杨健
- 作品数：3 被引量：11H指数：2
- 供职机构：南开大学生命科学学院微生物学系更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：环境科学与工程生物学更多>>
- 天津沿岸海水中创伤弧菌的PCR检测和定量被引量：3
- 2010年
- 采用普通PCR方法和SYBRGreen实时定量PCR方法，根据刨伤弧菌16SrDNA和23SrDNA基因间隔序列（internal transcribed spacer，ITS）设计引物，对渤海湾天津沿岸海水中的创伤弧菌进行了定性和定量检测。8个样品采集白天津市汉沽区沿岸海水，采集时间分别为2008年7月、10月和2009年3月、5月。PCR检测结果表明，这些样品都能扩增出276hp的ITS序列，这些序列和GenBank上的同源序列（DQ462478）的相似性为96％一98％。用SYBRGreen实时定量PCR方法测定了8个海水样品，样品中创伤弧菌的浓度为7．12×10^3-8．40×10^5个／L，表明天津沿岸海水存在严重的创伤弧菌污染。
- 杨健赵化冰张明露朱滨朱琳蔡宝立
- 关键词：微生物学创伤弧菌实时定量PCRITS序列
- 渤海湾天津沿岸海水中甲肝病毒的检测和定量被引量：7
- 2009年
- 甲肝病毒（hepatitis A virus,HAV）是能引起传染性甲型肝炎的单链RNA病毒.用常规RT-PCR（反转录PCR）和SYBR Green实时定量RT-PCR方法,根据甲肝病毒保守的VP1-VP2基因序列设计引物,对渤海湾天津沿岸海水中的甲肝病毒进行了检测和定量分析.9个样品取自渤海湾天津塘沽以南沿岸海水,取样时间分别是2007年夏、秋、冬季和2008年春季.海水样品先用小型超滤装置（Millipore Pellicon Mini TFF）或超滤离心管（Millipore Centricon Plus-70）浓缩,然后进行RT-PCR检测.结果表明,从9个海水样品中都能扩增出192 bp的HAV cDNA,这些cDNA的核苷酸序列与GenBank中的同源序列相似性为95%-100%.用SYBR Green实时定量RT-PCR检测了春季和冬季的6个海水样品,结果表明,海水中甲肝病毒的浓度范围为5.35×10^6-4.51×10^7virus particles/L.
- 张明露杨健赵宏朱琳赵化冰蔡宝立
- 关键词：甲肝病毒RT-PCR实时定量RT-PCR
- 萘和苯酚降解菌中儿茶酚2,3-双加氧酶基因的类似性分析及杂种酶构建被引量：1
- 2008年
- 从7个萘降解菌株和5个苯酚降解菌株中经PCR扩增得到12个儿茶酚2,3-双加氧酶(C23O)基因,大小均为924bp.根据DNA序列的类似性,可将这12个C23O基因聚类为3组,此结果与分离菌株的样本来源基本一致.这12个基因均编码307个氨基酸残基的儿茶酚2,3-双加氧酶,序列中都含有9个严格保守的氨基酸残基(Gly30、His153、Leu172、His199、His214、His246、Tyr255、Pro259、Glu265),均属于外切双加氧酶的I.2.A亚家族.通过盒式PCR,用各种萘和苯酚降解菌的C23O基因中心区替换恶臭假单胞菌ND6菌株pND6-1质粒中nahH基因的中心区,得到5个杂种C23O基因,这些基因在pET-E.coli BL21(DE3)系统中表达以后,均能检测到C23O活性,其中中心区来自假单胞菌ND24菌株C23O基因的杂种酶C23O-ND24,其比活力高于对照恶臭假单胞菌ND6菌株的野生型C23O.
- 赵化冰杨健任何山李永君蔡宝立
- 关键词：苯酚降解菌
