- 新型机械激活离子通道蛋白Piezo1通过MAPK／ERK1／2信号通路介导软骨细胞凋亡的机制被引量：18
- 2016年
- 目的探讨新型机械激活离子通道蛋白Piezol是否参与调控关节软骨损伤患者软骨细胞的过度凋亡及Piezol介导的细胞凋亡是否以经典丝裂原激活的蛋白激酶（MAPK）信号通路细胞外反应激酶（ERK）1／2为下游信号通路启动细胞凋亡。方法体外培养关节软骨损伤患者退变软骨细胞，利用多通道细胞牵张应力加载系统FX-4000T处理软骨细胞，根据预实验结果分成0、2、12、24、48h牵张应力组和相应的抑制剂红玫瑰毛蜘蛛来源刮刀样机械敏感毒剂4型（GsMTx4）组。实时聚合酶链反应（RT—PCR）检测不同力学条件刺激下各组细胞的Piezol和ERKl／2的表达量，以及抗凋亡基因B细胞淋巴瘤／白血病-2（Bax／Bcl．2）及凋亡效应蛋白（caspase）．3的表达量。免疫荧光定位Piezol蛋白及ERKl／2在软骨细胞的表达位置。检测各分组的凋亡情况。结果RT—PCR结果显示PizeolmRNA在退变软骨中有少量表达，12h表达量增加，24h表达量达到峰值，但48h表达量下降。GsMTx4处理后的各组表达均下降。ERK1／2、Bax／Bcl-2、caspase-3的表达也出现相同趋势，2h加力组早期细胞凋亡率开始增加（0．1981比0．0214，P=0．0137），12h加力组晚期凋亡率开始增加，24h]J1]力组的晚期细胞凋亡率最高，但48h加力组凋亡率比24h加力组有所降低（0．4971比0．7431，q=0．0359）。Piezol蛋白可以在细胞核和细胞质表达，ERK1／2在细胞质表达较多。结论机械敏感性离子通道Piezol参与骨性关节损伤的软骨细胞晚期凋亡过程，且通过MAPK／ERKl／2的经典MAPK信号通路启动细胞的凋亡过程。
- 李晓飞张钊李晓东王天宝张海宁
- 关键词：软骨细胞关节疾病凋亡
- Piezo1蛋白经MAPK／ERK5信号通路介导软骨细胞凋亡的机制研究被引量：15
- 2016年
- 目的探讨骨关节炎患者软骨细胞中机械敏感性离子通道Piezol蛋白经MAPK／ERK5信号通路介导软骨细胞凋亡的机制。方法体外培养骨关节炎患者软骨细胞，应用细胞牵张应力加载系统对软骨细胞分别加载0h、2h、12h、24h和48h的周期性牵张应力，在各加力组加入Piez01的特异性拮抗剂GsMTx4和ERK5的特异性抑制剂BIX02188作为抑制剂组。用免疫荧光激光共聚焦显微镜观察定位Piezol蛋白在软骨细胞中的表达位置；用RT-PCR检测细胞Piez01、ERK5、凋亡相关基因Bcl-2、Bcl-2相关x蛋白（Bcl．associatedXprotein，Bax）及Bcl-2相关促凋亡蛋白（Bcl咀ssociateddeathpromoter，BAD）的mRNA相对表达量；用AV-PI凋亡试剂盒检测细胞凋亡情况。结果激光共聚焦显微镜观察Piez01蛋白可以在细胞核和细胞质表达。RT-PCR检测PizeolmRNA在骨关节炎退变软骨中有少量表达，12h加力组Pize01、ERK5、BAD和BaxmRNA的相对表达量增加，24h达到峰值，48h表达量下降。而Bcl-2mRNA的相对表达量自2h开始下降，12h降到最低值，24h开始升高。Piezol蛋白特异性抑制剂GsMTx4组Pizeol、ERK5、BAD、BaxmRNA的相对表达量均下降，Bcl-2表达量升高。ERK5特异性抑制剂BIX02188组ERK5、BAD、BaxmRNA的相对表达量均下降，Bcl．2表达量升高，Piezol表达量不变。2h加力组细胞凋亡率于早期开始增加，晚期凋亡率无明显增加；12h加力组调亡率于晚期开始增加；24h加力组晚期细胞凋亡率最高；48h加力组晚期凋亡率较24h加力组降低。RT-PCR检测结果显示Piez01、ERK5、Bcl-2、BAD和BaxmRNA的表达量与晚期凋亡具有相似的表达趋势。结论Piezol参与骨关节炎的软骨细胞晚期凋亡过程，且通过MAPK／ERK5信号通路启动细胞凋亡。
- 李晓飞张钊王天宝王兰凤张海宁
- 关键词：离子通道软骨细胞MAP激酶信号系统细胞凋亡
- 慢病毒介导的环氧合酶-2核糖核酸干扰对类风湿性关节炎患者滑膜细胞的影响被引量：2
- 2016年
- 目的 体外筛选设计并合成的抑制效率最佳的短发夹核糖核酸（shRNA）序列,并观察慢病毒介导的环氧合酶-2（COX-2） shRNA对类风湿性关节炎（RA）患者滑膜细胞的影响.方法 首先根据人COX-2 mRNA序列自行设计4对不同的COX-2shRNA序列,然后包装合成分别含有各对序列的慢病毒载体,并将各组慢病毒载体分别转染RA患者滑膜细胞,通过实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）、酶联免疫吸附试验法（ELISA）分别检测转染后细胞基因水平及蛋白质水平的变化,从而筛选最佳抑制序列.结果 以慢病毒为载体介导的COX-2 shRNA基因转染滑膜细胞后,未观察到对细胞生长速度及细胞形态有明显负面影响,转染后COX-2 mRNA表达水平显著下降,从0.83±0.09、0.84±0.06降到0.15 ±0.01、0.15 ±0.01 （P＜0.05）,相应组别的前列腺素E2（PGE2）[从（160.96±0.23） ng/L降到（84.44±1.02） ng/L]、血管内皮生长因子（VEGF）[从（93.10±0.84） ng/L降到（57.35±1.04） ng/L]、白细胞介素（IL）-1β[从（19.69 ±0.57） ng/L降到（10.60±0.53） ng/L]、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）[从（31.52 ±0.33） ng/L降到（14.55 ±0.59） ng/L]表达量显著降低（P＜0.05）.结论 慢病毒介导的RNA干扰可以显著抑制RA患者滑膜细胞COX-2的表达,从而降低炎性因子的表达量.
- 张海宁李晓飞张钊杜清峰冷萍王英振
- 关键词：滑膜细胞RNA干扰环氧合酶-2
