尤奇
- 作品数：14 被引量：56H指数：5
- 供职机构：遵义医学院附属医院更多>>
- 发文基金：贵州省科学技术基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 同种异体幼年软骨微粒移植修复关节软骨缺损的可行性被引量：2
- 2019年
- 背景:同种异体幼年软骨微粒制备简单,获取容易,该技术在美国已经进入临床研究阶段,但临床上还处于"黑箱"操作阶段,对于移植的幼年软骨微粒是如何通过生物化学机制和基因信号转导发挥生物学效应,目前还不清楚。目前,中国还没有相关技术的报道。目的:探索同种异体幼年软骨微粒移植修复关节软骨缺损的可行性。方法:从幼年贵州小香猪(陆军军医大学实验动物中心提供)膝关节获取同种异体幼年软骨微粒,体外培养1,3,7 d进行Brdu免疫荧光检测。将同种异体幼年软骨微粒/纤维蛋白凝胶复合物移植于SCID大鼠(陆军军医大学实验动物中心提供)皮下,1个月后取材,进行苏木精-伊红染色、番红染色、免疫组织化学检测。在10只成年贵州小香猪(陆军军医大学实验动物中心提供)膝关节髌骨面制作直径8 mm的软骨缺损,随机分2组干预,实验组软骨缺损处移植同种异体幼年软骨微粒/纤维蛋白凝胶复合物,空白组不移植任何材料,3个月后取材,对修复组织进行苏木精-伊红、番红-固绿、甲苯胺蓝、免疫组织化学检测。结果与结论:(1)在同种异体幼年软骨微粒的体外培养中,第1天见到极少的软骨细胞脱落与增殖;第3天可见少量的软骨细胞脱落与增殖;第7天见到有明显的细胞脱落与增殖,且增殖的细胞分布在切缘周围;(2)皮下移植1个月后,移植的同种异体幼年软骨微粒仍然存活且周围有少量的软骨细胞增殖;(3)软骨缺损修复3个月后,空白组未见明显修复组织;实验组可见明显的修复组织,新生的软骨组织颜色与正常软骨组织颜色相似,且与周围正常软骨组织界面整合良好,细胞分布较均匀;(4)结果表明,同种异体幼年软骨微粒修复关节软骨缺损可取得良好的效果。
- 尤奇段小军张骏金瑛彭旭葛振刘毅
- 关键词：同种异体关节软骨缺损生物材料纤维蛋白
- TGF-β_1联合VEGF对人羊膜间充质干细胞向韧带成纤维细胞体外分化作用的研究被引量：5
- 2017年
- 目的探讨人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,h AMSCs)是否具有MSCs特性,以及经TGF-β_1和VEGF联合诱导后是否具有向韧带成纤维细胞分化的能力。方法取自愿捐赠的足月产妇胎盘,采用胰蛋白酶胶原酶联合消化法分离培养h AMSCs,流式细胞术检测h AMSCs表型分子,免疫荧光染色检测h AMSCs其角蛋白-19(cytokeratin-19,CK-19)和波形蛋白表达情况。取第3代h AMSCs,分别使用含TGF-β_1和VEGF的L-DMEM/F12成韧带或纤维细胞诱导培养基(实验组)和普通L-DMEM/F12培养基(对照组)培养,细胞增殖-毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测两组细胞增殖能力;培养5、10、15 d分别采用免疫荧光染色及实时荧光定量PCR检测韧带及血管生成相关特异性蛋白和基因表达。结果倒置相差显微镜观察示h AMSCs呈单层贴壁生长;流式细胞术结果示h AMSCs表达MSCs表型分子;免疫荧光染色示h AMSCs高表达波形蛋白、低表达CK-19;h AMSCs具有向成骨、成软骨及成脂细胞分化的能力。CCK-8法检测示,7 d时两组细胞均达增殖高峰,实验组细胞增殖能力于7 d后显著高于对照组(P<0.05)。免疫荧光染色示,培养5、10、15 d时实验组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白(Fibronectin)、细胞连接素(Tenascin-C)表达染色均较对照组增强。实时荧光定量PCR结果示,随时间延长实验组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Fibronectin、α-肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、VEGF m RNA相对表达量均逐渐上调(P<0.05)。除培养5 d两组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、VEGF m RNA相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)外,其余各时间点实验组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Fibronectin、α-SMA和VEGF m RNA相对表达量均显著高于对照组(P<0.05)。结论 h AMSCs具有MSCs特征,且体外增殖能力良好,可作为组织工程种子细胞来源;体外诱导后韧带成纤维细胞及血管生成相关特异性基因表达上调,韧带成纤维细�
- 邹刚李豫皖金瑛朱喜忠杨继滨王胜民尤奇熊华章刘毅
- 关键词：人羊膜间充质干细胞VEGF组织工程韧带
- Scleraxis慢病毒基因感染人羊膜间充质干细胞向肌腱细胞的定向分化被引量：6
- 2017年
- 背景:Scleraxis作为肌腱细胞特异性表达分子,不仅参与肌腱祖细胞的聚集及分化,还影响肌腱细胞外基质的形成。人羊膜间充质干细胞具有多向分化潜能,在体外不同诱导条件下可分化为骨、软骨及其他结缔组织。目的:探讨Scleraxis慢病毒基因感染人羊膜间充质干细胞能否向肌腱细胞定向分化并观察其分化效果。方法:取足月产胎盘羊膜组织,两步酶消化法分离人羊膜间充质干细胞并采用倒置相差显微镜观察和流式细胞鉴定。取第3代细胞分3组进行培养,单纯人羊膜间充质干细胞培养组为空白组,人羊膜间充质干细胞经Slclerxis基因慢病毒感染后为过表达组,人羊膜间充质干细胞经不携带Scleraxis基因慢病毒感染后为空质粒组。细胞培养7 d内CCK-8法检测各组细胞增殖能力细胞。细胞培养后3 d和7 d,分别进行实时荧光定量PCR和Western Blot检测评价各组细胞向肌腱细胞定向分化的效果。结果与结论:(1)CCK-8检测显示:培养7 d内,过表达组、空质粒组与空白组细胞在增殖能力上无明显差异(P>0.05);(2)Westen blot检测显示:过表达组Scleraxis蛋白表达水平明显高于空质粒组和空白组(P<0.05);(3)实时荧光定量PCR显示:3 d时,过表达组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、纤连蛋白及肌腱蛋白C m RNA表达水平明显高于空质粒组(P<0.05),而腱调蛋白的表达与空质粒组无明显差异(P>0.05);7 d时,Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、纤连蛋白、肌腱蛋白C及腱调蛋白的表达水平明显高于空质粒组(P<0.05);(4)结果提示:人羊膜间充质干细胞经Scleraxis慢病毒基因感染后可向肌腱细胞定向分化。
- 朱喜忠刘子铭吴术红熊华章杨继滨李豫皖尤奇金瑛左晨刘毅
- 关键词：干细胞分化人羊膜间充质干细胞SCLERAXIS慢病毒感染肌腱细胞定向分化慢病毒转染
- 临床应用软骨组织工程技术修复关节软骨缺损的进展被引量：8
- 2018年
- 关节软骨缺损在临床中的发病率极高,是导致肢体残障的主要原因,并给社会造成了巨大的经济损失[1]。关节软骨血液供应的贫乏使得其修复显得尤为困难,并长期困扰着广大临床医生。该缺损常表现为顽固性疼痛和进行性关节功能减退,最终可引起退行性骨关节炎[2]。Curl等[3]对美国31 516例膝关节损伤患者行关节镜探查,发现有63%的患者存在不同程度的软骨损伤。
- 尤奇段小军段小军杨柳
- 关键词：关节软骨缺损退行性骨关节炎顽固性疼痛经济损失
- 金骨莲灌胃对兔骨关节炎模型软骨细胞凋亡相关蛋白表达的影响被引量：8
- 2020年
- 背景:金骨莲胶囊为传统的苗药组方,其成分主要包含金铁锁、汉桃叶等成分,既往研究表明该药物具有软骨保护作用,但对其软骨保护的机制还不清楚。目的:探讨金骨莲灌胃治疗骨关节炎的可能机制。方法:从40只家兔中随机挑选10只作为空白对照组,余下的30只家兔以改良Hulth法在兔右侧后膝建立骨关节炎模型,并随机分为骨关节炎模型组(10只)、金骨莲灌胃组(10只),p38抑制剂组(10只)。建模7 d后,金骨莲灌胃组给予金骨莲与双蒸水混合液10 mL灌胃[57.5 mg/(kg d)];p38抑制剂组给予兔右侧后膝关节腔注射10μmol/L p38抑制剂(SB203580)0.5 mL,每周1次;空白对照组及骨关节炎模型组仅灌服等量双蒸水,1次/d,干预8周后处死动物取右侧后膝关节股骨髁及胫骨平台。采用Pelletier评分评估软骨损伤情况;苏木精-伊红染色、番红O染色及Mankin评分评估软骨退变情况;Western blot检测软骨组织中P-p38及Cleaved Caspase-3蛋白的表达;实时荧光定量PCR检测各组软骨组织中Bcl-2、Bax mRNA表达。结果与结论:①金骨莲灌胃组Pelletier评分及Mankin评分较骨关节炎模型组及p38抑制剂组明显降低(P<0.05);②金骨莲灌胃组软骨组织中Bax mRNA、Cleaved Caspase-3蛋白表达较骨关节炎模型组及p38抑制剂组明显降低(P<0.05);③金骨莲灌胃组Bcl-2 mRNA的表达较骨关节炎模型组及p38抑制剂组均明显升高(P<0.05);④金骨莲灌胃组软骨组织中P-p38蛋白表达较骨关节炎模型组与p38抑制剂组明显降低(P<0.05);⑤结果表明,金骨莲可抑制骨关节炎模型兔软骨组织中凋亡相关蛋白和P-p38蛋白的表达,从而延缓关节软骨退变。
- 彭旭杨继滨尤奇金瑛张骏葛振邹刚江孔军刘毅
- 关键词：软骨损伤细胞凋亡丝裂原活化蛋白激酶
- 锶元素在骨组织工程研究中的应用与进展被引量：6
- 2019年
- 背景:锶元素在骨组织工程中已得到广泛应用,能够促进成骨细胞分化、抑制破骨细胞的吸收。目的:综述锶元素在骨组织工程中的应用与研究进展。方法:应用计算机检索CNKI数据库、PubMed数据库及Elsevier数据库中收录的相关文献,中文检索词为"锶元素,锶,骨,骨缺损,骨修复,组织工程",英文检索词为"strontium,Sr,bone,bonedefects,bone repair,tissue engineering"。查阅1960年1月至2018年12月期间收录的锶元素在骨组织工程中应用的相关文章,包括综述、基础研究及临床研究,通过阅读文题和摘要进行初步筛选,排除与文章主题不相关的文献,根据纳入标准和排除标准,最终纳入48篇文献进行结果分析。结果与结论:锶元素作为骨组织重要的组成成分,在骨的发育和形成过程中扮演着重要角色。掺锶的骨替代材料已成为目前骨组织工程研究的重点和热点,大量研究证实,锶的掺入能够有效改善骨替代材料的力学性能,提高对成骨细胞的招募能力及分化能力,同时促进体内成骨和成血管能力。但目前的研究还存在一定的不足:不同研究使用的掺锶方法不同,所以研究结果不具有可比性;不同掺锶量所得出的研究结论不同;目前尚无一个比较公认的掺锶浓度可用来诱导成骨分化。
- 张骏尤奇邹刚葛振刘毅
- 关键词：骨组织工程骨修复破骨细胞成骨能力
- 骨形态发生蛋白9基因修饰人羊膜间充质干细胞体外向韧带成纤维细胞分化研究被引量：1
- 2018年
- 目的:探讨骨形态发生蛋白9(BMP9)基因修饰对人羊膜间充质干细胞(h AMSCs)在体外向韧带成纤维细胞(LFs)分化是否有促进作用,并研究其分子机制。方法:体外分离培养h AMSCs及LFs,观察并比较两种细胞形态学差异。经Ad MAX系统体外构建BMP9基因腺病毒载体,经提纯及荧光法病毒滴度测定后转染P3代h AMSCs。实验分为三组,A组:携带绿色荧光蛋白(GFP)的空腺病毒载体转染h AMSCs(h AMSCs-GFP);B组:携带BMP9基因的腺病毒载体转染h AMSCs(h AMSCs-BMP9);C组:韧带成纤维细胞组(LFs)。于体外分别培养7天后使用荧光定量PCR检测并比较各组韧带相关基因Scleraxis(Scx)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、细胞连接素(TNC)、纤维连接蛋白(Fib)及腱调蛋白(Tnmd)m RNA的表达量。使用免疫荧光检测并比较三组细胞体外培养7天后ColⅠ的表达量。结果:在倒置相差显微镜下,h AMSCs原代呈多角形贴壁生长,传代后呈长梭状漩涡状生长。LFs原代呈长梭状贴壁生长,传代后呈漩涡状集落样生长。A、B组细胞转染8 h、24 h后,生长增殖缓慢,轮廓清晰,细胞形态未发生变化。荧光显微镜观察显示A组在转染8 h后可见GFP荧光表达,24 h后表达荧光的数量和强度均增多。实时荧光定量PCR显示,转染7天时B组SCX、Tnmd、ColⅠ、Fib及TNC的表达量均高于A组(P<0.05),而SCX、Fib、TNC及Tnmd的表达量低于C组(P<0.05),ColⅠ的表达量高于C组(P<0.05)。荧光免疫组化显示,转染7天后,B组ColⅠ的表达量均高于A组和C组。结论:BMP9基因可促进h AMSCs向LFs定向分化,并促进韧带特异性基因的表达和细胞外基质的产生,为h AMSCs作为韧带组织工程种子细胞提供了实验基础。
- 朱喜忠刘子铭吴术红熊华章金瑛李豫皖杨继滨尤奇刘毅
- 关键词：人羊膜间充质干细胞细胞分化基因工程
- 细胞膜片技术在软骨组织工程中的研究进展被引量：2
- 2018年
- 细胞膜片技术保留了大量自体细胞分泌的细胞外基质,为细胞的增殖和分化提供与体内极度相似的微环境,通过获取完整的膜片而用于修复软骨缺损。同传统的软骨缺损修复方法相比,细胞膜片技术展现了巨大的临床应用潜力,目前细胞膜片技术已经用于临床眼角膜和食道缺损的修复。近年来,对于脱细胞基质膜片和静电纺丝膜片的研究也日益增多,脱细胞基质膜片克服了传统的脱细胞组织块的缺点,有利于细胞的迁移增殖和分化,而且具有免疫耐受的特点。静电纺丝膜片具有纳米结构,类似于天然的软骨细胞外基质,机械特性好,易于操作,利于物质的交换。现阶段,应用膜片技术修复软骨缺损还主要处于实验研究中,临床应用的报道还很少,其中膜片技术还面临着一些不可忽视的问题需要解决。随着生物医学和材料学的发展,未来还需应用更多的创新技术成果不断改进膜片技术,以期早日用于临床软骨缺损的修复。
- 尤奇段小军杨柳金瑛金瑛李豫皖刘毅
- 关键词：软骨组织工程
- 原位组织工程技术修复骨与软骨损伤:应用及存在的问题被引量：4
- 2019年
- 背景:原位组织工程技术较传统的组织工程技术有明显的优势,在促进组织再生和骨、软骨修复方面具有较好的效果。目的:综述原位组织工程技术在骨与软骨修复中的应用及存在的问题。方法:应用计算机检索CNKI数据库、PubMed数据库及Elsevier数据库中发表的相关文献,中文检索词为"原位组织工程技术,骨,软骨,骨缺损,软骨修复,组织工程",英文检索词为"in situ tissue engineering,bone,cartilage,bonedefects,cartilagerepair,tissueengineering",选择2000年1月至2018年11月收录的原位组织工程技术在骨和软骨损伤修复中应用的相关文章,包括综述、基础及临床研究。结果与结论:原位组织工程技术是在传统组织工程技术基础上发展起来的一种用于再生和修复的技术,应用于骨损伤修复取得了良好的成绩,其不依赖外源种子细胞,通过各种新型支架材料并利用其自身特有的结构和理化性质,募集受损部位周边的干细胞迁徙到损伤部位,完成骨损伤的原位修复。原位组织工程技术为软骨损伤修复提供了新的思路和方向,在软骨损伤修复中具有全新应用价值,其主要是利用植入的支架材料来诱导局部微环境,诱导周边细胞迁移到病损部位而发挥修复作用。
- 张骏尤奇邹刚葛振刘毅
- 关键词：软骨细胞因子
- 同种异体幼年软骨微粒移植修复关节软骨缺损:问题及前景被引量：4
- 2017年
- 背景:同种异体幼年软骨微粒制备简单、容易获取,体外培养证实软骨细胞能够迁移、增殖。在美国,同种异体幼年软骨微粒移植技术已经应用于髋、膝、肘、踝关节软骨缺损的修复。目的:对目前应用同种异体幼年软骨微粒移植修复关节软骨缺损的研究现状、应用以及价值进行综述。方法:计算机检索CNKI数据库、PubMed数据库以及Elsevier数据库的相关文献,检索词为"Allogeneic juvenile cartilage particles;cartilage tissue engineering;articular cartilage defects;repair"。查阅1983年10月至2017年6月期间收录的同种异体幼年软骨微粒修复关节软骨缺损的相关文章,包括综述、基础研究以及临床研究。通过阅读文题和摘要进行初步筛选,排除与文章主题不相关的文献,根据纳入标准和排除标准,最终纳入48篇文献进行结果分析。结果与结论:①临床上治疗软骨缺损的方法很多,在短期的随访中有较好的临床效果,能够改善患者的运动功能和缓解疼痛,但最终会导致关节软骨的进行性退变和骨性关节炎的发生;②同种异体幼年软骨微粒不同于传统的异体骨软骨移植术,其具有较强的软骨细胞增殖能力和体外形成组织工程软骨的能力,且抗原性弱,体内移植不会引起强烈的排斥反应。此外,同种异体幼年软骨微粒修复在关节镜下发现软骨缺损后即可行一期手术治疗;③同种异体幼年软骨微粒移植得良好修复效果不仅在基础研究中获得证实,同时在美国临床已经取得重要进展,其潜在的优越性能已逐渐被医生及患者接受;④然而同种异体幼年软骨微粒也存在移植物加工过程污染、疾病传播的风险。虽然该技术在美国临床已经较为广泛应用,但术后追踪随访的资料却很少,尚不能对其长期有效性进行客观评估,未来还需进行长期随访,以期可在临床广泛推广。
- 尤奇刘毅段小军杨柳李豫皖朱喜忠
- 关键词：软骨关节生物材料关节软骨缺损细胞移植
