- FAAP的原核表达、纯化与抗体制备
- 2011年
- 目的构建pET28a-FAAP-H is原核表达载体,表达H is-FAAP融合蛋白,制备FAAP蛋白的多克隆抗体。方法构建pET28a-FAAP-H is原核表达载体,转化到大肠杆菌BL21中并诱导表达H is-FAAP融合蛋白,用纯化的FAAP蛋白免疫昆明小白鼠后,制备多克隆抗体,通过W estern blotting检验抗血清的特异性和灵敏性。结果成功构建pET28a-FAAP-H is原核表达载体。在大肠杆菌BL21中经1 m M的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropy-β-D-thiogalactoside,IPTG)37℃诱导4 h后,融合蛋白有很高水平的表达。W esternblotting结果显示FAAP抗体能够有效地检测人血管内皮脐静脉细胞内FAAP蛋白的表达。结论成功地对FAAP进行了原核表达、纯化,抗FAAP小鼠的多克隆抗体具有较好的特异性,为进一步研究FAAP的结构与功能奠定了坚实的基础。
- 刘新发李镇安王行明郭海峰郭红山王丽丁乃峥
- 关键词：原核表达BLOTTING多克隆抗体
