吴燕
- 作品数：14 被引量：29H指数：3
- 供职机构：中国食品药品检定研究院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 无细胞百日咳疫苗抗体活性持久性监管研究
- 2019年
- 目的:比较不同类型无细胞百日咳疫苗免疫小鼠后诱导的抗体应答及其持久性。方法:将来自于3家企业,采用2种不同工艺生产的无细胞百日咳疫苗(组分苗和共纯化苗)按一定比例稀释后分别给3组小鼠皮下接种,0.5 mL/只,于第4周加强免疫,剂量与初免疫相同。于免疫后第4周、第5周、第8周、第12周、第17周、第30周、第40周、第50周和第65周取血,分离血清,检测小鼠血清中抗百日咳抗体IgG水平(抗-PT和抗-FHA)和PT的中和抗体水平,并对其结果进行分析比较。结果:两类疫苗组检测结果比较,在免疫后第30周之前,两组之间抗-PT和抗-FHA水平无显著性差异;但在30周之后,两组之间抗-PT和抗-FHA水平有显著性差异(P <0.05),组分苗组抗体水平高于共纯化苗组。中和抗体方面,组分苗组中和抗体水平高于共纯化苗组,两组比较有显著性差异(P <0.05)。结论:两种类型的百日咳疫苗免疫小鼠后均能诱导产生体液免疫应答,组分苗组的抗体持久性(包括百日咳抗体IgG和百日咳PT中和抗体)强于共纯化苗组;且百日咳IgG抗体与中和抗体之间具有一定的相关性。
- 王丽婵晁哲吴燕骆鹏卫辰马霄
- 关键词：无细胞百日咳疫苗抗体中和抗体免疫持久性
- 不同ELISA系统检测人血清百日咳IgG抗体的比较研究被引量：2
- 2019年
- 目的使用A、B、C 3组酶联免疫吸附试验(ELISA)系统进行百日咳疫苗临床血清检测,每组ELISA系统包括至少一种百日咳毒素(PT)、一种丝状血凝素(FHA)和一种黏附素(PRN)包被抗原,其中C组抗原包括2种FHA抗原,酶标二抗是相同的抗人IgG抗体。比较不同包被抗原对百日咳疫苗临床血清中3种IgG抗体检测结果的影响。方法收集164对无细胞百日咳、白喉和破伤风疫苗基础免疫前、免疫后临床血清,使用ELISA法检测和计算血清百日咳IgG抗体的转阳率和单位值。使用χ2检验比较转阳率差异,使用方差分析比较抗体检测结果。结果A组抗原检测IgG抗体结果为PT 82.19IU/mL,FHA 81.66IU/mL,PRN39.34IU/mL;转阳率均为100.0%。B组抗原检测结果为PT 95.59IU/mL,FHA 57.39IU/mL,PRN 40.76IU/mL;转阳率PT抗体为99.4%,其余为100.0%。C组抗原检测结果为PT 60.74IU/mL,2种FHA分别为29.33IU/mL和53.32IU/mL,PRN 34.05IU/mL,转阳率为99.4%、95.1%、100.0%和98.8%。3组抗原检测的临床血清转阳率经χ2检验FHA差异有统计学意义(P<0.05),PT和PRN差异无统计学意义(P>0.05);抗体GMC经方差分析,所有组抗原检测3个抗体值之间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论本次人临床血清抗体转阳率和抗体值达到保护力水平,但是不同抗原检测系统之间差异均有统计学意义,应尽快建立百日咳抗血清IgG检测用抗原试剂国家参考品。
- 卫辰晁哲吴燕骆鹏王丽婵马霄
- 关键词：百日咳IGG抗体
- 无细胞百日咳疫苗小鼠中和抗体法的建立及效力评价验证被引量：1
- 2018年
- 目的建立一种元细胞百日咳疫苗的功能性抗体检测方法，为无细胞百日咳疫苗原液及成品的生产一致性评价和效力评价提供一种便捷有效的解决方案。方法优化并使用CHO细胞簇集试验方法检测鼠免疫血清的百日咳毒素中和抗体滴度。结果确定疫苗样品以1／5人用剂量腹腔免疫20～24g、5周龄的雌性NIH小鼠10只，4周后采血分离血清，倍比稀释血清用0．1IU／ml的百日咳毒素国家参考品中和2h，加入到预先培养的CHO细胞孔中孵育48h后判定簇集结果，最终不簇集孔的血清稀释倍数的几何均值即为样品中和抗体滴度。不同工艺无细胞百日咳疫苗的中和抗体滴度有显著性差异；不同工艺无细胞百日咳疫苗改良脑腔攻击试验结果通过与不通过的产品中和抗体有明显区分度。结论百日咳毒素中和抗体法大幅减少动物使用量，CHO细胞簇集试验具备一定的重复性和精密性，可以满足不同工艺无细胞百日咳疫苗成品及原液的生产一致性和效力的监测和初步评价。
- 卫辰晁哲吴燕王丽婵骆鹏马霄
- 关键词：百日咳毒素无细胞百日咳疫苗中和抗体CHO细胞效力试验
- 中国百日咳疫苗生产用菌株完成图基因组遗传分析
- 2023年
- 目的对我国百日咳疫苗生产用菌株进行完成图基因组的遗传分析。方法利用PacBio Sequel三代测序平台与Illumina二代测序平台相结合的方式,对百日咳疫苗生产用原始菌株进行完成图基因组测序,并进行基因组组分分析、基因功能注释以及比较基因组分析。同时对企业生产过程中不同代次菌株进行遗传稳定性分析。结果获得了百日咳疫苗原始菌株及其生产过程不同代次菌株的完成图基因组,基因组长度4.1 Mb,GC含量68%,不同代次间基因组结构稳定;获得并分析了pt、pha、prn、fim2、fim3、act、tct、ompA、BrKA、rplD、BP1569等具有免疫原性或潜在免疫原性的基因,不同代次间基因未发生变异。结论本研究获得了结构完整、背景清晰的百日咳疫苗生产用菌株完成图基因组,为我国百日咳疫苗生产用菌种的质量控制提供了依据,同时也为百日咳分子流行病学的研究提供了参考。
- 李喆吴燕王丽婵卫辰廖平安朱德武瞿明霞马霄
- 关键词：百日咳疫苗
- 抗屋尘螨Ⅱ组天然变应原单克隆抗体的制备及鉴定被引量：1
- 2018年
- 目的制备并鉴定抗屋尘螨Ⅱ组天然变应原单克隆抗体。方法利用小鼠杂交瘤方法,筛选分泌特异性抗体的杂交瘤细胞,通过筛选的杂交瘤细胞诱生小鼠腹水后,对其进行纯化。利用ELISA方法检测抗体效价,Western blot法检测抗体与变应原的特异性反应,生物信息学方法分析抗体的交叉反应性。结果获得4株IgG1型别的针对屋尘螨Ⅱ组天然变应原的高效价单克隆抗体,其中1株抗体可特异性识别不同厂家屋尘螨Ⅱ组变应原,其余3株抗体可同时识别不同厂家屋尘螨及粉尘满Ⅱ组变应原。生物信息学分析表明,屋尘螨与粉尘满Ⅱ组变应原具有较高的同源性。结论成功制备了针对屋尘螨Ⅱ组天然变应原的单克隆抗体,为尘螨变应原的检测提供了参考。
- 李喆张影杨英超田霖吴燕马霄辛晓芳
- 关键词：单克隆抗体效价特异性
- 第1代百日咳毒素国家参考品的标定被引量：4
- 2018年
- 目的标定第1代百日咳毒素国家参考品。方法以WHO第1代百日咳毒素国际参考品JNIH-5为标定标准品,组织6个实验室采用CHO细胞簇集试验的方法对百日咳毒素候选参考品C1进行协作标定,并给予国际单位值。由中国食品药品检定研究院通过CHO细胞簇集试验对4和37℃放置7、14、21、28 d的C1进行热加速稳定性检测,-20℃放置36个月的C1进行实时稳定性检测,将C1用不同稀释液(水、PBS、50%甘油)复溶,于4、-20、-80℃分别放置1、7及14 d,检测复溶稳定性。结果 C1经6个实验室的协作标定获得104个有效结果,最终确定候选参考品簇集活性为3 000 IU/支。C1的纯度、外观、水分、无菌、分装精度均合格,与JNIH-5的抗原抗体结合能力差异无统计学意义(P>0.05),具有良好的实时稳定性、热加速稳定性,C1经50%甘油复溶后2周内稳定性较好。结论该候选参考品符合国家参考品的各项要求,可用于百日咳毒素CHO簇集试验及组分百日咳疫苗原液抗原纯度、安全性和免疫原性的检测。
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- 关键词：百日咳毒素参考品
- 组分百日咳疫苗安全性检测体外替代方法的应用和初步评价
- 2023年
- 目的:用一种组分百日咳疫苗残留毒性的体外替代检测方法,更稳定和客观地评价疫苗成品的生产一致性。方法:验证直接定性法和间接定量法2种中华仓鼠卵巢细胞簇集试验方法,分别对6个国内外厂家的10种组分百日咳疫苗产品毒性进行定量和定性检测,并使用百日咳毒素参考品将体外法与小鼠组胺致敏试验进行桥接和初步评价。结果:体外定量试验的灵敏度为0.0026±0.0003 IU·mL^(-1),几何变异系数为13%,体外定性试验的灵敏度为0.0067±0.0016 IU·mL^(-1),几何变异系数为24%,组胺致敏试验的灵敏度为3.3 IU·mL^(-1);所有样品的体外定性结果均为阴性,小鼠组胺致敏试验结果均合格,体外定量结果与小鼠组胺致敏结果具有良好的相关性(r=0.737,P<0.05)。结论:本研究在国内首次使用CHO细胞簇集试验方法检测百日咳疫苗成品,并进行了初步评价。该方法灵敏度高于小鼠组胺致敏试验,可应用于百日咳疫苗毒性及毒性逆转检测。该方法需要更广泛的推广应用和数据积累,以达到完全替代动物实验的目标。
- 吴燕卫辰王丽婵晁哲马霄
- 关键词：百日咳
- 第2代WHO百日咳毒素国际标准品的协作标定被引量：2
- 2018年
- 目的:建立第2代WHO百日咳毒素国际标准品。方法:以第1代WHO百日咳毒素国际标准品为协作标定的标准品,对英国国家生物制品检定所提供的待标品和中国食品药品检定研究院内部参考品进行国际单位值测定和稳定性测定。测定方法为组胺致敏试验、CHO细胞簇集试验以及3项生化试验方法。结果:中国食品药品检定研究院完成了组胺致敏、CHO细胞簇集2项试验以及1项生化试验。结论:NIBSC经过对来自12个国家的14个实验室的结果进行统计学处理后,赋值第2代WHO百日咳毒素国际标准品组胺致敏活性为每支1 813 IU、CHO细胞簇集活性为每支680 IU,储存和运输稳定性符合要求。
- 卫辰晁哲吴燕王丽婵骆鹏马霄
- 关键词：国际标准品百日咳毒素
- 以组分百白破疫苗为基础的联合疫苗中气管细胞毒素定量分析液相色谱串联质谱联用方法的建立及验证被引量：3
- 2020年
- 目的建立定量分析以组分百白破疫苗为基础的联合疫苗中百日咳鲍特氏菌气管细胞毒素(tracheal cytotoxin,TCT)的液相色谱串联质谱(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)方法,并进行验证及初步应用。方法HPLC条件:色谱柱BioC18,流动相A为0.1%甲酸水溶液(V/V),流动相B为0.1%甲酸乙腈溶液(V/V),进样量为5μL,柱温为30℃,流速为0.3 mL/min;MS条件:电喷雾离子源正电子模式,电压为3.0 KV,离子源温度为300℃,脱溶剂管温度为250℃,雾化器流速为3 L/min,干燥气流速为10 L/min,采用多反应监测模式(multi reaction monitoring mode,MRM)检测TCT。验证方法的线性范围、灵敏度、精密度及准确度。采用该方法对国内外公司生产的组分百白破联合疫苗33批成品、63批原液、80批纯化蛋白进行TCT筛查及定量分析。结果TCT标准溶液在20.66~661 ng/L范围内,与TCT的定量高子通道922.3>719.3峰面积线性良好,线性方程为Y=3555.9 X-3368,R2=0.996;检出限为2.58 ng/L,定量限为10.33 ng/L;20.65、82.625及330.5 ng/L TCT标准溶液重复检测5次TCT峰面积的RSD分别为2.23%、4.61%和4.40%;66.1及33.05 ng/L的加标样品回收率分别为104.1%和94.4%。所有组分百日咳联合疫苗成品及原液样品均无TCT检出,纯化蛋白样品仅有一家公司的1批黏附素(pertactin,PRN)蛋白的裂解菌体浓缩液检出65.5 ng/L TCT,其后序工艺样品均未检出。结论成功建立了定量分析组分百白破联合疫苗中TCT的LC-MS/MS方法,该方法灵敏度高,准确度、精密度及线性良好,可用于我国组分百白破联合疫苗的TCT定量定性检测。
- 卫辰吴燕龙珍黄元礼王丽婵马霄
- 两种不同类型无细胞百日咳疫苗诱导小鼠免疫应答分析被引量：2
- 2018年
- 目的比较两种不同类型无细胞百日咳疫苗免疫小鼠后诱导体液免疫和细胞免疫应答的特点。方法将BALB/c小鼠分为3组(分别纯化Pa组、共纯化Pa组、PBS组),分别用稀释后的两种不同工艺生产的无细胞百日咳疫苗及PBS皮下接种,接种量0.5 m L/只,于第4周加强免疫,剂量与初免相同。于免疫后第1周、第4周和第5周取血,分离血清用于检测小鼠抗百日咳抗体Ig G水平(抗-PT和抗-FHA);同时于加强免疫后第7天,分离小鼠脾淋巴细胞,经刺激后,取其培养上清,用流式细胞微球芯片捕获法(cytometric bead array,CBA法)测定脾淋巴细胞经体外刺激后所产生的Th1、Th2和Th17型细胞因子的含量。结果对两种类型无细胞百日咳疫苗组检测的结果进行比较,在免后第4周,分别纯化Pa组和共纯化Pa组的抗-PT和抗-FHA Ig G水平差异无统计学意义(P>0.05);但在免后第5周,分别纯化Pa组的抗-PT和抗-FHA Ig G水平均高于共纯化Pa组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。经PT刺激后诱导产生的细胞因子,分别纯化Pa组的IL-4含量高于共纯化Pa组,差异具有统计学意义(P<0.05);分别纯化Pa组和共纯化Pa组的其他细胞因子差异均无统计学意义(P>0.05)。结论两种类型的无细胞百日咳疫苗免疫小鼠后均能诱导产生体液免疫应答和细胞免疫应答。
- 王丽婵晁哲卫辰吴燕骆鹏马霄
- 关键词：无细胞百日咳疫苗免疫应答抗体细胞因子
