张颖颖
- 作品数：4 被引量：12H指数：2
- 供职机构：浙江大学医学院病原生物学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人单核-巨噬细胞和中性粒细胞杀灭问号钩端螺旋体能力差异及其机制被引量：2
- 2017年
- 目的 了解人单核-巨噬细胞和中性粒细胞杀灭问号钩端螺旋体（简称钩体）能力差异及其机制.方法 人THP-1单核细胞和HL-60细胞分别用佛波酯（PMA）和全反式维甲酸（ATRA）预处理,使其分化为单核-巨噬细胞和中性粒细胞.采用激光共聚焦显微镜法检测问号钩体黄疸出血群赖型赖株感染THP-1单核-巨噬细胞和HL-60中性粒细胞内总活性氧（ROS）、一氧化氮（NO）水平和游离钙离子浓度（[Ca2＋]i）变化.采用荧光分光光度法检测总ROS、NO抑制剂和胞内游离Ca2＋螯合剂（NAC、SMT和BAPTA/AM）作用前后THP-1单核-巨噬细胞和HL-60中性粒细胞杀灭胞内问号钩体的能力及其差异.结果 THP-1单核-巨噬细胞和HL-60中性粒细胞感染问号钩体后总ROS、NO水平和[Ca2＋]i均显著升高（P〈0.05）,但前者总ROS、NO水平和[Ca2＋]i显著高于后者（P〈0.05）.THP-1单核-巨噬细胞杀灭胞内问号钩体能力显著强于HL-60中性粒细胞（P〈0.05）.抑制胞内总ROS、NO和游离Ca2＋可导致THP-1单核-巨噬细胞杀灭胞内问号钩体能力显著下降（P〈0.05）,但对HL-60中性粒细胞无明显影响.结论 单核-巨噬细胞而非中性粒细胞是感染时清除问号钩体的主要吞噬细胞,高水平总ROS、NO和胞内游离Ca2＋与单核-巨噬细胞杀灭问号钩体能力密切相关.
- 阮萍林旭瑷张颖颖周海丽严杰陈旭
- 关键词：问号钩端螺旋体单核-巨噬细胞INTRACELLULARCA2+
- 不可分型流感嗜血杆菌OMP6优势T-B联合抗原表位及其免疫原性研究被引量：4
- 2017年
- 目的了解无荚膜不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)临床菌株P6外膜蛋白(OMP6)编码基因(omp6)分布及其序列保守性,筛选并鉴定OMP6序列中优势T和B细胞(T-B)联合抗原表位及其免疫原性。方法采用PCR扩增NTHi临床菌株全长omp6基因,T-A克隆后测序。采用生物信息学软件分析OMP6序列保守性与膜定位并预测其T-B联合抗原表位。采用噬菌体展示联合免疫印迹法和ELISA分别检测重组噬菌体PIII蛋白(rPIII)展示的OMP6中T-B联合抗原表位肽免疫原性和免疫反应性。结果 35株NTHi临床菌株均能检出omp6基因,其核苷酸和氨基酸序列相似性分别为98.3%~100%和99.3%~100%。OMP6为外膜表面蛋白,具有OMP6-2-25、OMP6-61-86和OMP6-98-126三个预测T-B联合抗原表位。Western Blot和ELISA结果显示,OMP6-2-25能与NTHi抗血清产生较强的杂交条带,96.9%(59/62)、69.4%(43/62)和74.2%(46/62)NTHi感染患儿血清标本OMP6-2-25、OMP6-61-86和OMP6-98-126抗原表位肽抗体阳性。结论 OMP6是分布广泛且序列保守的NTHi跨膜蛋白,OMP6-2-25为OMP6优势T-B联合抗原表位,可作为NTHi多抗原肽疫苗的候选表位。
- 张颖颖王荣山陈旭金洪星严杰
- 关键词：不可分型流感嗜血杆菌免疫原性
- 钩端螺旋体M23超家族金属内肽酶生物学活性及致病相关性的研究被引量：2
- 2017年
- 目的 了解并确定问号钩端螺旋体黄疸出血型赖株LA2582 和LA2901 基因产物金属内肽酶活性及其致病相关性.方法 采用生物信息学软件分析LA2582 和LA2901 基因结构与功能.构建LA2582 和LA2901 基因胞外区原核表达系统,Ni-NTA 亲和层析法提纯目的重组表达产物rLA2582 和rLA2901.采用分光光度法检测rLA2582 和rLA2901 水解偶氮酪蛋白底物的活性.采用荧光分光光度法检测rLA2582 和rLA2901 水解Dabsyl-Leu-Gly-Gly-Gly-Ala-Edans 荧光标记五肽底物的活性并测定其Km 和Kcat 值.采用SDS-PAGE 和分光光度法分别检测rLA2582 和rLA2901 水解细胞外基质（ECM）分子Ⅰ型胶原蛋白（COL1）、纤维连接蛋白（FN）和刚果红标记弹性蛋白（ELN）的活性.采用实时荧光定量RT-PCR 和Western blot 法分别检测问号钩端螺旋体赖株感染人脐静脉内皮细胞（HUVEC）后LA2582 和LA2901 基因mRNA 和蛋白质表达水平.结果 LA2582 和LA2901 基因产物均为含信号肽和HXH 基质金属蛋白酶基序的锌离子依赖M23 家族Gly-Gly 金属内肽酶.rLA2582 和rLA2901 不能水解偶氮酪蛋白,但能水解荧光五肽底物,其Km 和Kcat 值分别为126. 54μmol/ L 和4. 67/ s 、190. 25 μmol/ L 和4. 86/ s .rLA2582 和rLA2901 具有水解COL1、FN 和ELN 的活性.问号钩体赖株感染HUVEC 后,LA2582 和LA2901 基因mRNA、蛋白质表达水平均显著升高（P〈0. 05）.结论 问号钩体赖株LA2582 和LA2901 基因产物是具有水解ECM 分子活性的锌离子依赖M23 金属内肽酶,与问号钩体侵袭力密切相关.
- 张颖颖葛玉梅方佳琪林旭瑷胡玮琳严杰
- 关键词：问号钩端螺旋体生物学活性
- 细菌胞外金属蛋白酶及其致病作用的研究进展被引量：4
- 2017年
- 细菌胞外金属蛋白酶（bacterial extracellular metalloprotease,BEMP）是一组含金属离子的蛋白水解酶.目前发现的BEMP均为内肽酶,根据酶分子序列和结构差异,分别属于9个金属蛋白酶家族（metalloprotease family）.两价锌离子（Zn2＋）为绝大多数BEMP催化活性中心所需.非致病性异养菌BEMP主要功能是水解环境中蛋白或多肽,以获得氨基酸作为养料.致病性细菌BEMP可协助病原菌侵入宿主以及在宿主体内播散,因而是重要的侵袭性毒力因子.近年来BEMP在细菌致病过程中的作用及其机制受到广泛重视,本文仅就BEMP结构与种类、功能及致病作用作一简要综述.
- 张颖颖严杰葛玉梅
- 关键词：细菌金属蛋白酶致病作用
