目的:基于(2,3-二油酰基-丙基)-三甲胺(DOTAP)聚乙二醇-聚己内酯(MPEG-PCL)制备阳离子胶束DMP,并对其表征以及不用浓度的血清转染进行考察。方法:用旋转蒸发仪制备阳离子胶束DMP,用马尔文激光粒度仪对粒径和zeta电位进行了测定,用凝胶阻滞来确定阳离子胶束DMP完全阻滞RNA的比例,用流式细胞仪定量检测阳离子胶束DMP在含有不同浓度梯度的血清的转染效率。结果:通过对阳离子胶束DMP的制备工艺的筛选,制备出阳离子胶束DMP,测得粒径为144.8 nm,PDI=0.183,zeta电位46.4 m V,带有正电荷。凝胶阻滞实验结果显示,当DMP与Scramble si RNA N/P≥30时能够完全阻滞。体外转染实验显示,在含有0%,10%,20%,30%的血清中,DMP/FAM si RNA复合物对C26结肠癌细胞的转染效率分别为85.47±1.01%,81.57±2.04%,75.29±1.20%,71.64±1.59%。结论:阳离子胶束DMP具有良好的粒径和电位,其转染效率不受血清的影响,在不同浓度的血清转染中均具有较高的转染效率,并且具有较低的细胞毒性,可以作为一种安全有效的si RNA载体。
目的:制备纳米粒载体DMP,对其进行表征的测定,研究DMP介导的Bcl-xl siRNA的抗肿瘤活性。方法:采用MTT法对纳米粒的细胞毒性进行测定;通过Q-PCR法检测mRNA的含量,检测DMP递送Bcl-xlsiRNA入C26细胞的基因沉默效果;通过MTT法研究DMP/si RNA对C26细胞的抗肿瘤效果,测定其对C26细胞的肿瘤抑制作用;用克隆形成实验进一步证明DMP/siRNA能够抑制C26细胞生长,具有显著的抗肿瘤活性;采用碘化丙啶(PI)染色法流式细胞术来分析经过DMP/siBcl-xl治疗的C26细胞的凋亡率。结果:纳米粒具有良好的粒径和电位以及较低的细胞毒性,其IC50为3.7μg﹒mL^(-1)。Q-PCR结果显示DMP/siBcl-xl有效地降低了Bcl-xl信使RNA的水平;MTT结果显示DMP/siBcl-xl(50 n M和100 n M)的生存率分别为69.6%±3.3%,56.3%±1.9%,低于DMP组;克隆形成实验表明DMP/siBcl-xl能够抑制C26细胞的增殖,具有显著的抗肿瘤活性;凋亡实验结果显示DMP/siBcl-xl的细胞凋亡率为33.0%±3.8%,与对照组、DMP组、DMP/Scramble siRNA组比较,细胞凋亡率显著地增加了。结论:纳米粒DMP具有良好的粒径和电位,并且具有较低的细胞毒性。DMP/siBcl-xl能够沉默Bcl-xl基因,引发C26细胞的凋亡,进一步实现抑制C26细胞生长的治疗作用。实验表明纳米粒DMP能够作为有效的载体递送siRNA用于结肠癌的治疗。
