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金瑛: 作品数：23 被引量：70H指数：6; 供职机构：遵义医学院附属医院更多>>; 发文基金：贵州省科学技术基金国家自然科学基金贵州省科技厅社会发展攻关项目更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

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体外诱导人羊膜间充质干细胞向韧带细胞分化的实验研究被引量：20: 2016年; 目的探讨人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,h AMSCs)是否具有MSCs的特性及经诱导后在体外能否向韧带细胞分化。方法取产妇胎盘通过酶消化法获得h AMSCs,流式细胞术鉴定h AMSCs表型特征。取第3代h AMSCs分别加入含不同诱导液的L-DMEM/F12培养基:A组TGF-β1+b FGF,B组透明质酸(hyaluronic acid,HA),C组TGF-β1+b FGF+HA,D组为空白对照组。倒置相差显微镜观察诱导后21 d各组细胞形态学变化;磺酰罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)比色法检测各组细胞生长活性;诱导后7、14、21 d分别采用免疫组织化学染色及实时荧光定量PCR检测韧带特异性蛋白和基因Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、肌腱蛋白C(tenascin C,TNC)表达。结果流式细胞术鉴定结果表明h AMSCs表达MSCs表型。倒置相差显微镜观察示诱导21 d A、B、C组细胞均呈长梭形纤维细胞样生长,C组细胞形态更单一、有明显方向性且较A组排列更紧凑。SRB比色法检测示各组细胞于培养6 d左右达增殖高峰,6 d时A、B、C组细胞活性均显著高于D组。免疫组织化学结果示:诱导培养7 d,各组均未检测到TNC表达;7、14、21 d A、B、C组Ⅰ型胶原表达均显著高于D组,14、21 d A、B、C组Ⅲ型胶原表达显著高于D组,差异均有统计学意义(P<0.001)。B组Ⅰ型胶原表达以及A、C组Ⅲ型胶原、TNC表达随时间增加均呈逐渐增高趋势,各时间点间比较差异均有统计学意义(P<0.001)。实时荧光定量PCR结果示:诱导培养21 d,C组Ⅰ型胶原、TNC m RNA相对表达量显著高于A、B组,B组Ⅲ型胶原m RNA相对表达量显著高于A、C组,差异均有统计学意义(P<0.05)。A、C组Ⅰ型胶原、TNC以及C组Ⅲ型胶原m RNA相对表达量随时间增加呈逐渐上调趋势,各时间点间比较差异均有统计学意义(P<0.001)。结论 h AMSCs具有MSCs的特性,有良好增殖能力,经体外诱导后韧带特异性基因表达上调,韧带特异性蛋白合成增加,可作为韧带组织; 金瑛李豫皖张承昊吴术红陈代雄刘毅; 关键词：人羊膜间充质干细胞 TGF-Β1 BFGF

细胞膜片技术在软骨组织工程中的研究进展被引量：2: 2018年; 细胞膜片技术保留了大量自体细胞分泌的细胞外基质,为细胞的增殖和分化提供与体内极度相似的微环境,通过获取完整的膜片而用于修复软骨缺损。同传统的软骨缺损修复方法相比,细胞膜片技术展现了巨大的临床应用潜力,目前细胞膜片技术已经用于临床眼角膜和食道缺损的修复。近年来,对于脱细胞基质膜片和静电纺丝膜片的研究也日益增多,脱细胞基质膜片克服了传统的脱细胞组织块的缺点,有利于细胞的迁移增殖和分化,而且具有免疫耐受的特点。静电纺丝膜片具有纳米结构,类似于天然的软骨细胞外基质,机械特性好,易于操作,利于物质的交换。现阶段,应用膜片技术修复软骨缺损还主要处于实验研究中,临床应用的报道还很少,其中膜片技术还面临着一些不可忽视的问题需要解决。随着生物医学和材料学的发展,未来还需应用更多的创新技术成果不断改进膜片技术,以期早日用于临床软骨缺损的修复。; 尤奇段小军杨柳金瑛金瑛李豫皖刘毅; 关键词：软骨组织工程

丝素蛋白三维支架与骨髓间充质干细胞的生物相容性观察: 2016年; 目的制备丝素蛋白三维支架,并与大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）复合培养,观察二者的生物相容性。方法将家用蚕丝反复脱胶,计算脱胶率;将脱胶的蚕丝溶于Li Br溶液中获得丝素蛋白溶液,置于真空冷冻干燥机中作用24 h,获得成型的丝素蛋白三维支架。液体置换法计算支架孔隙率;将该支架与MSCs复合培养,记录支架降解1~8周降解液的p H值变化,MTT法检测支架的细胞毒性（以吸光度值表示）,扫描电镜下观察支架结构及MSCs生长情况。结果平均脱胶率为20.72%,平均支架孔隙率为65.25%。复合培养1~8周降解液p H值分别为6.98、6.93、6.90、6.83、6.72、6.75、6.78、6.76。两组吸光度值比较,P均〉0.05。扫描电镜下观察到该支架具有三维空间结构,孔隙大小分布较均匀;复合物中可见MSCs在支架上生长良好,部分细胞嵌入支架孔隙中,与支架黏附良好;细胞外基质分泌量多,细胞与细胞间、细胞与支架间通过细胞外基质紧密相连。结论成功制备丝素蛋白三维支架,该支架对MSCs无毒性作用,具有良好的生物相容性,是一种理想的韧带组织工程学支架材料。; 范青洪余锋吴术红杨晋金瑛刘毅; 关键词：骨髓间充质干细胞生物相容性

人羊膜间充质干细胞与人脱细胞羊膜支架的生物相容性被引量：6: 2018年; 背景:前交叉韧带损伤越来越多见,传统治疗方式主要是前交叉韧带重建,随着组织工程研究在临床广泛运用,韧带组织工程治疗前交叉韧带损伤已成为目前研究的热点。目的:探讨人羊膜间充质干细胞和人脱细胞羊膜支架的体外生物相容性。方法:采用酶消化法获得人羊膜间充质干细胞并对其进行鉴定。采用酶消化法和化学去污法对新鲜人羊膜进行脱细胞处理,以苏木精-伊红染色以及免疫荧光染色检测细胞成分移除情况以及细胞外基质破坏情况。取第3代人羊膜间充质干细胞,分别使用人脱细胞羊膜浸提液(实验组)与普通L-DMEM/F12培养基(对照组)培养,CCK-8法检测两组细胞增殖能力。人羊膜间充质干细胞与人脱细胞羊膜共培养14 d后,扫描电镜与倒置显微镜观察人脱细胞羊膜上的细胞黏附及生长情况。结果与结论:①倒置相差显微镜观察显示人羊膜间充质干细胞呈漩涡状、贴壁生长,高表达波形蛋白,低表达CK-19,具有成骨、成脂、成软骨诱导分化能力;②苏木精-伊红染色显示人脱细胞羊膜上皮细胞及间充质干细胞已完全移除,细胞外基质成分无明显破坏;免疫荧光染色显示Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原均呈阳性表达;③人脱细胞羊膜浸提液对人羊膜间充质干细胞无细胞毒性,不影响其增殖活性;④倒置相差显微镜及扫描电镜均显示人脱细胞羊膜可以促进人羊膜间充质干细胞增殖及黏附,二者具有良好的生物相容性。; 杨继滨朱喜忠熊华章李豫皖金瑛刘毅; 关键词：人羊膜间充质干细胞干细胞生物相容性韧带损伤前交叉韧带

金骨莲灌胃对兔骨关节炎模型软骨细胞凋亡相关蛋白表达的影响被引量：8: 2020年; 背景:金骨莲胶囊为传统的苗药组方,其成分主要包含金铁锁、汉桃叶等成分,既往研究表明该药物具有软骨保护作用,但对其软骨保护的机制还不清楚。目的:探讨金骨莲灌胃治疗骨关节炎的可能机制。方法:从40只家兔中随机挑选10只作为空白对照组,余下的30只家兔以改良Hulth法在兔右侧后膝建立骨关节炎模型,并随机分为骨关节炎模型组(10只)、金骨莲灌胃组(10只),p38抑制剂组(10只)。建模7 d后,金骨莲灌胃组给予金骨莲与双蒸水混合液10 mL灌胃[57.5 mg/(kg d)];p38抑制剂组给予兔右侧后膝关节腔注射10μmol/L p38抑制剂(SB203580)0.5 mL,每周1次;空白对照组及骨关节炎模型组仅灌服等量双蒸水,1次/d,干预8周后处死动物取右侧后膝关节股骨髁及胫骨平台。采用Pelletier评分评估软骨损伤情况;苏木精-伊红染色、番红O染色及Mankin评分评估软骨退变情况;Western blot检测软骨组织中P-p38及Cleaved Caspase-3蛋白的表达;实时荧光定量PCR检测各组软骨组织中Bcl-2、Bax mRNA表达。结果与结论:①金骨莲灌胃组Pelletier评分及Mankin评分较骨关节炎模型组及p38抑制剂组明显降低(P<0.05);②金骨莲灌胃组软骨组织中Bax mRNA、Cleaved Caspase-3蛋白表达较骨关节炎模型组及p38抑制剂组明显降低(P<0.05);③金骨莲灌胃组Bcl-2 mRNA的表达较骨关节炎模型组及p38抑制剂组均明显升高(P<0.05);④金骨莲灌胃组软骨组织中P-p38蛋白表达较骨关节炎模型组与p38抑制剂组明显降低(P<0.05);⑤结果表明,金骨莲可抑制骨关节炎模型兔软骨组织中凋亡相关蛋白和P-p38蛋白的表达,从而延缓关节软骨退变。; 彭旭杨继滨尤奇金瑛张骏葛振邹刚江孔军刘毅; 关键词：软骨损伤细胞凋亡

骨形态发生蛋白9基因修饰人羊膜间充质干细胞体外向韧带成纤维细胞分化研究: 2018年; 目的:探讨骨形态发生蛋白9(BMP9)基因修饰对人羊膜间充质干细胞(h AMSCs)在体外向韧带成纤维细胞(LFs)分化是否有促进作用,并研究其分子机制。方法:体外分离培养h AMSCs及LFs,观察并比较两种细胞形态学差异。经Ad MAX系统体外构建BMP9基因腺病毒载体,经提纯及荧光法病毒滴度测定后转染P3代h AMSCs。实验分为三组,A组:携带绿色荧光蛋白(GFP)的空腺病毒载体转染h AMSCs(h AMSCs-GFP);B组:携带BMP9基因的腺病毒载体转染h AMSCs(h AMSCs-BMP9);C组:韧带成纤维细胞组(LFs)。于体外分别培养7天后使用荧光定量PCR检测并比较各组韧带相关基因Scleraxis(Scx)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、细胞连接素(TNC)、纤维连接蛋白(Fib)及腱调蛋白(Tnmd)m RNA的表达量。使用免疫荧光检测并比较三组细胞体外培养7天后ColⅠ的表达量。结果:在倒置相差显微镜下,h AMSCs原代呈多角形贴壁生长,传代后呈长梭状漩涡状生长。LFs原代呈长梭状贴壁生长,传代后呈漩涡状集落样生长。A、B组细胞转染8 h、24 h后,生长增殖缓慢,轮廓清晰,细胞形态未发生变化。荧光显微镜观察显示A组在转染8 h后可见GFP荧光表达,24 h后表达荧光的数量和强度均增多。实时荧光定量PCR显示,转染7天时B组SCX、Tnmd、ColⅠ、Fib及TNC的表达量均高于A组(P<0.05),而SCX、Fib、TNC及Tnmd的表达量低于C组(P<0.05),ColⅠ的表达量高于C组(P<0.05)。荧光免疫组化显示,转染7天后,B组ColⅠ的表达量均高于A组和C组。结论:BMP9基因可促进h AMSCs向LFs定向分化,并促进韧带特异性基因的表达和细胞外基质的产生,为h AMSCs作为韧带组织工程种子细胞提供了实验基础。; 朱喜忠刘子铭吴术红熊华章金瑛李豫皖杨继滨尤奇刘毅; 关键词：人羊膜间充质干细胞细胞分化基因工程

同种异体幼年软骨微粒移植修复关节软骨缺损的可行性被引量：2: 2019年; 背景:同种异体幼年软骨微粒制备简单,获取容易,该技术在美国已经进入临床研究阶段,但临床上还处于"黑箱"操作阶段,对于移植的幼年软骨微粒是如何通过生物化学机制和基因信号转导发挥生物学效应,目前还不清楚。目前,中国还没有相关技术的报道。目的:探索同种异体幼年软骨微粒移植修复关节软骨缺损的可行性。方法:从幼年贵州小香猪(陆军军医大学实验动物中心提供)膝关节获取同种异体幼年软骨微粒,体外培养1,3,7 d进行Brdu免疫荧光检测。将同种异体幼年软骨微粒/纤维蛋白凝胶复合物移植于SCID大鼠(陆军军医大学实验动物中心提供)皮下,1个月后取材,进行苏木精-伊红染色、番红染色、免疫组织化学检测。在10只成年贵州小香猪(陆军军医大学实验动物中心提供)膝关节髌骨面制作直径8 mm的软骨缺损,随机分2组干预,实验组软骨缺损处移植同种异体幼年软骨微粒/纤维蛋白凝胶复合物,空白组不移植任何材料,3个月后取材,对修复组织进行苏木精-伊红、番红-固绿、甲苯胺蓝、免疫组织化学检测。结果与结论:(1)在同种异体幼年软骨微粒的体外培养中,第1天见到极少的软骨细胞脱落与增殖;第3天可见少量的软骨细胞脱落与增殖;第7天见到有明显的细胞脱落与增殖,且增殖的细胞分布在切缘周围;(2)皮下移植1个月后,移植的同种异体幼年软骨微粒仍然存活且周围有少量的软骨细胞增殖;(3)软骨缺损修复3个月后,空白组未见明显修复组织;实验组可见明显的修复组织,新生的软骨组织颜色与正常软骨组织颜色相似,且与周围正常软骨组织界面整合良好,细胞分布较均匀;(4)结果表明,同种异体幼年软骨微粒修复关节软骨缺损可取得良好的效果。; 尤奇段小军张骏金瑛彭旭葛振刘毅; 关键词：同种异体关节软骨缺损生物材料纤维蛋白

TGF-β_1联合VEGF对人羊膜间充质干细胞向韧带成纤维细胞体外分化作用的研究被引量：5: 2017年; 目的探讨人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,h AMSCs)是否具有MSCs特性,以及经TGF-β_1和VEGF联合诱导后是否具有向韧带成纤维细胞分化的能力。方法取自愿捐赠的足月产妇胎盘,采用胰蛋白酶胶原酶联合消化法分离培养h AMSCs,流式细胞术检测h AMSCs表型分子,免疫荧光染色检测h AMSCs其角蛋白-19(cytokeratin-19,CK-19)和波形蛋白表达情况。取第3代h AMSCs,分别使用含TGF-β_1和VEGF的L-DMEM/F12成韧带或纤维细胞诱导培养基(实验组)和普通L-DMEM/F12培养基(对照组)培养,细胞增殖-毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测两组细胞增殖能力;培养5、10、15 d分别采用免疫荧光染色及实时荧光定量PCR检测韧带及血管生成相关特异性蛋白和基因表达。结果倒置相差显微镜观察示h AMSCs呈单层贴壁生长;流式细胞术结果示h AMSCs表达MSCs表型分子;免疫荧光染色示h AMSCs高表达波形蛋白、低表达CK-19;h AMSCs具有向成骨、成软骨及成脂细胞分化的能力。CCK-8法检测示,7 d时两组细胞均达增殖高峰,实验组细胞增殖能力于7 d后显著高于对照组(P<0.05)。免疫荧光染色示,培养5、10、15 d时实验组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白(Fibronectin)、细胞连接素(Tenascin-C)表达染色均较对照组增强。实时荧光定量PCR结果示,随时间延长实验组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Fibronectin、α-肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、VEGF m RNA相对表达量均逐渐上调(P<0.05)。除培养5 d两组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、VEGF m RNA相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)外,其余各时间点实验组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Fibronectin、α-SMA和VEGF m RNA相对表达量均显著高于对照组(P<0.05)。结论 h AMSCs具有MSCs特征,且体外增殖能力良好,可作为组织工程种子细胞来源;体外诱导后韧带成纤维细胞及血管生成相关特异性基因表达上调,韧带成纤维细�; 邹刚李豫皖金瑛朱喜忠杨继滨王胜民尤奇熊华章刘毅; 关键词：人羊膜间充质干细胞 VEGF 组织工程韧带

Scleraxis慢病毒基因感染人羊膜间充质干细胞向肌腱细胞的定向分化被引量：6: 2017年; 背景:Scleraxis作为肌腱细胞特异性表达分子,不仅参与肌腱祖细胞的聚集及分化,还影响肌腱细胞外基质的形成。人羊膜间充质干细胞具有多向分化潜能,在体外不同诱导条件下可分化为骨、软骨及其他结缔组织。目的:探讨Scleraxis慢病毒基因感染人羊膜间充质干细胞能否向肌腱细胞定向分化并观察其分化效果。方法:取足月产胎盘羊膜组织,两步酶消化法分离人羊膜间充质干细胞并采用倒置相差显微镜观察和流式细胞鉴定。取第3代细胞分3组进行培养,单纯人羊膜间充质干细胞培养组为空白组,人羊膜间充质干细胞经Slclerxis基因慢病毒感染后为过表达组,人羊膜间充质干细胞经不携带Scleraxis基因慢病毒感染后为空质粒组。细胞培养7 d内CCK-8法检测各组细胞增殖能力细胞。细胞培养后3 d和7 d,分别进行实时荧光定量PCR和Western Blot检测评价各组细胞向肌腱细胞定向分化的效果。结果与结论:(1)CCK-8检测显示:培养7 d内,过表达组、空质粒组与空白组细胞在增殖能力上无明显差异(P>0.05);(2)Westen blot检测显示:过表达组Scleraxis蛋白表达水平明显高于空质粒组和空白组(P<0.05);(3)实时荧光定量PCR显示:3 d时,过表达组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、纤连蛋白及肌腱蛋白C m RNA表达水平明显高于空质粒组(P<0.05),而腱调蛋白的表达与空质粒组无明显差异(P>0.05);7 d时,Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、纤连蛋白、肌腱蛋白C及腱调蛋白的表达水平明显高于空质粒组(P<0.05);(4)结果提示:人羊膜间充质干细胞经Scleraxis慢病毒基因感染后可向肌腱细胞定向分化。; 朱喜忠刘子铭吴术红熊华章杨继滨李豫皖尤奇金瑛左晨刘毅; 关键词：干细胞分化人羊膜间充质干细胞 SCLERAXIS 慢病毒感染肌腱细胞定向分化慢病毒转染

大蒜素对兔膝骨关节炎作用的实验研究被引量：2: 2017年; [目的]探讨大蒜素对兔膝骨关节炎的作用。[方法]将30只家兔随机分为空白对照组、模型对照组和大蒜素组,每组10只;除空白对照组外其余2组按改良Hulth法建立模型,术后开始灌服药物,大蒜素组(大蒜素,128 mg/kg/d)、空白对照组和模型对照组(等量生理盐水20 ml),连用8周。术后8周处死所有家兔取右膝股骨髁大体观察;苏木精-伊红(HE)和番红O(SA-O)染色对股骨髁关节软骨行Mankin评分;采用q RTPCR法检测股骨内侧髁负重区软骨组织interleukin-1β(白细胞介素-1β,IL-1β)、matrix metalloproteinase-3(基质金属蛋白酶-3,MMP-3)和tissue inhibitor of metalloproteases-1(基质金属蛋白酶组织抑制因子-1,TIMP-1)的m RNA相对表达量。[结果]三组之间比较,空白对照组的Mankin评分最低,IL-1β、MMP-3和TIMP-1 m RNA表达量最低,模型对照组和大蒜素组,分别与空白对照组比较,上述指标差异均有统计学意义(P<0.05);与模型对照组比较,大蒜素组Mankin评分降低,IL-1β、MMP-3、TIMP-1 m RNA表达量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]大蒜素能够改善兔膝骨关节炎Mankin评分并能够下调股骨髁关节软骨中IL-1βm RNA、MMP-3m RNA表达,上调TIMP-1 m RNA表达量。; 熊华章刘毅王胜民吴术红邹刚金瑛; 关键词：大蒜素骨关节炎白细胞介素-1Β 基质金属蛋白酶-3 基质金属蛋白酶组织抑制因子-1

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