孙明军
- 作品数：43 被引量：45H指数：4
- 供职机构：中国动物卫生与流行病学中心更多>>
- 发文基金：国家奶牛产业技术体系项目国家科技基础性工作专项宁夏回族自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生机械工程更多>>
- 基于不同抗原的犬布鲁氏菌病免疫层析胶体金抗体试纸条的制备和比较
- 2024年
- 为建立针对犬布鲁氏菌病的免疫层析胶体金快速检测方法,利用从犬种布鲁氏菌菌株提纯的膜蛋白和可溶性蛋白,原核表达纯化的外膜蛋白Omp31和BP26以及基于B细胞抗原肽的融合蛋白F14,分别制备了试纸条,然后采用犬布鲁氏菌病阳性和阴性血清,分别对上述试纸条进行敏感性和特异性比较。结果显示:Omp31抗原的敏感性最高,其次是F14和BP26,而全菌膜蛋白和全菌可溶性蛋白的敏感性较差;特异性上,使用由5种抗原制备的胶体金试纸条检测30份犬布鲁氏菌病阴性血清,结果均为阴性;5种试纸条与沙门氏菌、大肠杆菌(O157)、大肠杆菌(H7)、霍乱弧菌、副溶血弧菌、军团菌阳性血清均不发生交叉反应。另外,由F14和BP26制备的试纸条可识别羊布鲁氏菌病阳性血清,而由Omp31、全菌膜蛋白和全菌可溶性蛋白制备的试纸条均不能识别牛、羊布鲁氏菌病阳性血清。综上所述,Omp31、F14和BP26可作为制备犬布鲁氏菌病免疫层析胶体金检测卡的备选抗原。本研究为粗糙型布鲁氏菌引起的布鲁氏菌病的诊断提供了技术支撑。
- 郭晓涵焉鑫邵卫星殷德辉闫昊南文龙樊晓旭孙世雄张培培孙翔翔刘蒙达张皓博孙淑芳孙明军
- 关键词：犬种布鲁氏菌外膜蛋白
- 羊种布鲁氏菌Tat系统底物蛋白ErfK的抗原性和免疫原性研究
- 2024年
- 为分析羊种布鲁氏菌双精氨酸转运系统(twin-arginine translocation system,Tat system)毒力相关底物蛋白L,D-转肽酶ErfK诱导宿主产生的免疫应答情况,首先对布鲁氏菌M28毒株ErfK基因序列(WP_002963714.1)进行生物信息学分析,参考序列设计引物,构建表达载体pET-30a(+)-ErfK,经IPTG诱导表达、亲和层析和镍柱纯化获得目的蛋白;利用SDS-PAGE和Western blot对重组ErfK(rErfK)蛋白进行抗原性鉴定;将rErfK蛋白免疫小鼠,分别在免疫后15、30和45 d收集血清和脾脏,检测蛋白免疫后小鼠的细胞免疫应答和体液免疫应答情况。生物信息学预测结果显示,ErfK蛋白无跨膜结构,为亲水性蛋白,有多个T细胞和B细胞抗原表位;SDS-PAGE和Western blot均可获得25 kDa的蛋白条带,重组蛋白可与布鲁氏菌阳性血清发生反应,证明rErfK有良好的抗原性;小鼠免疫试验结果显示,rErfK组小鼠脾脏CD8^(+)T细胞含量相比PBS组显著上升(P<0.05),且脾脏Th1型细胞因子IL-2、TNF-α、IFN-γ和Th2型细胞因子IL-4转录水平均显著上升(P<0.05),此外,rErfK免疫也能极显著诱导小鼠血清中总IgG和特异性IgG的产生(P<0.01)。上述结果表明,经大肠杆菌表达的布鲁氏菌rErfK蛋白可诱导小鼠产生良好的体液免疫和细胞免疫应答。本研究为基于ErfK蛋白的布鲁氏菌病诊断试剂和亚单位疫苗研发提供了参考依据。
- 吴瑶焉鑫孙明军屈海龙郭晓涵闫昊张培培孙世雄李嘉琪孙翔翔刘蒙达张皓博南文龙南文龙邵卫星王方昆樊晓旭
- 关键词：布鲁氏菌抗原性免疫原性
- 表达猪流行性腹泻病毒保护性抗原重组乳酸杆菌的构建及鉴定被引量：1
- 2018年
- 为开发一种安全有效的新型猪流行性腹泻口服疫苗,将猪流行性腹泻病毒核心保护性抗原基因(COE)插入到穿梭表达载体,并电转化至乳酸杆菌基因工程菌株内,进行诱导培养,通过Western blot能够检测到大小约27 KD的蛋白表达。该重组乳酸杆菌的构建为动物体内免疫试验的开展和新型黏膜免疫疫苗的研发奠定了基础。
- 孙玉章许运斌王宏华孙明军蒋贻海
- 关键词：猪流行性腹泻病毒黏膜免疫口服疫苗
- 正确认识和应用布鲁氏菌虎红平板凝集试验被引量：5
- 2022年
- 布鲁氏菌病是一种由布鲁氏菌引起的全球常见细菌性人兽共患病。在开展布鲁氏菌病诊断、监测、防控等相关工作时,虎红平板凝集试验(rose bengal test,RBT)是最常用的布鲁氏菌抗体检测方法。但是,在实际应用过程中,因对布鲁氏菌抗体特点及RBT特性等缺乏充分理解,导致RBT检测结果被“误用”的情况时有发生。本文将从动物感染布鲁氏菌后产生抗体的种类和特点,抗体凝集反应中存在的“前带现象”和非特异性反应,RBT抗原酸化和标准化对其检测性能的改善,RBT阳性结果需“确证”的起因及“误用”,在不同临床条件下如何使用RBT和解释检测结果等方面作一综述。充分认识和理解RBT的特性,以及在不同临床情形下正确使用RBT及其检测结果,不但可以降低布鲁氏菌病诊断成本,而且还能极大发挥RBT在布鲁氏菌病防控中的作用。
- 邵卫星盖文燕左媛媛孙明军焉鑫孙世雄刘蒙达张研博
- 关键词：布鲁氏菌确证试验
- 一种区分布鲁氏菌A19疫苗株与野毒株的分子标记
- 本发明提供了一种可区分布鲁氏菌A19疫苗株与国内流行野毒株的分子标记，以及检测该标记的的荧光定量PCR引物、探针及检测方法。所提供的分子标记，其核苷酸序列为SEQ ID NO:1。本发明还提供一种用于区分布鲁氏菌A19疫...
- 孙明军刘蒙达樊晓旭孙翔翔邵卫星田莉莉孙淑芳范伟兴
- 文献传递
- 一株犬种布鲁氏菌的分离鉴定及其在巨噬细胞内存活能力的研究
- 2023年
- 为分离鉴定流产犬的致病病原及其生物学特性,本研究从重庆某宠物医院无菌采集流产犬全血2份,将其涂布于布鲁氏菌选择培养基,分别在不含CO_(2)和含7.5%CO_(2)条件下37℃培养72 h,观察菌落形态,并经结晶紫染色,观察细菌类型。按照国家标准鉴定分离菌的生化特性。细菌分离结果显示,在不含CO_(2)和含7.5%CO_(2)的培养箱中2份流产犬全血样品在布鲁氏菌选择培养基上均长出边缘整齐、光滑的圆形菌落,透射光下,菌落呈浅黄色且有光泽;结晶紫染色结果显示分离菌为典型的粗糙型细菌;生化鉴定结果显示,分离株在TSA中的生长不依赖于CO_(2),且不产生H2S,氧化酶和脲酶试验均为强阳性。上述结果表明分离到一株犬种布鲁氏菌,命名为B. canis CQ3。对分离菌进行全基因组测序,利用MAUVE对分离株与GenBank中38株不同种的布鲁氏菌基因组进行比对,并构建分离菌全基因组的进化树。将不同种布鲁氏菌及分离株分别接种于TSB培养基中,通过测定不同时间的OD450nm值绘制各菌株的生长曲线。将各菌株及B. canis CQ3株分别以MOI 100感染小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7,在感染后的不同时间(1 h、24 h、48 h和72 h)收集细胞,经相应处理后涂布TSA平板培养72 h后,经菌落计数分析分离菌株在细胞中的存活能力。全基因组序列比对及进化树结果显示,比对到犬种布鲁氏菌的序列数量最多,且B. canis CQ3株与欧洲分离的犬种布鲁氏菌NR-finland株的亲缘关系最近。生长曲线测定结果显示,在6 h~16 h (对数生长期) B. canis CQ3株的生长速度稍快于羊种布鲁氏菌B. melitensis XJ流行株和牛种布鲁氏菌B. abortus DT流行株;整个生长过程中B. canis CQ3株的生长速度与疫苗株A19和S2基本一致。巨噬细胞感染试验结果显示,感染1 h时,B. canis CQ3株进入巨噬细胞数量多于疫苗株A19和S2、B. melitensis XJ和B. abortus DT株。相比B. melitensis XJ和B. abortu
- 焉鑫陈霞孙世雄田雪邵卫星孙翔翔南文龙南文龙樊晓旭孙淑芳
- 关键词：犬种布鲁氏菌
- 一种牛结核病γ-干扰素ELISA检测用鸡尾酒刺激抗原
- 本发明提供一种鸡尾酒抗原，用作牛结核病γ干扰素ELISA试验第一步的刺激抗原。该鸡尾酒刺激抗原可以替代现有的牛型、禽型PPD刺激抗原，简化检测的步骤，而且还可以用于区分待检测的牛是否经过疫苗免疫或发生了自然感染。本发明所...
- 张喜悦孙明军孙翔翔李阳周晓翠陈爽魏荣
- 风扇在改善雾化过氧化氢消毒中的应用被引量：2
- 2022年
- 目的观察风扇的应用对雾化过氧化氢消毒的影响。方法通过载体定性杀菌试验方法,对风扇在雾化过氧化氢消毒中应用效果进行观察。结果在密闭房间内中心地面放置电风扇,在风扇启动状态下实施过氧化氢喷雾消毒。浓度为75 g/L过氧化氢喷雾量为8 mL/m^(3),作用时间约15 h,所有采样点菌片上枯草杆菌黑色变种芽孢全部无菌生长。在不使用风扇的对照组房间内,过氧化氢喷雾量达到20 mL/m^(3),方可达到上述消毒效果。不用风扇在喷雾量8 mL/m^(3)时,试验台面测得过氧化氢浓度为187.0 mg/m^(3),台面下测得过氧化氢浓度为18.8 mg/m^(3);加入风扇后台面下过氧化氢浓度增加至146.0 mg/m^(3)。结论密闭房间内使用风扇可以促进雾化过氧化氢均匀分布,提高杀菌效果。
- 孙世雄樊晓旭孙明军张皓博田莉莉张培培孙淑芳
- 关键词：风扇消毒效果
- 牛结核病的传播与控制被引量：9
- 2017年
- 牛结核病是由牛分枝杆菌引起的一种慢性细菌性人兽共患病。牛分枝杆菌可在相同或不同的物种之间、动物到人之间自然传播,但在人与动物之间或人与人之间的自然传播则较为罕见。牛结核病从牛到牛传播的主要途径是通过呼吸道传播,封闭条件下同圈传播的效率远高于开放条件下的传播效率。人感染牛结核病的风险主要存在于饲养员、兽医等职业人群中。对于普通大众来说,主要风险是食用未经巴氏消毒的生乳及乳制品。本文分析了该病的几种主要防控手段,包括牛奶巴氏消毒、检疫和扑杀阳性牛、发挥公共卫生部门的作用等,以期为我国牛结核病的防控提供参考。
- 张喜悦孙明军范伟兴
- 关键词：牛结核病牛分枝杆菌人兽共患病
- 一种区分布鲁氏菌A19疫苗株与野毒株的分子标记
- 本发明提供了一种可区分布鲁氏菌A19疫苗株与国内流行野毒株的分子标记，以及检测该标记的的荧光定量PCR引物、探针及检测方法。所提供的分子标记，其核苷酸序列为SEQ ID NO:1。本发明还提供一种用于区分布鲁氏菌A19疫...
- 孙明军刘蒙达樊晓旭孙翔翔邵卫星田莉莉孙淑芳范伟兴
