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MiR-127-3p靶向MAPK4对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响被引量：7: 2020年; [目的]探讨miR-127-3p对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用。[方法]通过RT-qPCR检测人葡萄膜黑色素瘤组织及细胞、正常组织及细胞中miR-127-3p与MAPK4mRNA的表达;通过Lipofectamine2000说明书将mimic-NC、miR-127-3pmimic、pc-MAPK4质粒分别或联合转染进入SP6.5或OM431细胞;通过双荧光素酶报告检测miR-127-3p与MAPK4复染靶向关系;通过CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell法检测细胞侵袭能力,蛋白印迹法检测AKT/mTOR通路蛋白相对表达水平。[结果]在葡萄膜黑色素瘤组织和细胞系中,miR-127-3p表达明显下调(P<0.01),而MAPK4表达明显上调(P<0.01);miR-127-3p与MAPK43′UTR区存在结合位点,miR-127-3p高表达明显抑制了含有野生型MAPK4质粒的荧光素酶活性(P<0.01),但对突变型MAPK4质粒的荧光素酶活性无影响;与Control组相比,miR-127-3pmimic组SP6.5细胞和OM431细胞增殖均明显下降(P<0.01),凋亡率均明显增加(P<0.01),划痕闭合率均明显降低(P<0.01),每视野侵袭细胞数目均明显减少(P<0.01),p-AKT(T308)/AKT、p-mTORr(S473)/mTOR蛋白表达均明显下调(P<0.01),共转染pc-MAPK4逆转上述变化。[结论]M iR-127-3p通过靶向下调MAPK4来抑制葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡,这可能与抑制AKT/mTOR通路激活有关。; 魏丽连红梅刘鹏刘兴华吴书一刘萌萌; 关键词：葡萄膜黑色素瘤增殖迁移

富集有核细胞法制备肺癌胸腔积液细胞块中EGFR基因突变的检测: 2021年; 目的探讨富集有核细胞层沉淀法制备的非小细胞肺癌(non small cell lung cancer,NSCLS)胸腔积液细胞沉渣块中的表皮生长因子受体(EGFR)基因的突变率。方法选取NSCLS伴恶性胸腔积液患者116例,应用富集有核细胞层沉淀法制备胸腔积液细胞沉渣块,并应用突变扩增阻滞系统(ARMS)法检测胸腔积液细胞沉渣块中的EGFR基因的突变情况。结果EGFR基因突变率为50.86%,其中腺癌突变率为57.83%,非腺癌突变率为33.33%。结论富集有核细胞层沉淀法制备的NSCLS胸腔积液细胞沉渣块中EGFR基因突变率高于传统的离心细胞沉渣法,有效提高了肿瘤细胞的获得率及DNA提取率,为肺癌患者的诊断、治疗及分子生物学检测提供了有效手段。; 刘萌萌孔天东魏丽刘鹏刘兴华乔森焱; 关键词：表皮生长因子受体基因

NFATc1可能通过调节RhoA/ROCK信号通路影响乳腺癌细胞的增殖与凋亡被引量：4: 2020年; 目的:检测NFATc1在乳腺癌患者癌及癌旁组织的表达,并探讨其表达对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法:收集于我院就诊的39例乳腺癌患者癌及癌旁组织,采用RT-PCR技术、免疫印迹及免疫组化染色技术检测NFATc1在乳腺癌组织及癌旁组织中的表达状况。利用小干扰RNA(siRNA)构建NFATc1稳定敲除的MCF7及MDA-MB-231细胞系。利用CCK-8试剂盒及克隆形成实验检测NFATc1敲除对乳腺癌细胞增殖的影响,同时利用Ki67染色检测对照组和NFATc1敲除组乳腺癌细胞中Ki67阳性细胞的比例。此外,采用流式细胞学技术检测NFATc1基因敲除对乳腺癌细胞凋亡的影响,最后利用免疫印迹技术分析各组细胞RhoA/ROCK信号通路的表达状况。结果:NFATc1在乳腺癌患者癌组织中的mRNA及蛋白表达显著增高(P<0.05)。流式细胞学结果表明NFATc1 siRNA干预能够显著促进两组乳腺癌细胞系的凋亡(P<0.05)。此外,Ki67染色、CCK-8实验及克隆形成实验结果表明NFATc1敲除后两种乳腺癌细胞系的增殖能力明显下降(P<0.05)。免疫印迹结果揭示,NFATc1敲除能够明显抑制癌细胞中RhoA/ROCK信号通路的激活(P<0.05)。结论:NFATc1可能通过调控RhoA/ROCK信号通路进而促进乳腺癌细胞增殖,有望成为治疗乳腺癌的新靶点。; 刘萌萌魏丽王轶娟刘鹏刘兴华张明; 关键词：乳腺癌增殖凋亡

DAB显色后去黑色素法在免疫组化中的应用被引量：5: 2019年; 在病理科的日常工作中,经常会遇到含有黑色素的组织,由于未经染色的黑色素呈棕褐色或深褐色的颗粒,特别是在免疫组化的诊断中,DAB的显色与黑色素的颜色相近,会影响免疫组化结果的判读。去除黑色素的方法有很多,文献报道比较常用的是高锰酸钾草酸法和过氧化氢脱色法[1],但两者均为强氧化剂,在先去除黑色素后再进行相关免疫组化染色时,对抗原有一定的损伤。为解决上述问题,本科室在DAB显色后再用强氧化剂去除黑色素既不破坏抗原又能把黑色素完全去除,得到了满意的效果,现报道如下。; 刘兴华刘鹏刘萌萌魏丽刘若慧张萌; 关键词：黑色素氧化剂 DAB 免疫组织化学

基质金属蛋白酶基因突变与老年慢性阻塞性肺疾病发生风险的关系研究被引量：4: 2019年; 目的:探讨基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、MMP-7、MMP-12基因突变与老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)发生风险的相关性。方法:选取2017年11月至2019年4月,在本院就诊的108例COPD患者为COPD组,另选取同期门诊体检的80例健康体检者为对照组。采用聚合酶链式反应-限制性片段多态性(PCR-RFLP)法检测MMP-3基因rs679620位点、MMP-7基因rs11568818位点及MMP-12基因-1082位点的基因分型,比较不同基因型与老年COPD发生风险的关系。Hardy-Weinberg遗传平衡定律验证两组基因型频率是否具有代表性。收集老年COPD患者肺功能及疾病严重程度相关参数并分析其与各基因型的关系。采用Logistic回归法分析影响COPD发生风险的相关因素。结果:MMP-3基因rs679620位点G→A基因突变,MMP-7基因rs11568818位点A→G基因突变,MMP-12基因-1082位点A→G基因突变,各基因型分布均符合Hardy-Weinberg定律。COPD组与对照组MMP-3基因G、A等位基因突变频率分布比较差异无统计学意义(P>0.0167),MMP-7基因G、A等位基因突变频率显著高于对照组(P<0.0167),MMP-12基因G、A等位基因突变频率显著高于对照组(P<0.0167);携带MMP-3基因A突变基因、MMP-7基因G突变基因、MMP-12基因G突变基因的COPD患者吸烟指数、支气管壁厚度、支气管壁分级均分别显著高于GG基因型、AA基因型患者(P<0.05),而相邻动脉直径显著降低(P<0.05);Logistic分析显示MMP-3 AA、MMP-7 GG及MMP-12 GG突变基因型均为COPD发生的危险因素。结论:MMP-3、MMP-7、MMP-12基因突变可能与老年COPD发生有关,突变基因型AA(MMP-3)、GG(MMP-7)、GG(MMP-12)均可增加老年COPD发生风险。; 刘萌萌刘鹏王蔚蔚刘灵乔森焱李艳艳魏丽刘兴华邹燕; 关键词：慢性阻塞性肺疾病基质金属蛋白酶-3 基质金属蛋白酶-7

口腔黏膜黑色素瘤临床病理学分析: 2024年; 目的探讨口腔黏膜黑色素瘤(OMM)的临床病理学特征、遗传学特征、诊断、鉴别诊断及预后相关性。方法收集2016年1月至2021年12月郑州市第三人民医院手术切除且病理明确诊断为OMM的病例共8例,采用免疫组织化学法检测相关蛋白,荧光定量聚合酶链法(PCR)及基因测序检测相关基因突变情况。结果男1例,女7例,年龄30~81岁。临床病损主体表现为口腔黏膜黑色肿物,肿瘤发生于牙龈者6例,上腭者1例,颊黏膜者1例,临床分期均为晚期黑色素瘤(Ⅲ期和Ⅳ期各4例)。镜下瘤细胞呈梭形、上皮样、小蓝圆细胞、透明细胞及多形性等多种形态学表现;8例均表达HMB45、S-100和Melan A蛋白,Ki-67阳性指数10%~60%。BRAF、c-kit、PDGFRa及NRAS基因检测结果显示2例出现NRAS第二外显子突变。随访至2022年1月31日,2例存活,6例死亡。结论OMM罕见,恶性程度高,病死率高,需做到早诊断、早治疗,避免漏诊及误诊。; 魏丽王轶娟王艳刘灵乔森焱刘兴华刘鹏梁宪斌刘萌萌; 关键词：黑色素瘤口腔黏膜突变

miR-138-5p靶向TCF4调节眼葡萄膜黑色素瘤细胞的恶性生物学行为被引量：5: 2021年; 目的探讨miR-138-5p与转录因子4(TCF4)对眼葡萄膜黑色素瘤MuM-2B细胞恶性生物学行为的影响。方法miR-138-5p mimic和pcDNA-TCF4分别或共转染MuM-2B细胞,构建小鼠体内移植瘤模型。RT-qPCR检测细胞转染效率;生物信息学软件预测miR-138-3p和TCF4靶向位点;双荧光素酶报告基因实验验证靶向关系;克隆形成实验检测细胞增殖;Transwell实验检测细胞侵袭能力;Western blot检测TCF4及上皮-间质转化(EMT)相关蛋白表达;免疫组化检测Ki67、VEGF、Vimentin在肿瘤组织中的表达。结果与对照组相比,转染组miR-138-5p和TCF4均升高(P<0.05),且miR-138-5p和TCF4是靶向关系。miR-138-5p过表达通过靶向TCF4抑制MuM-2B细胞增殖和侵袭力并下调E-cadherin和Vimentin蛋白表达量,上调N-cadherin蛋白表达量(P<0.05)。在体内移植瘤中,miR-138-5p过表达减轻肿瘤重量(P<0.05),miR-138-5p过表达下调Ki67、VEGF、Vimentin在肿瘤组织中阳性细胞率(P<0.05)。结论miR-138-5p过表达可下调TCF4水平,进而抑制葡萄膜黑色素瘤MuM-2B细胞增殖、侵袭及EMT。; 魏丽连红梅刘鹏刘兴华吴书一刘萌萌; 关键词：克隆形成细胞侵袭

表现为间质性肾炎的骨髓瘤肾损伤临床病理特征分析: 2021年; 目的探讨表现为肾小管间质性炎症的浆细胞骨髓瘤肾损害的临床病理学特征。方法对1例表现为肾小管间质性炎症的浆细胞骨髓瘤的临床表现、组织形态学特征及电镜特点进行分析并复习相关文献。结果34岁男性患者,以急性肾功能不全入院,肾穿刺活检显示为肾小管间质性肾炎,免疫病理显示κ轻链表达,电镜显示肾小球及肾小管基底膜两侧均有泥沙样物沉积。骨髓穿刺活检明确诊断为浆细胞骨髓瘤。结论浆细胞骨髓瘤会引起多器官损害,当以肾功能不全起病时,须结合光镜、免疫病理及电镜全面综合评估,避免漏诊、误诊、误治。; 刘萌萌王喜凤刘兴华刘鹏王轶娟刘灵魏丽; 关键词：浆细胞骨髓瘤肾小管间质性肾炎肾活检骨髓活检

巨大先天性痣恶变伴增生性结节1例并相关文献复习: 2021年; 目的探讨巨大先天性痣(giant congenital melanocytic nevi,GCMN)细胞恶变伴增生性结节(proliferative nodules,PNs)的组织病理学特点、分子生物学特征、诊断与鉴别诊断。方法对1例GCMN细胞恶变伴PNs的临床表现、组织病理学特征、免疫组化表达及分子生物学检测结果进行分析并复习相关文献。结果患者为成年女性,自出生起臀部皮肤可见大片灰黑色斑,短期内局部出现大小不等的结节并逐渐融合,表面溃疡形成。组织病理学检查显示,皮内先天性痣(congenital melanocytic neiv,CMN)细胞背景中可见形态较一致的尤文肉瘤细胞样细胞多灶结节状增生,大多数结节内细胞轻度异型,核分裂象1个/mm^(2),为PNs;较大结节内细胞明显异型,胞浆嗜酸,核仁明显,核分裂象4个/mm^(2),有坏死,为CMN恶变。免疫组化检测显示,PNs细胞HMB-45(灶+)、Melan-A(+)、P16(+)、S-100蛋白(+)、D型细胞周期蛋白(CyclinD1)(灶+)、增殖核抗原(Ki-67)(+<5%);恶变细胞HMB-45(-)、P16(+)、Melan-A(+)、S-100蛋白(+),CyclinD1(-)、Ki-67(30%+),基因检测显示BRAF V600E突变。结论GCMN恶变及PNs是罕见的黑色素细胞病变,必须充分取材、全面评估并对PNs及黑色素瘤进行鉴别,避免漏诊、误诊和误治。; 刘萌萌魏丽刘鹏刘兴华王轶娟刘灵梁宪斌; 关键词：增生性结节黑色素瘤免疫组化分子检测

脑脊液DNA倍体定量分析在脑转移性恶性肿瘤诊断中的应用: 2024年; 目的通过联合应用液基细胞学检查与DNA倍体定量分析,探讨脑脊液DNA倍体定量分析在脑转移性恶性肿瘤中的应用价值。方法收集临床送检的93例脑脊液标本,经过制片及染色处理后,分别进行液基细胞学检查和DNA倍体定量分析。结果在93例脑脊液标本中,47例发现转移性肿瘤细胞,46例未发现转移性肿瘤细胞。液基细胞学检查的敏感度为70.2%,特异度为84.7%,准确度为77.4%;DNA倍体定量分析的敏感度为97.8%,特异度为100%,准确度为98.9%。结论DNA倍体定量分析在脑脊液检测中敏感度、特异度均高于液基细胞学,两者联合检测可显著提高脑转移性恶性肿瘤的诊断准确率。; 刘兴华刘鹏魏丽王轶娟刘若慧肖博陈新雨乔森焱刘萌萌; 关键词：脑脊液液基细胞学

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刘兴华

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