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周利娟
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1
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供职机构:
安徽师范大学生命科学学院
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发文基金:
国家自然科学基金
安徽省高校省级自然科学研究项目
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相关领域:
生物学
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合作作者
孙福玲
安徽师范大学生命科学学院
王剑
安徽师范大学生命科学学院
王双
安徽师范大学生命科学学院
陈冬生
安徽师范大学生命科学学院
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2016
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果蝇Hsp83多克隆抗体的制备及鉴定
2016年
目的制备和鉴定抗Hsp83蛋白的多克隆抗体。方法利用PCR技术从果蝇cDNA中获得hsp83基因片段,构建重组质粒;将其转化到BL21(DE3)菌株中诱导蛋白表达,利用Ni-NTA亲和法纯化重组蛋白;再将纯化的蛋白免疫BALB/C小鼠制备多克隆抗体;利用免疫印迹法(Western blot)和免疫荧光染色法检测多克隆抗体的特异性。结果构建的pET28ahsp83质粒在大肠杆菌中成功表达了Hsp83融合蛋白,蛋白纯化后作为抗原免疫小鼠,获得了抗Hsp83的多克隆抗体。免疫印迹法和免疫荧光染色法检测显示,抗果蝇Hsp83多克隆抗体具有较高的特异性,并能检测出内源性Hsp83蛋白。果蝇卵巢免疫荧光染色显示,Hsp83蛋白定位在卵巢细胞的细胞质中。结论成功制备了小鼠抗Hsp83蛋白的特异性抗体,此工作为深入研究Hsp83蛋白的功能奠定了基础。
陈冬生
王双
王剑
周利娟
陶小倩
孙福玲
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