李印
- 作品数：14 被引量：58H指数：5
- 供职机构：天津医科大学总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市科技支撑计划重点项目更多>>
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- 靶向抑制ERK1/2信号传导通路对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981恶性表型的影响被引量：3
- 2005年
- 背景与目的肺癌的发生和发展是一个多基因调控、多阶段多步骤发生的复杂过程,目前已知信号传导异常在肺癌发生和发展各个阶段都具有重要作用。本研究旨在探讨外源性MEK1/2抑制剂U0126对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中细胞外信号调节激酶ERK1/2表达和活化的影响及细胞恶性生物学行为的影响。方法将具有nm23H1基因杂合性缺失的人高转移大细胞肺癌原代细胞株L9981培养传代,应用蛋白印迹法(Westernblot)和免疫沉淀法,检测U0126对L9981中总ERK1/2和双磷酸化ERK1/2的表达水平,以及ERK1/2相对活性的影响;应用MTT法及改良Boyden小室法分别检测U0126对L9981体外增殖活性及侵袭能力的作用规律。结果不同浓度的U0126作用于L998120min后,随着U0126浓度的增加ERK1/2的相对活性均逐渐下降,不同U0126浓度组间磷酸化ERK1/2表达水平比较均有非常显著性差异(P<0.01);而不同浓度U0126组间总ERK1/2表达水平比较无显著性差异(P=0.387)。相同浓度的U0126作用于L9981不同时间后,随着作用时间的延长,细胞中ERK1/2的相对活性均逐渐下降,各时间组间磷酸化ERK1/2表达水平比较有显著性差异(P<0.01);而各时间组间总ERK1/2表达水平比较无显著性差异(P=0.689)。U0126对L9981细胞株ERK1/2相对活性的作用具有时间和剂量依赖性。不同浓度的U0126作用于L9981后,随着U0126浓度的增加,细胞体外增殖活性随之降低,不同浓度组间比较均有显著性差异(P<0.01)。不同浓度的U0126作用于L9981后,随着U0126浓度的增加,细胞体外侵袭能力随之降低。在U0126浓度为0、10和20μmol/l时三个剂量组间细胞体外侵袭能力比较无显著性差异(P>0.05),而在U0126浓度增加为40和60μmol/l时与U0126浓度为0、10和20μmol/l时细胞体外侵袭能力比较均有显著性差异(P<0.01)。结论ERK1/2信号传导通路特异性抑制剂U0126对人高转移大细胞肺癌细胞株ERK1/2信号传导通路的抑�
- 李印周清华孙芝琳孙泽芳王艳萍覃扬朱文陈晓禾
- 关键词：ERK1/2U0126
- nm23-H_1基因对人肺癌细胞中细胞外信号调节激酶活性的影响被引量：8
- 2004年
- 目的 探讨肿瘤转移抑制基因nm2 3 H1 对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中细胞外信号调节激酶ERK1/2活性的影响。方法 应用特异性识别总ERK1/2 ( p44 /4 2MAPkinase)和双磷酸化ERK1/2( phospho p44 /4 2MAPkinase)的抗体及蛋白印迹法 (Westernblot) ,检测L9981(缺失nm2 3 H1 基因的原代肺癌细胞株 )、L9981 nm 2 3 H1 (转染了nm 2 3 H1 基因的L9981细胞株 )、L9981 PLXSN (转染了空载体的L9981细胞株 )中总ERK1/2和磷酸化ERK1/2的水平。磷酸化ERK 1/2活性应用非放射性免疫沉淀和Westernblot法以及 p44 /4 2MAPkinase分析试剂盒予以检测。 结果 L9981 nm2 3 H1 细胞株中磷酸化ERK 1/2的水平 ,以及ERK1/2活性均显著低于L9981细胞株和L9981 PLXSN细胞株 (P <0 .0 1) ,L9981和L9981 PLXSN细胞株间磷酸化ERK 1/2水平和ERK 1/2活性比较均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。三个细胞株间总ERK1/2水平比较均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 nm2 3 H1 基因可明显靶向地抑制人高转移肺癌细胞株L9981中ERK 1/2的转录表达和ERK 1/2的活性。推测nm2 3 H1 基因的作用机制可能与其抑制了MAPK/ERK信号传导通路有关。
- 李印周清华孙芝琳覃扬朱文王艳萍刘伦旭陈小禾孙泽芳
- 关键词：NM23-H1基因肺癌癌细胞信号传导通路
- 蛋白激酶C抑制剂CalphostinC抑制人高转移大细胞肺癌细胞株侵袭和转移的实验研究
- 2009年
- [目的]探讨以蛋白激酶C(PKC)为靶点应用其特异性抑制剂开发抗肿瘤侵袭与转移靶向药物的可行性。[方法]应用MTT法和改良Boyden小室法分别检测三株肺癌细胞株细胞(L9981、L9981-pLXSN和L9981-nm23-H1)的侵袭力、增殖力;以及加入CalphostinC作用后,三株细胞株细胞侵袭力、增殖力的变化。[结果]L9981和L9981-pLXSN体外侵袭力和增殖活性明显高于转染nm23-H1基因的L9981-nm23-H1肺癌细胞株(P<0.001);L9981和L9981-pLXSN细胞间体外侵袭力和增殖活性则无显著性差异(P>0.05)。用CalphostinC处理三株肺癌细胞株后,细胞体外侵袭力和增殖活性显著下降(P<0.001),但L9981-nm23-H1细胞体外侵袭力和增殖活性仍低于L9981和L9981-pLXSN(P<0.001),而后两者细胞间则无显著性差异(P>0.05)。[结论]PKC抑制剂CalphostinC可明显抑制L9981肺癌细胞株的细胞增殖力和侵袭力;CalphostinC和nm23-H1在影响人高转移大细胞肺癌细胞株细胞体外增殖活性和侵袭力的过程中具有协同和相加作用。
- 聂强杨平玲周清华朱文刘伦旭付军科李定彪李印车国卫
- 关键词：蛋白激酶C抑制剂肺肿瘤大细胞癌细胞株靶向治疗
- nm23-H1通过下调PKC信号通路抑制肺癌细胞侵袭被引量：16
- 2006年
- 目的探讨nm23-H1基因调控肺癌细胞PKC信号通路抑制肺癌侵袭和转移的分子机制。方法应用Western-blot、Boyden-Chamber、MTT法和激光扫描共聚焦显微镜技术分别检测nm23- H1基因转染前后以及PKC抑制剂Calphostin C处理前后人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中胞膜、胞浆PKC的分布变化;体外侵袭力和增殖力的变化;以及细胞中PKC激活转位变化和Ca2+浓度的变化。结果 (1)L9981和L9981-pLXSN细胞中PKCα、PKCβⅡ蛋白在胞膜的表达量明显较L9981- nm23-H1增多(P<0．001),表明其处于活化状态的PKC明显增加;(2)PKCα、PKCβⅡ在L9981及 L9981-pLXSN细胞中主要位于胞核、核周和质膜,明显处于激活转位状态;在L9981-nm23-H1细胞中则主要位于胞浆内,处于无活性状态,前二者胞浆中Ca2+荧光表达强度显著高于后者(P<0．001); (3)L9981-nm23-H1体外增殖力、侵袭力显著低于L9981和L9981-pLXSN(P<0．001),但后二者间比较差异无统计学意义(P>0．05);(4)抑制剂处理后,L9981和L9981-pLXSN细胞中PKCα、PKCβⅡ在胞膜的蛋白表达量和胞浆中的Ca2+荧光表达强度均较处理前明显下降(P<0．001);3株细胞体外增殖力、侵袭力均较处理前明显下降(P<0．001)。结论nm23-H1基因可能通过PKC信号通路来发挥其肿瘤转移抑制作用,细胞内钙离子可能参与了这一过程。
- 聂强周清华朱文刘伦旭付军科李定彪李印车国卫
- 关键词：NM23-H1基因肿瘤侵袭肿瘤转移
- 转染nm23-H_1基因靶向阻断人大细胞肺癌细胞株L9981 Wnt信号传导通路被引量：5
- 2004年
- 目的 探讨nm2 3 H1 基因转染靶向阻断人高转移大细胞肺癌细胞株L9981Wnt信号传导通路的可行性 ,为阐明nm2 3 H1 基因调控肺癌转移抑制的分子机制和靶向治疗提供实验依据。方法 以转染nm 2 3 H1 基因的L9981 nm 2 3 H1 、原代L9981、空载L9981 pLXSN三株人高转移大细胞肺癌细胞为研究对象 ,应用Westernblot检测比较各株肺癌细胞胞浆、胞核中Wnt信号传导通路关键激酶GSK 3 β和 β 连环蛋白表达的变化。结果 ①GSK 3 β在L9981 nm 2 3 H1 肺癌细胞胞浆中表达量IOD( 63 41± 5 41)显著高于L9981( 373 6± 2 98)和L9981 pLXSN( 3 613± 3 83 ) (P <0 .0 0 1) ;②GSK 3 β在L9981 nm2 3 H1 肺癌细胞胞核中表达量IOD( 4 3 5 6± 490 )显著高于L9981( 65 7± 5 7)和L9981 pLXSN ( 70 5± 75 ) (P <0 .0 0 1) ;③β 连环蛋白在L9981 nm 2 3 H1 肺癌细胞胞浆中表达量IOD( 3 64 9± 118)显著高于L9981( 14 0 1± 3 1)和L9981 pLXSN ( 13 5 0± 5 5 )(P <0 .0 0 1) ;④β 连环蛋白在L9981 nm 2 3 H1 肺癌细胞胞核中表达量IOD( 2 945± 68)与L9981( 2 60 4± 2 3 )和L9981 pLXSN( 2 65 2± 5 3 )比较无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;⑤L9981与L9981 pLXSN两者间GSK 3 β和β 连环蛋白在肺癌细胞胞浆和胞核的?
- 付军科周清华朱文王艳萍刘伦旭陈小禾聂强李定彪李印
- 关键词：L9981GSK-3ΒΒ-连环蛋白
- nm23-H1基因转染对人肺癌细胞中Ras-to-MAPK信号传导通路影响的实验研究
- 肺癌的侵袭和转移是肺癌恶性标志和特征,也是导致肺癌病人治疗失败和死亡的主要原因。因此,研究和阐明肺癌侵袭转移的分子机制和信号传导通路必将为肺癌靶向性基因治疗提供新的分子靶点和途径。nm23-H/_1基因已被证明是肿瘤转移...
- 李印
- 关键词：NM23-H1基因ERK信号传导通路
- 文献传递
- 隆凸合并心脏大血管切除重建术治疗局部晚期中心型支气管肺癌被引量：16
- 2006年
- 背景与目的 迄今，同时侵犯隆凸和心脏大血管的局部晚期非小细胞肺癌仍被视为外科手术治疗的禁忌证。本研究的目的是总结我院施行隆凸合并心脏大血管切除重建术治疗84例侵犯隆凸和心脏大血管的局部晚期非小细胞肺癌的临床经验。方法 1988年3月～2004年12月，对84例同时侵犯隆凸和心脏大血管的局部晚期中心型非小细胞肺癌施行隆凸合并心脏大血管切除重建术。本组隆凸、心脏大血管切除重建术式包括：（1）隆凸切除重建合并右肺动脉袖状切除重建袖式右肺上叶切除术（气管-左主支气管-右中间支气管重建）9例；（2）袖式右全肺切除合并上腔静脉切除人造血管重建加部分左心房切除重建术3例；（3）隆凸切除合并左肺动脉袖状切除重建袖式左上叶切除加部分左心房切除重建术3例；（4）隆凸切除合并部分左心房切除重建和右肺动脉袖状切除重建袖式右上叶切除术（左主支气管-气管端端吻合，右中间支气管-气管端侧吻合）10例；（5）隆凸切除合并左肺动脉袖状切除成形左上叶切除术9例；（6）隆凸切除合并左肺动脉袖状切除成形左上叶切除＋主动脉弓鞘膜切除6例；（7）隆凸切除合并右肺动脉袖状切除成形右中上叶切除术3例；（8）隆凸切除合并左肺动脉袖状切除成形左上叶切除、主动脉弓鞘膜切除＋部分左心房切除重建术8例；（9）隆凸切除合并右肺动脉袖状切除成形右上叶切除加部分左心房切除重建术4例；（10）袖式左全肺切除（气管-右主支气管端端吻合）合并部分左心房切除重建术3例；（11）隆凸切除合并右肺动脉袖状切除成形右中上叶切除加上腔静脉切除人造血管重建术23例；（12）袖式右全肺切除（左主支气管-气管端端吻合）合并部分左心房切除术1例；（13）隆凸切除合并右肺动脉袖状切除成形右中上叶切除加�
- 周清华刘斌杨俊杰刘伦旭王允车国卫寇瑛琍陈晓峰陈军付军科李印郭占林周棱罗朝志苏有平
- 关键词：肺肿瘤局部晚期非小细胞肺癌
- nm23-H_1基因转染能上调人肺癌细胞株L9981中GSK-3β激酶活性被引量：5
- 2004年
- 目的 探讨转移抑制基因nm2 3 H1对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中Wnt信号传导激酶GSK 3 β的表达量和活性的影响 ,为全面阐明nm2 3 H1基因调控肺癌转移相关信号传导通路的分子机制提供实验依据。方法 将稳定转染nm 2 3 H1基因的人高转移大细胞肺癌细胞株L9981 nm2 3 H1、原代细胞株L9981和空载体转染细胞株L9981 pLXSN培养传代 ,应用Westernblot分别检测应用 2 0mmol/LLiCl处理前后三个肺癌细胞株胞浆、胞核中GSK 3 β的表达水平 ,应用免疫共沉淀同位素闪烁计数法测定上述肺癌细胞株胞浆和胞核中的GSK 3 β激酶活性。 结果 ( 1)L9981 nm2 3 H1胞浆和胞核中GSK 3 β蛋白表达量分别为( 63 41± 5 41)和 ( 4 3 5 6± 490 )IOD ,L9981 pLXSN分别为 ( 3 613± 3 83 )和 ( 70 5± 75 )IOD ,L9981分别为 ( 373 6± 2 98)和 ( 65 7± 5 7)IOD。三个细胞株间胞浆和胞核中GSK 3 β表达量均有非常显著差异 (P <0 .0 1) ;两两比较 :L9981 nm2 3 H1胞浆和胞核GSK 3 β表达水平均显著高于L9981 pLXSN和L9981(P <0 .0 1) ,而后两者之间比较均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。 ( 2 )L9981 nm2 3 H1胞浆和胞核GSK 3 β激酶活性分别为 ( 2 895 5±2 5 0 9)和 ( 92 47± 92 4)CPM ,L9981 pLXSN分别为 ( 112 41±
- 付军科周清华朱文王艳萍陈小禾车国卫聂强李定彪刘伦旭李印
- 关键词：基因转染肺癌癌细胞L9981GSK-3Β转移抑制基因
- nm23-H_1基因转染前后人肺癌细胞中PKC转位的研究被引量：1
- 2004年
- 目的 探讨nm2 3 H1转染和蛋白激酶C(PKC)特异抑制剂CalphostinC对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981细胞PKC信号转导通路的作用 ,以及nm2 3 H1基因对PKC激活转位的影响。方法 应用激光扫描共聚焦显微镜观察nm 2 3 H1基因转染前后和CalphostinC处理转基因细胞株L9981 nm2 3 H1前后PKC在不同的亚细胞区域的定位情况。结果 ( 1)原代细胞株L9981和空载体细胞株L9981 pLXSN中PKC α、PKC βⅡ主要位于胞核及核周 ,处于激活状态 ;转染nm 2 3 H1基因后的人肺癌细胞株L9981 nm2 3 H1中PKC α、PKC βⅡ主要位于胞浆 ,处于未激活状态。 ( 2 )CalphostinC作用后所有细胞中的PKC均主要位于胞浆中 ,处于未激活状态。结论 ( 1)nm2 3 H1基因可使L9981细胞株中PKC从胞核向胞浆转位 ,从而抑制PKC信号转导。 ( 2 )CalphostinC可使L9981、L9981 pLXSN细胞株中PKC从胞核向胞浆转位 ,从而抑制PKC信号转导。
- 聂强朱文王艳萍陈小禾杨俊杰刘伦旭付军科李定彪李印周清华
- 关键词：NM23-H1基因转染肺癌癌细胞蛋白激酶C抑制剂信号转导
- nm23-H_1基因转染前后人高转移大细胞肺癌细胞株L9981 PKA活性变化的实验研究被引量：3
- 2004年
- 目的 探讨nm2 3 H1基因转染和forskolin对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981PKA活性的影响。方法 应用PKA通路特异激动剂forskolin对人高转移大细胞肺癌原代细胞株L9981、转基因细胞株L9981 nm 2 3 H1 pLXSN和空载体转染细胞株L9981 pLXSN共同培养 ,应用放免法检测forskolin处理后不同时间点三个细胞株PKA的活性变化。结果 ( 1)forskolin处理前L9981、L9981 pLXSN和L9981 nm2 3 H1 pLXSN的PKA活性经F检验有显著性差异 (P <0 .0 1) ;两两比较 :L9981 nm2 3 H1 pLXSN的PKA活性显著高于L9981和L9981 pLXSN(P <0 .0 1) ,而L9981与L9981 pLXSN之间比较无显著性差异 (P >0 .0 5 )。 ( 2 )在同一作用时间 ( 3 0min)下 ,三个细胞株经不同浓度forskolin处理后PKA活性均显著升高 (P <0 .0 1) ,在forskolin浓度为 10 0 μmol/L时PKA活性最高 ,呈剂量依赖关系。 ( 3 )三个细胞株在同一浓度forskolin( 10 0μmol/L)处理下 ,PKA活性随作用时间升高 ,在forskolin作用时间为 3 0min时PKA的活性最高 ,呈时间依赖关系。结论 ( 1)nm2 3 H1基因转染能显著上调人高转移大细胞肺癌细胞株L9981的PKA活性 ,nm2 3 H1作为一种肿瘤转移抑制基因的作用机理与PKA信号通路可能有一定联系 ;( 2 )forskolin能显著上调L9981细胞?
- 李定彪周清华王艳萍朱文陈小禾杨俊杰刘伦旭付军科聂强李印
- 关键词：NM23-H1L9981FORSKOLIN高转移大细胞肺癌
