- 椎间盘髓核细胞应力模型中Piezo1蛋白的表达被引量：4
- 2017年
- 目的探讨新型机械激活性离子通道Piezo1蛋白在人椎间盘髓核细胞应力模型中的表达。方法将人椎间盘髓核细胞分成牵张应力组和牵张应力+Piezo1蛋白抑制剂组,构建人椎间盘髓核细胞体外培养-应力刺激模型,采用多通道细胞牵张应力加载系统FX-4000T处理髓核细胞,两组均加载0、2、12、24、48h的周期性牵张应力。采用RT-PCR、Western-blot技术检测两组Piezo1的表达水平,应用激光共聚焦显微镜检测Piezo1蛋白荧光的强弱。结果 RT-PCR结果显示,牵张应力组给予2h周期性牵张应力时,Piezo1 mRNA表达较给予0h周期性牵张应力时增加,给予24h周期性牵张应力时Piezo1mRNA表达高于其他牵张应力作用时,而给予48h周期性牵张应力时较给予24h周期性牵张应力时降低,差异有显著性(F=13.917,P<0.05)。Western-blot结果显示,牵张应力组给予2h周期性牵张应力时Piezo1蛋白表达较给予0h周期性牵张应力时略有增加,给予24h周期性牵张应力时Piezo1蛋白表达高于其他各组,而给予48h周期性牵张应力时Piezo1蛋白表达较给予24h周期性牵张应力时降低,差异有显著性(F=12.781,P<0.05)。牵张应力+Piezo1蛋白抑制剂组Piezo1mRNA及其蛋白表达均明显小于牵张应力组。Piezo1蛋白表达于髓核细胞的细胞质与细胞核,荧光较强。结论人椎间盘髓核细胞中Piezo1蛋白稳定表达,并且与应力加载时间相关。
- 王天宝李晓飞冷萍马佳超张海宁
- 关键词：椎间盘移位椎间盘髓核细胞
- 慢病毒介导的环氧合酶-2核糖核酸干扰对类风湿性关节炎患者滑膜细胞的影响被引量：2
- 2016年
- 目的 体外筛选设计并合成的抑制效率最佳的短发夹核糖核酸（shRNA）序列,并观察慢病毒介导的环氧合酶-2（COX-2） shRNA对类风湿性关节炎（RA）患者滑膜细胞的影响.方法 首先根据人COX-2 mRNA序列自行设计4对不同的COX-2shRNA序列,然后包装合成分别含有各对序列的慢病毒载体,并将各组慢病毒载体分别转染RA患者滑膜细胞,通过实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）、酶联免疫吸附试验法（ELISA）分别检测转染后细胞基因水平及蛋白质水平的变化,从而筛选最佳抑制序列.结果 以慢病毒为载体介导的COX-2 shRNA基因转染滑膜细胞后,未观察到对细胞生长速度及细胞形态有明显负面影响,转染后COX-2 mRNA表达水平显著下降,从0.83±0.09、0.84±0.06降到0.15 ±0.01、0.15 ±0.01 （P＜0.05）,相应组别的前列腺素E2（PGE2）[从（160.96±0.23） ng/L降到（84.44±1.02） ng/L]、血管内皮生长因子（VEGF）[从（93.10±0.84） ng/L降到（57.35±1.04） ng/L]、白细胞介素（IL）-1β[从（19.69 ±0.57） ng/L降到（10.60±0.53） ng/L]、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）[从（31.52 ±0.33） ng/L降到（14.55 ±0.59） ng/L]表达量显著降低（P＜0.05）.结论 慢病毒介导的RNA干扰可以显著抑制RA患者滑膜细胞COX-2的表达,从而降低炎性因子的表达量.
- 张海宁李晓飞张钊杜清峰冷萍王英振
- 关键词：滑膜细胞RNA干扰环氧合酶-2
