纪奇峰
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金“重大新药创制”科技重大专项陕西省科技统筹创新工程计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- PLCE1基因及rs2274223和rs3765524单体型的克隆与表达
- 2016年
- 目的：克隆人PLCE1基因,构建PLCE1 rs2274223和rs3765524 GT（PLCE1 Minor）和AC（PLCE1 Major）单体型真核表达重组载体,研究PLCE1基因多态性及单体型与基因表达的相关性。方法：利用重叠延伸PCR、In-Fusion技术构建PLCE1真核表达载体;基于同源重组的双点突变技术改造目的基因;利用基因转染、实时定量PCR和蛋白印迹等技术实现PLCE1表达载体在真核细胞中的过表达及表达水平的鉴定。结果：成功扩增并获得了全长6 927bp的人PLCE1 cDNA并经过DNA测序证实,与NCBI数据库PLCE1参考序列（NM_016341）比较,发现编码区3 554～3 572bp处存在18bp连续碱基插入,其余序列基本匹配。成功构建了PLCE1 Minor和PLCE1 Major两种单体型重组真核表达载体,转染细胞揭示PLCE1 Minor型的mRNA转录和蛋白质表达水平均高于Major型。结论：发现了一种新的PLCE1 mRNA转录本,成功构建了2种单体型真核表达载体;发现PLCE1 rs2274223G-rs3765524T单体型能够促进自身mRNA和蛋白质表达,为进一步揭示PLCE1 SNPs与癌症易感性的关系奠定了基础。
- 李达代鹏王伟张文涛汪钦束毅祝春来纪奇峰梁平颜真
- 关键词：单核苷酸多态性重叠延伸PCR基因克隆基因表达
- 肝癌细胞外泌体miRNA鉴定及hsa-miR-1246功能研究
- 目的：筛选肝癌细胞与正常肝细胞有显著差异表达的miRNA,预测其靶基因与干预信号通路,研究miRNA与肝癌发生发展等相关的功能,为肝癌的早期诊断以及治疗提供依据。方法：PEG富集肝癌细胞与正常肝细胞外泌体并予以鉴定,Il...
- 祝春来纪奇峰王伟汪钦颜真
- 关键词：肝癌外泌体MIRNA信号通路
- PLCE1基因及rs2274223和rs3765524单体型的克隆与表达
- 目的：克隆人PLCE1基因，构建PLCE1 rs2274223和rs3765524 GT(PLCE1 Minor)和AC(PLCE1 Major)单体型真核表达重组载体，研究PLCE1基因多态性及单体型与基因表达的相关性...
- 李达代鹏王伟张文涛汪钦束毅祝春来纪奇峰颜真
- 关键词：单核苷酸多态性重叠延伸PCR基因克隆基因表达
- 文献传递
- 肝细胞癌患者血清外泌体microRNA表达鉴定被引量：4
- 2018年
- 目的:探讨肝癌细胞外泌体中差异表达的microRNAs(miRNAs)在肝细胞癌(HCC)诊断中的应用价值。方法:通过高通量测序筛选肝癌细胞外泌体中差异表达的miRNAs。实时定量PCR验证差异表达分子;检测差异表达的miRNAs在健康人(Health)、慢性乙型肝炎患者(CHB)、肝硬化患者(LC)及乙型肝炎病毒阳性的肝细胞癌患者(HCC)血清外泌体中的表达。结果:高通量测序筛选到肝癌细胞外泌体中差异表达的miRNA共88种,其中58种表达上调,30种表达下调。选择其中8种差异表达的miRNAs进行q RT-PCR验证,结果显示,此8种miRNAs在细胞上清外泌体、细胞内、癌与癌旁组织中的表达趋势与测序结果一致。miR-221-3p和miR-224-5p在HCC组外泌体中的表达水平显著高于Health组、CHB组和LC组(P<0.01),miR-124-3p和let-7a-5p在HCC组外泌体中的表达水平显著低于其他各组(P<0.05)。四个组中,miR-21-5p、miR-191-5p、miR-34a-5p和miR-122-5p的表达水平不存在显著性差异(P>0.05)。结论:血清外泌体中的miR-221-3p、miR-224-5p、miR-124-3p和let-7a-5p可能成为肝细胞癌的候选标志物。
- 纪奇峰祝春来祝春来毛壮汪钦王伟颜真
- 关键词：肝细胞癌外泌体MIRNAS肿瘤标志物
- 肝癌患者体内乙型肝炎病毒基因组BCP/Pre C区基因突变多样性分析被引量：5
- 2017年
- 为研究肝癌患者组织样本中HBV DNA核心启动子区(BCP区)和前C区(Pre C区)的基因突变多样性及其突变规律。收集第四军医大学附属西京医院2015年收治的192例HBV阳性的肝癌患者组织样本,PCR扩增HBV BCP/Pre C区DNA片段并进行测序分析,从测序失败的样本中随机抽取21例,采用构建单克隆文库后测序的方法进行分析。结果显示37.89%(72/190)的HBV阳性肝癌患者体内HBV病毒因呈现多种突变株混合感染的特点而导致PCR产物直接测序失败,经单克隆测序揭示,每一例失败样本的HBV DNA准种池中至少有2~11种突变株共同存在;突变株中缺失突变和插入突变的发生率高达80.95%;其它突变形式按照频率从高到低分别为A1762T/G1764A双突变90.48%,G1756C/T1803A/Δ(1 757~1 765)/Δ(1 824~1 832)四联突变80.95%,T1753C/A1762T/G1764A三联突变57.14%,A1762T/G1764A/G1896A三联突变42.86%,G1756C/Δ(1 757~1 765)双突变28.57%,T1753C/A1762T/G1764A/G1896A四联突变23.81%。由此可见,肝癌患者体内HBV病毒具有BCP/Pre C区DNA突变的多样性,这些缺失与插入突变是导致序列移码与PCR产物测序失败的直接原因。研究结果为HBV持续感染及基因突变检测、相关机制研究和个体化防治奠定了基础。
- 束毅王伟代鹏张文涛成珊李达纪奇峰邱荣鹤刘浩林赵文亮颜真
- 关键词：乙型肝炎病毒基因突变肝癌
