- siRNA靶向干扰GPC3基因慢病毒载体的构建及其对肝癌Huh-7细胞凋亡的影响被引量：2
- 2014年
- 目的构建GPC3基因短发夹干扰RNA(shRNA)慢病毒载体,观察GPC3基因对人肝癌细胞系Huh-7凋亡的影响,探讨GPC3基因影响肝癌细胞生长的机制,为肝癌的基因治疗提供理论基础。方法采用RNA干扰技术转染肝癌细胞系Huh-7,荧光定量PCR检测GPC3基因在多种肝癌细胞株中的表达情况。构建重组靶向GPC3基因的小干扰RNA序列PGC-shRNA-GPC3,以脂质体(lipofectamineTM2000)为载体转染人肝癌细胞系,筛选并建立稳定表达siRNA的细胞株。采用RT-PCR及Western blot检测GPC3 siRNA转染后mRNA表达情况,验证siRNA的干扰效率。流式细胞仪检测阴性对照组、未转染组和转染组细胞凋亡的情况。结果在肝癌细胞株Huh-7中,GPC3基因显示高表达。测序验证PGC-shRNA-GPC3重组质粒构建成功。将重组质粒稳定转染入肝癌细胞株Huh-7后能明显抑制GPC3 mRNA表达水平;同时,流式细胞仪检测发现,GPC3表达下调后,诱导Huh7细胞的凋亡。结论靶向GPC3的siRNA能有效抑制GPC3的表达,并能促进肝癌Huh7细胞凋亡。
- 雷长江龙浩成李磊姚春曾诚郑刚
- 关键词：慢病毒载体肝癌细胞株
- MiR-132靶向YAP抑制肝癌Huh7细胞的生长被引量：2
- 2014年
- 目的研究miR-132靶向YAP后对肝癌Huh7细胞生长的抑制,为临床治疗肝癌的方法提供新的理论依据。方法实验分为三组:未转染miR-132的Huh7细胞组(control组),阴性对照组(miR NC组)以及转染miR-132的Huh7细胞组(miR-132组),通过RT-PCR检测YAP mRNA表达情况;通过流式细胞仪检测细胞凋亡改变;通过Edu检测细胞增殖能力;通过Transwell法检测细胞侵袭能力。结果 RT-PCR检测YAP mRNA发现miR-132可明显抑制YAP基因在肝癌细胞株Huh7中的表达,control组、miR NC组和miR-132组YAP mRNA的相对表达量为1.000 0±0.024 1、0.942 6±0.024 8和0.257 3±0.045 8(P<0.05);流式细胞仪检测发现转染miR-132后能明显促进肝癌Huh7细胞的凋亡,control组、miR NC组和miR-132组Huh7细胞总凋亡为4.03±0.35、4.53±0.26和13.62±0.49(P<0.05);EdU检测发现转染miR-132后肝癌Huh7细胞增殖能力明显受抑制,control组、miR NC组和miR-132组分别为(65.12±1.93)%、(64.02±0.87)%和(42.00±1.26)%(P<0.05);traswell检测结果发现转染miR-132后肝癌Huh7细胞侵袭能力明显受抑制,control组、miR NC组和miR-132组分别为3.35±0.13、0.72±0.06和0.48±0.03(P<0.05)。结论 miR-132具有抑制肝癌细胞生长的作用,并有可能通过靶向YAP而下调其表达起作用。
- 雷长江龙浩成李磊姚春曾诚郑刚
- 关键词：肝癌细胞细胞生长
- 音猬因子在乳腺癌中的表达及其临床意义被引量：2
- 2014年
- 目的观察音猬因子(Shh)在乳腺癌组织中的表达及其临床意义。方法收集2008年1月至2012年12月在武汉市第五医院手术治疗的乳腺癌患者的乳腺癌组织和癌旁正常乳腺组织各46例。采用实时荧光定量PCR法和免疫组织化学染色检测乳腺癌组织及癌旁正常乳腺组织中Shh mRNA和Shh蛋白的表达,并探讨Shh蛋白与乳腺癌临床病理特征的关系。计数资料比较采用χ2检验,计量资料比较采用独立样本t检验或单因素方差分析。结果乳腺癌组织中Shh mRNA表达水平明显高于癌旁正常乳腺组织(1.54±0.47比0.60±0.38,t=-12.02,P=0.000),Shh蛋白阳性表达率也明显高于癌旁正常乳腺组织[69.6%(32/46)比17.4%(8/46),χ2=25.48,P=0.000],并且其表达水平与乳腺癌的临床分期密切相关,患者临床分期越晚,Shh蛋白表达水平越高[Ⅲ期+Ⅳ期∶Ⅰ期+Ⅱ期:77.8%(28/36)比4/10,χ2=5.28,P=0.022]。结论 Shh信号在乳腺癌组织中被激活。Shh异常表达可能与乳腺癌的发生、发展相关,其可以作为一个潜在的肿瘤标志物应用于临床。
- 姚春邵力伟郑刚刘锦修郜朝霞任德发伍龙
- 关键词：乳腺肿瘤
