刘新发
- 作品数：17 被引量：67H指数：6
- 供职机构：中南大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中华医学基金会基金湖南省普通高等学校教学改革研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 多发性骨髓瘤细胞中一个新的Alu超基因家族成员的克隆与分析被引量：2
- 2002年
- 根据Genebank收录的多发性骨髓瘤细胞株 (ARH 77)表达上调ESTAF4 97797设计引物 ,采用半定量RT PCR证实了多发性骨髓瘤患者及正常人骨髓细胞中该expressedsequencetags(EST)存在表达差异 .用ESTAF4 97797作探针筛选人胚肾cDNA文库 ,获得cDNA克隆经测序并用生物信息学方法对该序列进行了初步分析 .AF4 97797在多发性骨髓瘤患者骨髓中确有较高的表达 ,而在正常人骨髓细胞中低表达 .获得的全长cDNA克隆序列长 1 2 4 8bp(Genebank登录号 :AY0 94 6 1 2 ) .生物信息学分析显示该片段全长cDNA编码 4 4个氨基酸的蛋白产物且可能属于Alu家族成员 .基因AY0 94 6 1 2为一个在多发性骨髓瘤中表达上调的新基因 ,其改变可能与多发性骨髓瘤的发生与发展有关 .
- 汤立军胡维新何莉芳范启兰田菁燕刘新发
- 关键词：多发性骨髓瘤细胞基因克隆基因表达
- 10种常见细菌基因检测膜条的研制被引量：1
- 2011年
- 以16S rRNA基因为检测靶基因,设计10种常见细菌的DNA探针,将探针固定于硝酸纤维素膜条;PCR扩增细菌的16S rRNA基因片段并标记生物素后与膜条杂交;采用碱性磷酸酶标记的链亲和素检测生物素标记,以NBT/BCIP显色。该膜条不仅能单独检测10种细菌中的任何一种,也能同时检测5种细菌。该方法具备高通量、低成本、快速、准确等特点,具有良好的临床应用前景。
- 朱飞舟陈利玉刘新发田奇谈成欧阳方丹吴正理陈汉春
- 关键词：基因芯片细菌RRNA
- 食管鳞癌抑癌基因PTEN杂合性缺失和突变分析
- ＜正＞ 目的:探讨10q23.3的LOH（杂合性缺失）及定位在这一区域的抑癌基因PTEN（phos-phatase and tensin homologue deleted on chromosome 10）在原发性食管...
- 吴颜晖陈汉春李新梅刘新发曹燕飞
- 文献传递
- 两种慢性髓系白血病细胞系对干扰素-α的不同反应性
- ＜正＞ 目的:利用两种慢性髓系白血病细胞系（KT-1/A3,K562）研究干扰素-α（IFN-α）治疗慢性髓系白血病（CML）的作用机理。方法:（1）不同浓度IFN-α作用两种细胞,用MTT和软琼脂集落形成实验检测IFN...
- 李新梅陈汉春吴颜晖刘新发曹燕飞
- 文献传递
- 东方田鼠长江亚种和指名亚种基因组DNA序列比较分析
- 根据东方田鼠基因组DNA序列片段（Genbank登录号:AF277394）,用PCR技术扩增东方田鼠长江亚种（Microtus Fortis calamorum）和宁夏指名亚种（Microtus Fortis forti...
- 许冰胡维新杨榕王勇刘新发彭兴华
- 文献传递
- CML细胞系KT-1／A3对INF-α应答蛋白的研究
- 慢性髓系白血病（chronic myeloid leukemia,CML）是起源于骨髓造血多能干细胞恶性增生血液系统疾病。干扰素（interferon,IFN）是由多种细胞产生的具有广泛抗病毒、抗肿瘤和具有免疫调节作用的...
- 张济陈汉春刘新发刘清霞曹燕飞刘佳
- 文献传递
- 两种慢性髓系白血病细胞株对干扰素-α的敏感性被引量：3
- 2003年
- 背景和目的:临床研究表明干扰素-α(interferon-alpha,IFN-α)是造血系统恶性肿瘤和淋巴瘤的有效治疗剂之一。然而,IFN-α仅可使约70%～80%的慢性髓系白血病(chronicmyeloidleukemia,CML)患者获得血液学缓解。不同的CML患者对IFN-α反应性不同的机制尚未阐明。本研究旨在比较两种CML细胞株KA-1/A3、K562对IFN-α的不同敏感性。方法:(1)采用MTT、半固体集落形成和台盼蓝染色液体培养细胞检测,不同浓度IFN-α(100、500、1000、5000和10000u/ml)对KT-1/A3及K562细胞生长的影响;(2)IFN-α(1000u/ml)诱导KT-1/A3、K562细胞48h后,采用流式细胞分析(flowcytometry,FCM)、荧光染色和DNA片段检测细胞凋亡;(3)加入IFN-α(1000u/ml)培养KT-1/A3、K562细胞48h后采用相对定量RT-PCR分析细胞bcr/abl基因表达水平。结果:(1)IFN-α呈剂量依赖性(从100u/ml到10000u/ml)抑制KT-1/A3细胞生长;(2)IFN-α(1000u/ml)诱导48h后使KT-1/A3细胞凋亡率从3.3%升到11.8%,并使KT-1/A3细胞中bcr/abl嵌合基因的表达水平降至对照组的66.7%;(3)IFN-α对K562细胞的生长、凋亡及bcr/abl嵌合基因表达无明显调节效应。结论:不同类型的CML细胞对IFN-α的反应性不同。
- 李新梅陈汉春刘新发吴颜辉曹燕飞
- 关键词：慢性髓系白血病细胞株干扰素-Α敏感性基因表达细胞凋亡
- FAAP的原核表达、纯化与抗体制备
- 2011年
- 目的构建pET28a-FAAP-H is原核表达载体,表达H is-FAAP融合蛋白,制备FAAP蛋白的多克隆抗体。方法构建pET28a-FAAP-H is原核表达载体,转化到大肠杆菌BL21中并诱导表达H is-FAAP融合蛋白,用纯化的FAAP蛋白免疫昆明小白鼠后,制备多克隆抗体,通过W estern blotting检验抗血清的特异性和灵敏性。结果成功构建pET28a-FAAP-H is原核表达载体。在大肠杆菌BL21中经1 m M的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropy-β-D-thiogalactoside,IPTG)37℃诱导4 h后,融合蛋白有很高水平的表达。W esternblotting结果显示FAAP抗体能够有效地检测人血管内皮脐静脉细胞内FAAP蛋白的表达。结论成功地对FAAP进行了原核表达、纯化,抗FAAP小鼠的多克隆抗体具有较好的特异性,为进一步研究FAAP的结构与功能奠定了坚实的基础。
- 刘新发李镇安王行明郭海峰郭红山王丽丁乃峥
- 关键词：原核表达BLOTTING多克隆抗体
- 多发性骨髓瘤细胞中一个Alu超基因家族成员的克隆与表达分析
- ＜正＞ 目的:克隆多发性骨髓瘤恶性相关基因及分析其在多种不同肿瘤及正常组织中的表达。方法:根据Genebank收录的多发性骨髓瘤细胞株（ARH-77）表达上调EST AF497797设计引物,采用半定量RT-PCR证实了...
- 汤立军谢萍芳范启兰田菁燕刘新发胡维新
- 文献传递
- 洞庭湖日本血吸虫疫区东方田鼠生化与分子遗传学标记的初步研究被引量：8
- 2002年
- 目的 建立东方田鼠生化与分子遗传学标记检测法。方法 参考近交系小鼠、大鼠生化遗传标记检测方法 ,对东方田鼠某些同功酶进行活性测定。根据东方田鼠特异DNA序列 ,合成引物 ,扩增东方田鼠基因组DNA ,将PCR产物回收、序列分析并进行生物信息学分析。结果 东方田鼠Trf、Es 3和Ce 2三个生化位点呈现遗传多态性 ,而Id1、Mod 1、Car 2、Gpd 1、Gpi 1、Hbb、Es 1七个生化位点无遗传多态性。用合成的特异引物扩增东方田鼠基因组DNA ,得到了丰富的多态性资料。对其中的 2 0只东方田鼠的扩增产物进行测序并进行多序列比较 ,发现10个等位基因以及 16个单核苷酸多态性 (SNP)位点。结论 初步建立了东方田鼠生化及分子遗传学标记。分子遗传学标记与生化遗传标记相比 ,具有杂合率高、重复性好、易于操作等优点。这些结果为深入研究东方田鼠的遗传背景、生物进化规律积累了基础资料。
- 胡维新杨榕许冰曾海涛刘新发彭兴华
- 关键词：洞庭湖东方田鼠生化遗传标记单核苷酸多态性
