吕军华
- 作品数：8 被引量：8H指数：2
- 供职机构：西北农林科技大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省自主创新成果转化重大专项项目转基因生物新品种培育专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- PRRSV Nsp2高变区基因的表达及免疫学特性鉴定被引量：3
- 2011年
- 本研究分别扩增从"高热病"猪体内分离株(TA-12)及美洲经典株ATTC-VR2332 PRRSV Nsp2基因的高变区,亚克隆至表达载体pET-28a中,转化至E.coliBL21中,在IPTG的诱导下进行表达。用SDS-PAGE、Western-blot对表达产物进行鉴定。表达产物纯化后免疫BALB/c小鼠,对其免疫原性进行研究。建立了以纯化的重组蛋白作为包被抗原的间接ELISA,确定了临界值,用建立的ELISA方法并对400份猪血清进行了检测和应用。结果表明,成功的表达了分离株TA-12及ATTC-VR2332 Nsp2基因的高变区。表达蛋白纯化分别免疫小鼠后,获得多克隆抗体,其抗体效价均为1∶100000。优化的ELISA条件为:包被缓冲液为磷酸盐缓冲液,800 ng/孔,血清样品稀释浓度为1∶100。临界值为0.4。血清检测结果表明以两种蛋白为包被抗原均为阳性的血清最多,占到总数的58.5%,前者阳性后者阴性的血清阳性率28%,前者阴性后者阳性的血清阳性率8.75%,二者均为阴性的占到4.75%。为建立区别两种毒株的鉴别诊断间接ELISA试剂盒奠定基础。
- 马利宏肖一红吕军华王伟伟董施伟周恩民
- 关键词：PRRSVNSP2免疫学ELISA
- PRRSV GP5蛋白新型细胞受体:Ⅱ型非肌肉肌球蛋白A亚型重链
- 目的 前期我们利用鼠抗PRRSV GP5蛋白抗体免疫小鼠制备的单克隆抗独特型抗体(Mab2-5G2)能够与Marc-145及猪肺泡巨噬细胞(PAM)结合,并且通过免疫沉淀得到一个分子量约为230kDa的可溶性蛋白.经过氨...
- 高继明肖一红王向鹏孔宁穆阳王承宝肖书奇赵钦马玉萍刘宁宁吕军华Julian A.HISCOX周恩民
- 非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A羧基端在PRRSV感染Marc-145细胞中的作用被引量：3
- 2011年
- 为研究非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A(NMHCⅡ-A)羧基端在猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染Marc-145细胞中的作用,本实验通过提取Marc-145细胞总RNA,RT-PCR方法扩增NMHCⅡ-A羧基端930 bp基因PRA,并进行核苷酸序列测定。将该基因连接到pEGFP-N1载体中,采用双酶切和PCR方法对重组质粒pEGFP-N1-PRA进行鉴定。将pEGFP-N1-PRA转染至Marc-145细胞后感染PRRSV,测定TCID50值及间接免疫荧光(IFA)检测PRA对PRRSV感染Marc-145细胞的影响。TCID50及IFA结果显示,与未转染的Marc-145细胞相比,转染pEGFP-N1-PRA的Marc-145细胞的PRRSV感染能力降低50%。本研究初步证明了PRA编码蛋白在PRRSV感染细胞中的作用,为PRRSV感染机制的研究提供了一定的依据。
- 刘宁宁张璐吕军华高继明吴海珍肖一红周恩民
- 关键词：克隆测序
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF-6基因片段的真核表达
- 用于预防PRRS主要是灭活苗和弱毒苗,灭活苗的效果不稳定,经常导致免疫失败;弱毒苗存在毒力返强的危险,而且有可能传播疫苗毒.相关研究数据显示,PRRSV ORF6(M蛋白)也与病毒中和作用有关,而且M蛋白在细胞免疫中居主...
- 王彤彤吕军华吴海珍周恩民肖一红
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征M蛋白重组杆状病毒
- 非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A单克隆抗体的制备及其靶位点区域的鉴定
- 2012年
- 为制备非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A(NMHC-II A)的单克隆抗体(MAb),本研究将编码NMHC-Ⅱ A羧基端1 651～1 960氨基酸的表达重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞Rosseta中诱导表达,重组蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,分离小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞用PEG 4000介导融合。ELISA方法检测筛选阳性杂交瘤细胞,制备腹水并纯化MAb,以间接免疫荧光和免疫沉淀方法鉴定MAb的特异性,western blot检测MAb靶位点区域。结果表明,通过筛选得到1株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞系,其抗体亚型为IgG1,细胞培养上清和腹水效价分别为1∶2 560和1∶1.0×106;该MAb能够特异性结合相应抗原,并结合Marc-145细胞;western blot结果显示该抗体与NMHC-Ⅱ A的1 812～1 894氨基酸位点结合。该抗体的制备为研究NMHC-Ⅱ A在猪繁殖与呼吸综合征病毒感染细胞中的作用奠定了基础。
- 吴海珍刘宁宁张璐吕军华肖一红周恩民
- 关键词：单克隆抗体
- 非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A羧基端蛋白的真核表达及在猪繁殖与呼吸综合征病毒感染Marc-145细胞中的作用被引量：2
- 2012年
- 前期研究结果证明抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白的抗独特型抗体特异性结合Marc-145细胞上的非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A(Nonmuscle myosin heavy chainⅡ-A,NMHCⅡ-A)蛋白,其结合位点位于NMHCⅡ-A的羧基端。本研究通过真核表达NMHCⅡ-A的羧基端(PRA)蛋白,验证其对PRRSV感染Marc-145细胞的作用。通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达PRA蛋白。Western blot和间接免疫荧光鉴定PRA蛋白的表达及其与Marc-145细胞的结合。通过病毒中和试验、荧光聚焦中和试验和荧光定量PCR检测PRA蛋白对PRRSV感染Marc-145细胞的作用。Western blot和间接免疫荧光结果表明,PRA蛋白在真核细胞中得到成功表达,其最高表达量为接种1个MOI杆状病毒后96h时。PRA蛋白特异性结合Marc-145细胞,使PRRSV感染Marc-145细胞延迟24h并且感染效率降低60%。真核表达的NMHCⅡ-A羧基端蛋白能特异性结合Marc-145细胞并有效降低PRRSV的感染。这些结果为进一步阐明NMHCⅡ-A在PRRSV感染细胞过程中的作用提供了新的依据。
- 吕军华刘宁宁赵钦马玉萍张冲王向鹏胡守彬赵菲菲吴海珍肖一红周恩民
- 关键词：杆状病毒
- 非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A蛋白羧基端在PRRSV感染Marc-145细胞中的作用
- 猪繁殖与呼吸综合征/(porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS/)是由PRRS病毒/(PRRSV/)感染导致的一种急性传染病。该病能引起怀孕母猪流产、早产、死...
- 吕军华
- 关键词：MARC-145细胞
- 文献传递
- 高致病性与传统型PRRSV鉴别诊断间接ELISA方法的建立及初步应用
- 现有的研究结果已经证实,高致病性PRRSV和传统的PRRSV的主要区别是高致病性PRRSV的Nsp2上有不连续的30个氨基酸的缺失,其中29氨基酸是连续的。为建立一种基于血清学水平上高致病性与传统型PRRSV鉴别诊断间接...
- 肖一红吕军华聂力马晓春周恩民
- 关键词：PRRSVELISA
- 文献传递
