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蒋逸群
作品数:
1
被引量:5
H指数:1
供职机构:
南京医科大学
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发文基金:
上海市自然科学基金
国家自然科学基金
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
陆健
南京医科大学
金卫
南京医科大学
朱勇
南京医科大学
王瑞兰
南京医科大学
孟潇潇
南京医科大学
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中华危重病急...
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2017
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百草枯体外诱导人外周血中性粒细胞胞外诱捕网形成的实验研究
被引量:5
2017年
目的探讨百草枯(PQ)能否诱导人外周血中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)的形成。方法分离健康者外周血中性粒细胞,苏木素-伊红(HE)染色后进行细胞鉴定;分别采用浓度为O(对照)、200、400、600、800、1000、1200μmol/L的PQ溶液处理细胞,建立PQ中毒的体外模型,应用CCK-8细胞增殖和细胞毒性检测试剂盒检测细胞存活率,选择半数致死量的PQ浓度作为实验干预点。根据细胞活性检测结果进行细胞染毒(PQ染毒组),以未染毒细胞作为对照。采用免疫荧光染色显微成像定性鉴定NETs形成情况;采用PicoGreen核酸定量分析试剂盒检测细胞上清中游离DNA含量;采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测细胞上清中瓜氨酸化组蛋白3(H3Cit)、髓过氧化物酶(MPO)的蛋白表达。结果HE染色鉴定中性粒细胞纯度约95%;经不同浓度PQ建立中毒体外模型后发现,PQ浓度为800μmol/L时细胞存活率为(58±2)%,以该半数致死量作为实验干预点。免疫荧光定性观察显示,对照组中性粒细胞仅有少量H3Cit及MPO表达,无NETs形成;而800μmol/LPQ可以刺激中性粒细胞产生由DNA、H3Cit和MPO形成的NETs。定量结果显示,与对照组比较,PQ染毒组细胞上清中游离DNA含量显著升高(μg/L:2235±462比561±87,P〈0.01);且PQ染毒组细胞上清中H3Cit和MPO蛋白表达量均较对照组明显升高[H3Cit蛋白表达(灰度值):0.23±0.03比0.11±0.01,MPO蛋白表达(灰度值):0.47±0.05比0.21±0.04,均P〈0.05]。结论800μmol/L的PQ可以诱导人外周血中性粒细胞形成NETs。
金卫
陆健
谢晖
蒋逸群
孟潇潇
朱勇
王瑞兰
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百草枯
游离DNA
中毒
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