分析其亲、疏水性及其存在的结构域和基序。以Northern印迹分析检测TNFLP的mRNA的组织分布,并用谷胱苷肽-S-转移酶(GST)原核表达系统分段表达TNFLP的N端和C端蛋白。结果TNFLP全长共2112bp,编码一208个氨基酸的蛋白。亲、疏水性分析显示,TNFLP有两个疏水区,且C端95个氨基酸与小鼠的TNF-α一致性为42%。基序分析显示,TNFLP的C端有一内质网膜定位信号-TYKRL,与TNF-α完全一致。人的TNFLP位于人的16号染色体上。Northern杂交显示,TNFLP在心、脑和胰腺中呈高表达,可见一个转录本。用GST原核表达系统,分段表达了TNFLP的N端和C端。结论初步分析了TNFLP的组织表达谱,并分段表达了其N端和C端,为进一步研究其功能提供了条件。
- 胡晓燕周严代芸陈建萌张斌彭小忠袁建刚强伯勤
- 关键词：肿瘤坏死因子原核表达基因克隆
- 人M961全长cDNA及剪接异构体的分离与克隆被引量：1
- 2002年
- 目的分离、克隆人M96基因,并初步探索其在不同血细胞系中的表达。方法根据与鼠M96基因有较高同源性的人表达序列标签(EST)设计筛库引物,筛选成人睾丸及胎脑cDNA文库,采用BLAST及CLUSTALW等程序比较分析筛选到的阳性克隆;应用多细胞系杂交膜分析该基因在各细胞系的表达;用氯化血红素诱导K562细胞向红系分化,探讨该基因在此过程中的表达变化。结果从文库中筛出长度分别为1878和1382bp的M96cDNA克隆,二者为剪接异构体,其开放阅读框分别编码491及262个氨基酸,分别命名为M961和M962(GenBank接受号分别为AF072814和AF073293)。Northern杂交结果表明,在所检测的10种血细胞系中,人淋巴细胞白血病细胞系CEM的M961基因表达量最高,在有巨核及红系特点的Hel、Dami及K562白血病细胞系中M961的表达量也较高。在K562细胞分化过程中,M961基因表达略有升高。结论M961基因在某些白血病细胞系中表达量较高。
- 张斌汪俊华陶波李光涛周严彭小忠袁建刚强伯勤
- 关键词：剪接异构体基因克隆基因分离白血病
- IL-18及其受体在白血病细胞中的性质和作用
- 白细胞介素18/(Interleukin-18，IL-18/)是近年发现的一种多功能免疫调节因子，属于IL-1家族，但其生物学功能与IL-12相似。它在体内分布广泛，而且作用呈多功能性。除诱导细胞产生IFN-γ外，IL-...
- 张斌
- 关键词：IL-18自分泌受体调控抗肿瘤免疫
- 文献传递
- 乳腺干细胞的培养基、培养方法及富含乳腺干细胞的混合物
- 本发明涉及乳腺干细胞的培养基、培养方法及富含乳腺干细胞的混合物。特别地，本发明为了克服现有乳腺干细胞培养方法存在繁琐、乳腺干细胞数量较少等缺点，在基础培养基的基础上通过添加0.1-10ng/ml的雌二醇和1-100ng/...
- 赵春华豆晓伟张斌刘瑞
- Bcl-2家族与造血干/祖细胞凋亡
- 2001年
- 造血干/祖细胞的增殖分化是血细胞发育的动态平衡过程,细胞凋亡在造血调控过程中起必不可少的作用。本文介绍Bcl-2家族对细胞凋亡的调控,尤其是在造血干/祖细胞中表达的意义。
- 张斌
- 关键词：造血干细胞造血祖细胞BCL-2家族
- 人白血病细胞系J6-1变异M-CSF的表达及受体结合活性研究
- 2003年
- 目的 :从人白血病细胞系J6 1克隆并表达变异的M CSF的功能区 ,研究其受体结合活性。方法 :RT PCR克隆muM CSF ,并在大肠杆菌BL2 1trxB(DE3)、pET32c(+)系统中表达 ;镍柱鏊合层析 ,抗体亲和层析纯化。ELISA法测定其受体结合活性和解离常数 ,并测定对J6 1细胞增殖刺激的活性。结果 :muM CSF可在本文实验系统呈可溶性表达 ,纯化产物具有M CSF受体的结合活性 ,解离常数为 3.7nmol/L低于正常M CSF ,且刺激细胞体外增殖能力大于正常M CSF。结论 :从人白血病细胞系J6 1克隆的muM CSF能在BL2 1,pET32c(+)系统表达 。
- 曹震宇饶青李戈张斌林永敏郑国光吴克复
- 关键词：巨噬细胞集落刺激因子原核表达酶联免疫吸附分析
- 乳腺干细胞的培养基、培养方法及富含乳腺干细胞的混合物
- 本发明涉及乳腺干细胞的培养基、培养方法及富含乳腺干细胞的混合物。特别地，本发明为了克服现有乳腺干细胞培养方法存在繁琐、乳腺干细胞数量较少等缺点，在基础培养基的基础上通过添加0.1-10ng/ml的雌二醇和1-100ng/...
- 赵春华豆晓伟张斌刘瑞
- 文献传递
- 基质金属蛋白酶在恶性血液病发病机制中作用的研究进展被引量：1
- 2009年
- 基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)在多种血液病中异常表达,它通过降解细胞外基质、影响黏附分子和细胞因子的表达和功能,参与造血干细胞的增殖和分化,影响造血干细胞对骨髓基质细胞的黏附,参与原始及幼稚造血细胞离开骨髓、浸润外周组织的过程,导致肿瘤细胞的免疫逃逸,与疾病的预后密切相关。本文就MMP的结构,MMP的调控机制,MMP与造血干/祖细胞的增殖和分化、血管生成及肿瘤免疫的关系等作一综述。
- 朱希山张斌刘瑞豆晓伟赵春华
- 关键词：基质金属蛋白酶恶性血液病血管生成免疫逃逸
- 成骨诱导或干扰素γ预处理对胎儿骨髓源Flk-1^+间充质干细胞免疫活性的调节被引量：1
- 2008年
- 背景:骨髓间充质干细胞在修复异基因组织最终分化为特定细胞后,理论上会因MHC及共刺激分子上调而引起组织排斥,但实际上并没有发生排斥反应。推测骨髓间充质干细胞在异基因组织分化诱导及炎性因子微环境作用下,有可能分化成一种仍具有免疫调节活性的终末细胞,不被机体的免疫识别系统清除掉。目的:在体外运用成骨诱导及干扰素γ预处理来模拟体内组织分化及炎性因子微环境,观察在此作用下胎儿骨髓源Flk-1+间充质干细胞是否能够保持其在自然条件下所呈现的免疫学活性。设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2007-09/2008-05在北京协和医学院基础学院完成。材料:2例骨髓样品取自流产胎儿,由北京回龙冠妇产医院提供。外周血样品取自15~35岁健康志愿者,由北京三○七医院提供。地塞米松等诱导因子和干扰素γ为美国Sigma公司产品。方法:Ficoll法分离胎儿骨髓单个核细胞,取白环层以上细胞,以1×106/cm2密度接种,贴壁法纯化,采用阴性分选法去除CD45+、GlyA+和CD34+细胞,分离扩增得到Flk-1+骨髓间充质干细胞。以淋巴细胞分离液梯度离心分离外周血单个核细胞,用于混合淋巴细胞培养实验及有丝分裂原刺激的淋巴细胞增殖实验。主要观察指标:流式细胞仪鉴定细胞表型,用成骨、成脂、成软骨和成内皮诱导液检测其分化潜能,成骨诱导或干扰素γ预处理后细胞表面抗原表达、对淋巴细胞增殖及活化抗原CD69、CD25表达的影响,对白细胞介素10和转化生长因子β分泌水平的影响。结果:光镜下骨髓来源的间充质干细胞为成纤维细胞样贴壁生长,均高表达Flk-1,同时高表达黏附分子CD29、CD44、CD105,造血细胞标志CD34、CD45呈阴性;可向成骨、成脂肪、成软骨和成内皮方向分化;低表达MHC-Ⅰ类分子,不表达MHC-Ⅱ类分子,成骨诱导能上调MHC-Ⅰ表达,干扰素γ预处理可上调MH
- 张斌刘瑞朱希山豆晓伟刘星霞陈媛赵春华
- 关键词：成骨干扰素Γ免疫调节活性
