高慧英
- 作品数：5 被引量：6H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省自然科学基金山东省优秀中青年科学家科研奖励基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 吸水链霉菌Streptomyces hygroscopicus 17997中噬菌体基因转移系统的建立及其应用被引量：5
- 2003年
- 由吸水链霉菌Streptomyceshygroscopicus 17997产生的格尔德霉素geldanamycin(GA)属安莎类抗生素 ,具有良好的抗肿瘤和抗病毒活性。本文应用链霉菌温和噬菌体C3 1衍生的KC5 15载体 ,在吸水链霉菌S .hygroscopicus17997中建立并优化了S .hygroscopicus 17997的基因转染体系。利用所建立的基因转染体系 ,以基因阻断技术从S .hygroscopicus 17997基因文库含有多组PKS基因柯斯质粒中 ,鉴定了与GAPKS生物合成相关基因的柯斯质粒 。
- 高慧英王以光高群杰尚广东孙桂芝杨樱
- 关键词：吸水链霉菌基因阻断格尔德霉素生物合成基因
- 肝细胞生成素Cn促进肝干/祖细胞增殖的功能研究
- 2015年
- 目的检测肝细胞刺激因子肝细胞生成素Cn(hepatopoietin Cn,HPPCn)作用肝祖细胞的功能。方法利用MTT法、AnnexinⅤ和PI荧光染色法分别检测WB-F344细胞增殖及其抗凋亡能力,Transwell法检测细胞迁移能力。建立小鼠2AAF-部分肝切除(partial hepatectomy)模型,分析高表达HPPCn对肝干/祖细胞增殖和迁移的影响。结果重组HPPCn蛋白能促进WB-F344细胞的增殖及细胞迁移,低浓度HPPCn能抑制WB-F344细胞的凋亡,并激活WB-F344细胞中Sph K1、Erk1/2以及Stat3信号通路。动物模型检测结果显示,肝特异HPPCn转基因小鼠部分肝切除后,肝卵圆细胞较对照组明显增多,肝再生能力增强。结论 HPPCn能促进肝干/祖细胞增殖和存活,并通过促进肝卵圆细胞增生,提高肝再生能力。
- 李永锋刘勇常菁刘鹏飞高慧英周旭卢俊崔春萍
- 关键词：细胞增殖肝再生细胞运动
- miR-17-92在急性肝脏损伤中的功能和作用被引量：1
- 2016年
- 目的利用体外细胞模型和基因敲低模型评价miR-17-92在急性肝脏损伤中的作用。方法利用慢病毒LV-miR-17-92感染正常人肝细胞系L02,获得稳定过表达miR-17-92肝脏L02细胞,利用四氯化碳模拟肝细胞损失,MTS法检测miR-17-92高表达L02细胞和对照细胞的存活率。利用Alb-cre转基因小鼠和miR-17-92-loxp转基因小鼠杂交,获得肝脏组织特异的miR-17-92基因敲低小鼠。利用四氯化碳和伴刀豆球蛋白A,分别建立两种急性小鼠肝损伤模型。取肝脏组织进行HE染色,眼球取血检测谷丙转氨酶、谷草转氨酶,进而评价miR-17-92在急性肝脏损伤中的功能和作用。结果 Q-PCR结果显示慢病毒感染显著提高了L02细胞中miR-17-92的表达。MTS结果显示四氯化碳处理明显抑制了L02细胞的生长,而与对照组相比,miR-17-92过表达提高了四氯化碳处理后细胞的存活率(P<0.05)。基因组PCR结果和肝脏Q-PCR分析均显示肝脏特异miR-17-92基因敲低小鼠肝脏中miR-17-92的表达显著降低。小鼠腹腔四氯化碳给药能够显著诱导野生型小鼠肝脏miR-17-92的水平,而基因敲低小鼠中miR-17-92表达无明显变化。在四氯化碳和伴刀豆球蛋白A肝脏损伤模型中,与对照组相比,miR-17-92肝脏特异性敲低小鼠的肝脏病理学损伤明显加重,提示miR-17-92可能参与了急性肝损伤的修复过程。结论肝脏损伤能够诱导miR-17-92表达增加,而miR-17-92过表达对四氯化碳诱导的肝细胞损伤具有保护作用,miR-17-92敲除则加重了四氯化碳和伴刀豆球蛋白A诱导的急性肝损伤。因此,miR-17-92在急性肝脏损伤中起保护作用。
- 王若素高慧英赛岩崔春萍
- 关键词：肝损伤CCL4伴刀豆球蛋白A
- 小鼠饲养过程中蛋白质组的整体重稳定性同位素标记
- 2014年
- 文中探讨了稳定同位素代谢标记(SILAC)定量技术在哺乳动物模型上的应用,建立了可用于疾病模型比较蛋白质组学研究的定量内标。用含1%13C6-Lysine的SILAC鼠粮饲养C57BL/6J雌性小鼠,记为F0代,通过与雄性小鼠交配繁殖出F1代,相同方法繁殖出F2代标记小鼠。分离F2代小鼠的大脑、肺脏、心脏、胃、小肠、肝脏、脾脏、肾脏和肌肉组织,提取各组织的全蛋白,进行蛋白酶Lys-C酶切,利用高效液相色谱串联质谱联用技术(LC-MS/MS)进行鉴定和定量分析。对蛋白质定量结果进行高斯拟合确定均值及标准差,得出不同脏器和小鼠整体的标记效率,肝脏的标记效率最高,为96.34%±0.90%;大脑标记效率最低,为92.62%±1.98%,小鼠整体标记效率为95.80%±0.64%,符合SILAC标记效率不低于95%的国际标准。成功地将SILAC方法从微生物和细胞系水平拓展到哺乳动物模型,这为基于动物模型研究疾病发生、发展机制提供了有力工具。
- 樊锋旭高慧英徐忠伟翟琳辉衣泰龙张涛吴飞林崔春萍徐平
- 关键词：C57BL/6J小鼠定量蛋白质组学
- 定量检测肝细胞生成素Cn的双抗体夹心ELISA检测方法的建立
- 2013年
- 目的建立定量检测肝细胞生成素Cn(HPPCn)的双抗体夹心ELISA方法。方法利用杂交瘤方法获得8个抗HPPCn单克隆抗体(mAb),并行SDS-PAGE和Western印迹对纯化抗体特性进行鉴定。利用镀金芯片法对8个抗体进行配对检测。通过方阵滴定法确定包被抗体和酶标抗体的最适工作浓度。以纯化的HPPCn抗原为标准品建立标准曲线。结果得到了8株稳定分泌抗人HPPCn抗体的杂交瘤细胞株,分别为Ab_65-29-6,Ab_3-3-3,Ab_9-34-1,Ab_4-8-12,Ab_7-8-10,Ab_2-30-23,Ab_11-11-12和Ab_12-27-23。8个抗体均能够特异结合HPPCn抗原,其中Ab_65-29-6与细胞中HPPCn结合的特异性最好。经抗体配对检测证实最佳配对组合为:Ab_2-30-23和Ab_4-8-12。包被抗体Ab_2-30-23和识别抗体Ab_4-8-12的最适工作浓度为2.5μg/ml,最适稀释度为1∶2000,标准曲线检测的线性范围为5.0～60 ng/ml。结论制备了可特异性检测人HPPCn蛋白的单克隆抗体,并建立了一种可用于定量检测人HPPCn的双抗体夹心ELISA方法。
- 代学强刘勇吴昊车薇高慧英赛岩吴飞林周旭崔春萍
- 关键词：双抗体夹心酶标抗体
