- DDX6通过调控CKMT1A mRNA稳定性促进鼻咽癌细胞增殖和迁移的机制研究
- 2024年
- 背景与目的:DDX是一类腺苷三磷酸(adenosine triphosphate,ATP)依赖的RNA解旋酶,与mRNA调控、肿瘤增殖及侵袭等密切相关。本研究旨在探讨DDX家族成员DDX6对CKMT1A mRNA稳定性的影响以及DDX6-CKMT1A轴对人鼻咽癌细胞CNE2增殖和迁移能力的影响及其分子机制。方法:检索癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中DDX6和CKMT1A在人头颈部鳞状细胞癌中的表达情况并进行相关性分析,利用蛋白质印迹法(Western blot)检测南通大学附属医院保存的人体鼻咽癌组织和正常鼻咽部组织中CKMT1A和DDX6的表达,本研究通过了南通大学附属医院伦理委员会的审查(编号:2022-L114)。利用transwell实验检测细胞迁移能力,采用EdU试剂盒检测细胞增殖能力,采用细胞集落形成实验检测克隆形成能力。转染慢病毒、质粒,构建南通大学附属医院保存的人源鼻咽癌细胞CNE2的shDDX6、sh-CKMT1A、sh-CKMT1A+sh-DDX6和oe-CKMT1A细胞模型,明确DDX6和CKMT1A表达水平对鼻咽癌细胞恶性生物学表型的影响。构建BALC/c裸小鼠皮下移植瘤模型,检测DDX6和CKMT1A在小鼠体内对鼻咽癌细胞成瘤性的影响。采用RNA稳定性实验检测敲除DDX6对CKMT1A mRNA的影响,进一步明确DDX6的分子机制。结果:人鼻咽癌组织中DDX6高表达,CKMT1A低表达,DDX6与CKMT1A表达呈负相关。DDX6通过破环CKMT1A mRNA稳定性,抑制CKMT1A蛋白质翻译。在CNE2细胞中,CKMT1A低表达可增强细胞迁移和增殖能力,高表达则抑制细胞迁移和增殖能力,而DDX6的敲除可逆转CKMT1A下调导致的恶性行为进展。在裸鼠皮下移植瘤模型中,低表达CKMT1A促进肿瘤细胞生长,低表达DDX6抑制肿瘤细胞生长,而同时敲除DDX6与CKMT1A能恢复单独敲低DDX6导致的抑制效果。结论:鼻咽癌细胞中DDX6通过破坏CKMT1A mRNA稳定性,负调控CKMT1A蛋白质翻译,增强鼻咽癌细胞增殖和迁移能力,从而促进鼻咽癌恶性进展。
- 熊茄妍雷伟游波张振新谢海静单颖夏天周勇
- 关键词：鼻咽癌细胞增殖细胞迁移
- 一种用于检测鼻咽癌预后的生物标志物及其应用
- 本发明属于生物医药领域，公开了一种用于检测鼻咽癌预后的生物标志物及其应用。本发明提出的生物标记物由miR‑106a‑5p、BTG3和SOX9中的一种或三种组成。当生物标记物由miR‑106a‑5p、BTG3和SOX9组成...
- 尤易文游波张启成顾苗夏天陈静张薇张洁吴笛施思单颖包丽丽
- 缺氧微环境中外泌体富含的MMP-13在鼻咽癌发生发展中的作用及机制研究
- 单颖尤易文
- miR-23a在制备治疗TSGA10低表达鼻咽癌药物中的应用
- 本发明公开了一种miR‑23a在制备治疗TSGA10低表达鼻咽癌药物中的应用。本发明miR‑23a是新发现的调控TSGA10基因的一种miRNA分子，其可抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移；为鼻咽癌精准治疗提供了一个新靶点。
- 尤易文包丽丽游波施思单颖刘东张启成刘益飞王新乐慧君
- 文献传递
- 一种用于检测鼻咽癌预后的生物标志物及其应用
- 本发明属于生物医药领域，公开了一种用于检测鼻咽癌预后的生物标志物及其应用。本发明提出的生物标记物由miR‑106a‑5p、BTG3和SOX9中的一种或三种组成。当生物标记物由miR‑106a‑5p、BTG3和SOX9组成...
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- 文献传递
- 缺氧微环境中外泌体富含的MMP-13在鼻咽癌发生发展中的作用及机制研究
- 目的:探讨基质金属蛋白酶13(MMP-13)在鼻咽癌组织、细胞及患者血液来源的外泌体(exosomes)中的表达情况及对鼻咽癌缺氧微环境的影响,以期揭示鼻咽癌转移的分子生物学机制,为鼻咽癌早期诊断、判断预后提供新的理论依...
- 单颖尤易文
- 关键词：鼻咽癌外泌体肿瘤转移
- 文献传递
- 鼻息肉来源的富含ADAM10的外泌体影响血管生成及血管渗透性
- 张薇张洁倪昊生游波单颖包丽丽吴笛乐慧君陈静
- 外泌体生物标志物MMP-13的提取、检测方法及试剂盒
- 本发明公开了一种外泌体生物标志物MMP‑13的提取、检测方法及试剂盒，提取、检测方法包括缺氧微环境模型构建、外泌体的提取和纯化、电镜鉴定外泌体、外泌体总蛋白样品制备、凝胶电泳和蛋白质免疫检测等步骤。本发明方法简便、易操作...
- 尤易文单颖游波施思张启成张振新顾苗陈静包丽丽
- 文献传递
- 雌激素相关受体α介导的脂噬对鼻咽癌细胞增殖和迁移能力的影响
- 2024年
- 目的探讨雌激素相关受体α(ESRRA)介导的脂噬对鼻咽癌细胞增殖、迁移能力的影响。方法选取2021年至2023年南通大学附属医院经病理确诊的临床样本16例,其中正常鼻咽黏膜8例,鼻咽癌8例;选择永生化的正常鼻咽上皮细胞株NP69和鼻咽癌细胞C666-1、CNE2、TW03-EBV、TW03。将鼻咽癌C666-1、CNE2细胞株分别分为siR-NC组(转染小干扰RNA阴性对照序列)和siR-ESRRA组(转染针对ESRRA基因的小干扰RNA)。采用蛋白质印迹法和免疫组织化学法检测ESRRA蛋白相对表达水平;EdU实验检测C666-1、CNE2细胞增殖能力;Transwell实验检测C666-1、CNE2细胞迁移能力;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测ESRRA、围脂滴蛋白3(PLIN3)mRNA的相对表达水平;透射电镜观察C666-1、CNE2细胞脂噬的形成;使用氟硼荧染料(Bodipy)标记脂滴后,通过细胞免疫荧光实验观察脂滴与LC3、PLIN3、LAMP2的共定位情况;双荧光素酶报告基因实验验证ESRRA与PLIN3的靶向关系。结果鼻咽癌组织中ESRRA蛋白相对表达量(1.15±0.75)高于正常鼻咽黏膜组织(0.32±0.21),差异有统计学意义(t=3.02,P=0.009)。鼻咽癌细胞株C666-1、CNE2、TW03-EBV、TW03中ESRRA蛋白相对表达量分别为1.539±0.044、1.420±0.030、2.867±0.044、1.323±0.022,均高于正常鼻咽上皮细胞NP69(0.094±0.002),差异有统计学意义(F=34.08,P<0.001)。EdU实验结果显示,siR-NC组和siR-ESRRA组CNE2细胞中EdU标记阳性细胞比例分别为(70.44±4.06)%和(51.51±0.92)%(t=7.88,P=0.001),C666-1细胞中分别为(62.25±3.89)%和(54.91±0.27)%(t=3.26,P=0.031)。Transwell实验结果显示,CNE2、C666-1细胞中siR-ESRRA组迁移细胞数均少于siR-NC组[CNE2细胞:(181±7)个比(261±21)个;C666-1细胞:(201±16)个比(256±7)个],差异均有统计学意义(t=6.30,P=0.003;t=5.43,P=0.006)。qRT-PCR检测结果显示,siR-ESRRA组PLIN3 mRNA相对表达量较siR-NC组高(CNE2细胞:1.58±0.16比0.83±0.17,t=5.59,P=0.005;C666-1细胞:1.37±0.12比1.06±0.06,t=3.8
- 孔秀枝单颖尤易文顾苗肖海娟尤梦蝶游波
- 关键词：鼻咽癌细胞增殖自噬
- 鼻腔盥洗液外泌体的制备、鉴定方法
- 本发明公开了一种非诊断用途的鼻腔盥洗液外泌体的制备、鉴定方法，包括鼻腔盥洗液的采集、外泌体的提取与纯化、电镜鉴定外泌体、免疫印迹检测蛋白CD9、CD63的存在等步骤。本发明方法简单可行、方便有效，实现了鼻腔盥洗液中外泌体...
- 陈静张薇尤易文游波单颖施思包丽丽乐慧君张洁
- 文献传递
